茶酚硒混合物的小鼠急性毒性试验
作者：谢冰芬 冯公侃 朱孝峰 李志铭 刘宗潮
单位：(中山医科大学肿瘤防治中心 广州 510060)
关键词：茶多酚；亚硒酸钠；急性毒性试验；半数致死剂量
广东药学000434
摘要 目的：观察茶多酚(TP)与亚硒酸钠(sodium selenite)混合物一次给予小鼠的急性毒性反应和死亡情况。方法：一次灌胃(ig)给药，观察14d。结果：测得TP单用一次ig的LD50为2914.45mg/kg；亚硒酸钠单用一次ig的LD50为33.54mg/kg；当TP与亚硒酸钠按7997.3mg∶2.7mg比例做成混合物，测得混合物单次ig的LD50为2510.29mg/kg，其中亚硒酸钠的含量为0.85mg/kg。结论:茶酚硒混合物单次ig的LD50为2510.29mg/kg。
, 百拇医药
Epstein-Barr Virus(EBV)与鼻咽癌密切相关。曾毅[1]认为完整的EBV能诱发上皮细胞癌变。黄腾波等人[2]发现鼻咽癌癌前状态人群血清中各种抗EBV抗原的抗体，如EBV壳抗原抗体IgA(VCA/lgA)、早期抗原抗体IgA(EA/IgA)和DNA酶抗体(EDAb)的检测水平或同时升高，或单项异常升高。因此，如果能控制EBV在人群中的感染和激活，降低人群EBV抗原抗体水平，就有可能预防或降低鼻咽癌的发病率。
国内外的许多研究表明[3～8]，茶叶水、茶提取物和茶多酚(tea polyphenols,TP)具防癌抗癌作用，能改善鼻咽癌等癌症患者的高凝状态和增强抗癌效果；硒化合物亦具防癌抗癌作用，尤其对低血硒人群有效。我们以前的实验证明[9]，茶多酚对Raji细胞EBV的EA抗原表达有抑制作用，亚硒酸钠(sodium selenite)对Raji细胞EBV的EA抗原表达亦有抑制作用。茶多酚和亚硒酸钠联合应用有相互增效作用，可增强对Raji细胞EBV的EA抗原表达的抑制作用。茶多酚还能增强亚硒酸钠对B95-8细胞EBV-VCA表达的抑制作用。本实验观察了茶多酚与亚硒酸钠混合物一次灌胃给予小鼠的急性毒性反应和死亡情况，为推算临床用药提供依据。
, 百拇医药
1 材料和方法
1.1 材料
1.1.1 试药 茶多酚(tea polyphenols，TP)为黄褐色粉末，含量为60%；亚晒酸钠(Sodium selenite)为市售粉末，临用前均用蒸馏水稀释；茶酚硒混合物是按TP 7997.3mg+sodium selenite 2.7mg 混合而成，相当于2693∶1的比例。
1.1.2 动物 普通级昆明种小鼠，体重19～23g，雌雄各半，由中山医科大学动物中心提供。(医学实验动物环境设施合格证号：医动字第26-29B013)
1.2 方法 按卫生部药政局规定程序进行试验，选用昆明种小鼠，雌雄各半，各批实验按随机分组，分为1个对照组和5～6个不同药物剂量组，每组10只小鼠，按0.2ml/10g体重1次ig给药，观察14d，记录小鼠出现中毒症状的时间、表现和死亡时间，对死亡动物进行尸解肉眼观察检查。根据各组的小鼠死亡数，用Bliss法计算动物半数死亡剂量(LD50)及其95%的可信限。
, 百拇医药
1.2.1 茶多酚(TP)的急性毒性试验 将上述小鼠随机分为1个对照组和茶多酚5333.33mg/kg、4000.00mg/kg、3000.00mg/kg、2250.00mg/kg和1687.50mg/kg 5个剂量组，组间距为0.75。
1.2.2 亚硒酸钠的急性毒性试验 随机分为亚硒酸钠60mg/kg、48mg/kg、38.40mg/kg、30.72mg/kg、24.58mg/kg和19.66mg/kg 6个组及一个空白对照组，组间距为0.8。
1.2.3 茶酚硒混合物毒性试验 按TP：sodium selenite=7997.3mg:2.7mg的比例配成混合物。随机分为3400.00mg/kg、2890.00mg/kg、2456.50mg/kg、2088.02mg/kg和1774.82mg/kg 5个剂量组，组间距为0.85。
2 实验结果
, 百拇医药
2.1 TP的急性毒性试验 灌胃给药后10min见小鼠烦躁不安，活动增加，在笼内乱窜；13min后出现唇、肢、尾发绀，活动减少，呼吸困难；15min开始见有小鼠死亡，部分小鼠死亡前出现四肢抽搐。大多数小鼠在20h内死亡，最迟死亡时间不超过72h。肉眼观察尸解各脏器除个别肺有出血点外，其他小鼠的各脏器未见肉眼可见的改变。用Bliss法测得半数致死量(LD50)为2914.45mg/kg，其95%的可信限为2538.83～3345.63mg/kg，详见表1。对照组无一死亡。
表1 TP一次灌胃(ig)的小鼠急性毒性(LD50)(Bliss法) 剂 量
(mg/kg)
对数剂量
(X)
动物数
, http://www.100md.com
(只)
死亡动物数
(只)
死亡率
(%)
机率单位(Y)
LD50及95%可信限
(mg/kg)
5333.33
3.7270
10
10
, http://www.100md.com 100(1.0)
—
4000.00
3.6021
10
8
80(0.8)
5.8416
2914.45
3000.00
3.4771
10
5
, 百拇医药
50(0.5)
5.0000
(2538.83～3345.63)
2250.00
3.3522
10
3
30(0.3)
4.4756
1687.50
3.2272
10
, 百拇医药
0
0(0.0)
2.2 亚硒酸钠的急性毒性试验 灌胃给药后5min开始小鼠活动减少，嗜睡，乏力，吸收逐渐减弱，反应迟钝，继之出现松毛，4h后开始有动物死亡。死亡时间大多数在24h内，72h后不再有动物死亡。肉眼观察尸解各脏器未见明显的病理改变。测得LD50为33.54mg/kg，其95%的可信限为28.69～39.21mg/kg，详见表2。对照组小鼠无一死亡。表2 亚硒酸钠一次灌胃(ig)的小鼠急性毒性(LD50(Bliss法) 剂 量
(mg/kg)
对数剂量
(X)
动物数
, 百拇医药
(只)
死亡动物数
(只)
死亡率
(%)
机率单位(Y)
LD50及95%可信限
(mg/kg)
60.00
1.7782
10
9
90(0.9)
, http://www.100md.com
6.2816
48.00
1.6812
10
8
80(0.8)
5.8416
38.40
1.5843
10
6
60(0.6)
5.2533
, http://www.100md.com
33.54
30.72
1.4874
10
5
50(0.5)
5.0000
(28.69～39.21)
24.58
1.3906
10
2
20(0.2)
, 百拇医药
4.1584
19.66
1.2936
10
1
10(0.1)
3.7184
2.3 茶酚硒混合物的急性毒性试验 灌胃给药20min后出现烦躁不安，在笼内乱窜，几分钟后活动减少，渐渐变为安静，继之呼吸加快，唇、肢、尾发绀，呼吸困难，1h后开始有小鼠死亡，大多数在24h内死亡，72h后不再有动物死亡。肉眼观察尸解各脏器未见有明显的改变。测得LD50为2510.29mg/kg，其95%可信限为2298.05～2742.13mg/kg，详见表3。在LD502510.29mg/kg中，sodium selenite 的实际含量为0.85mg/kg(根据上述TP与sodium selenite的比例计算而得)。而对照组小鼠无死亡，一切活动如常。表3 茶酚硒混合物*一次灌胃(ig)的小鼠急性毒性(LD50)(Bliss法) 剂 量
, 百拇医药
(mg/kg)
对数剂量
(X)
动物数
(只)
死亡动物数
(只)
死亡率
(%)
机率单位(Y)
LD50及95%可信限
(mg/kg)
, 百拇医药 3400.00
3.5315
10
9
90(0.9)
6.2816
2890.00
3.4609
10
7
70(0.7)
5.5244
2510.29
, 百拇医药
2456.50
3.3903
10
6
60(0.6)
5.2533
(2298.05～2742.13)
2088.02
3.3197
10
2
20(0.2)
, http://www.100md.com 4.1584
1774.82
3.2492
10
0
0(0.0)
—
*混合物TP：Se为7997.3mg∶2.7mg
3 讨论
茶多酚主要有效成分为儿茶素类物质。据文献报道，不同工艺制备的茶多酚对大小鼠经口给药的LD50为2496～10000mg/kg。杨校华等[10]报告，茶多酚，雌雄性大小鼠经口的LD50为3160～4640mg/kg。本实验测定茶多酚一次灌胃给予小鼠的LD50为2914.45mg/kg，而亚硒酸钠LD50为33.54mg/kg。根据世界卫生组织(WHO)对化合物经口急性毒性分类标准[11]，茶多酚属于低毒性化合物，而亚硒酸钠为高毒化合物。按茶多酚7997.3mg∶亚硒酸钠2.7mg比例的茶多酚和亚硒酸钠混合物经口给药的LD50为2510.29mg/kg，仍属低毒性混合物，混合物的毒性表现类似TP的毒性，表现为先兴奋后抑制。
, http://www.100md.com
8000mg茶酚硒混合物中含亚硒酸钠2.7mg，按此推算一个LD50剂量(2510.29mg)混合物中含亚硒酸钠0.85mg。此量约为单纯亚硒酸钠LD50剂量(33.54mg)的四十分之一。有关人体对硒的正常需要量尚无统一的标准[12]，认为人体生理需要量为50～350μg/日。可用本实验的LD50剂量或动物的最大耐受量来推算临床用量。
本课题由国家科委“九五”科技攻关课题(编号96-906-01-03)及中山医科大学“211工程”重点学科建设基金(编号98069)联合资助。
参考文献
1.曾毅.鼻咽癌病因研究.中国肿瘤.1996，5(5)：8
2.黄腾波，汪慧民，李景廉，覃柳亮，等.鼻咽癌高危人群癌前病变的确定.癌症.1997，16(2)：81～84
, 百拇医药
3.Chung S. Yang,Zhi-Yuan Wang.Tea and Cancer(Review). Jounal of the National Cancer Institue.1993,85(13)：1038～1049
4.李瑗，覃国忠，覃柳亮，等.绿茶预防肝癌的系列动物实验研究.四川肿癌防治.1997，10(4)：1～4
5.谢冰芬，刘宗潮，郝东磊，等.茶多酚的细菌毒作用和抗癌作用研究.癌症.1998，17(6)：418～420
6.李艳如.茶色素治疗恶性肿瘤的临床观察.现代诊断与治疗.1995，6(增刊)：61
7.韩锐主编.肿瘤化学预防及药物治疗.北京医科大学中国协和医科大学联合出版社，1991：80～87
8.王辉云，区宝祥.硒预防鼻咽癌的实验研究.中华预防医学杂志.1992，26(5)：281～282
, 百拇医药
9.刘宗潮，简少文，李志铭，等.茶多酚与亚硒酸钠联合对EBV抗原表达的抑制作用.中草药.2000，31(2)：110～112
10.杨校华，尔俊仪，孙建析，等.茶多酚急性毒性试验.浙江省医学科学院学报.1992，3(3)：48
11.刘毓谷主编.卫生毒理学基础(高等医学院校教材第二版).人民卫生出版社，1994：60～65
12.孔祥瑞编.必需微量元素的营养.生理及临床意义.安微科学技术出版社，1982：296～314
(收稿：2000-01-19；修回：2000-03-22), 百拇医药
单位：(中山医科大学肿瘤防治中心 广州 510060)
关键词：茶多酚；亚硒酸钠；急性毒性试验；半数致死剂量
广东药学000434
摘要 目的：观察茶多酚(TP)与亚硒酸钠(sodium selenite)混合物一次给予小鼠的急性毒性反应和死亡情况。方法：一次灌胃(ig)给药，观察14d。结果：测得TP单用一次ig的LD50为2914.45mg/kg；亚硒酸钠单用一次ig的LD50为33.54mg/kg；当TP与亚硒酸钠按7997.3mg∶2.7mg比例做成混合物，测得混合物单次ig的LD50为2510.29mg/kg，其中亚硒酸钠的含量为0.85mg/kg。结论:茶酚硒混合物单次ig的LD50为2510.29mg/kg。
, 百拇医药
Epstein-Barr Virus(EBV)与鼻咽癌密切相关。曾毅[1]认为完整的EBV能诱发上皮细胞癌变。黄腾波等人[2]发现鼻咽癌癌前状态人群血清中各种抗EBV抗原的抗体，如EBV壳抗原抗体IgA(VCA/lgA)、早期抗原抗体IgA(EA/IgA)和DNA酶抗体(EDAb)的检测水平或同时升高，或单项异常升高。因此，如果能控制EBV在人群中的感染和激活，降低人群EBV抗原抗体水平，就有可能预防或降低鼻咽癌的发病率。
国内外的许多研究表明[3～8]，茶叶水、茶提取物和茶多酚(tea polyphenols,TP)具防癌抗癌作用，能改善鼻咽癌等癌症患者的高凝状态和增强抗癌效果；硒化合物亦具防癌抗癌作用，尤其对低血硒人群有效。我们以前的实验证明[9]，茶多酚对Raji细胞EBV的EA抗原表达有抑制作用，亚硒酸钠(sodium selenite)对Raji细胞EBV的EA抗原表达亦有抑制作用。茶多酚和亚硒酸钠联合应用有相互增效作用，可增强对Raji细胞EBV的EA抗原表达的抑制作用。茶多酚还能增强亚硒酸钠对B95-8细胞EBV-VCA表达的抑制作用。本实验观察了茶多酚与亚硒酸钠混合物一次灌胃给予小鼠的急性毒性反应和死亡情况，为推算临床用药提供依据。
, 百拇医药
1 材料和方法
1.1 材料
1.1.1 试药 茶多酚(tea polyphenols，TP)为黄褐色粉末，含量为60%；亚晒酸钠(Sodium selenite)为市售粉末，临用前均用蒸馏水稀释；茶酚硒混合物是按TP 7997.3mg+sodium selenite 2.7mg 混合而成，相当于2693∶1的比例。
1.1.2 动物 普通级昆明种小鼠，体重19～23g，雌雄各半，由中山医科大学动物中心提供。(医学实验动物环境设施合格证号：医动字第26-29B013)
1.2 方法 按卫生部药政局规定程序进行试验，选用昆明种小鼠，雌雄各半，各批实验按随机分组，分为1个对照组和5～6个不同药物剂量组，每组10只小鼠，按0.2ml/10g体重1次ig给药，观察14d，记录小鼠出现中毒症状的时间、表现和死亡时间，对死亡动物进行尸解肉眼观察检查。根据各组的小鼠死亡数，用Bliss法计算动物半数死亡剂量(LD50)及其95%的可信限。
, 百拇医药
1.2.1 茶多酚(TP)的急性毒性试验 将上述小鼠随机分为1个对照组和茶多酚5333.33mg/kg、4000.00mg/kg、3000.00mg/kg、2250.00mg/kg和1687.50mg/kg 5个剂量组，组间距为0.75。
1.2.2 亚硒酸钠的急性毒性试验 随机分为亚硒酸钠60mg/kg、48mg/kg、38.40mg/kg、30.72mg/kg、24.58mg/kg和19.66mg/kg 6个组及一个空白对照组，组间距为0.8。
1.2.3 茶酚硒混合物毒性试验 按TP：sodium selenite=7997.3mg:2.7mg的比例配成混合物。随机分为3400.00mg/kg、2890.00mg/kg、2456.50mg/kg、2088.02mg/kg和1774.82mg/kg 5个剂量组，组间距为0.85。
2 实验结果
, 百拇医药
2.1 TP的急性毒性试验 灌胃给药后10min见小鼠烦躁不安，活动增加，在笼内乱窜；13min后出现唇、肢、尾发绀，活动减少，呼吸困难；15min开始见有小鼠死亡，部分小鼠死亡前出现四肢抽搐。大多数小鼠在20h内死亡，最迟死亡时间不超过72h。肉眼观察尸解各脏器除个别肺有出血点外，其他小鼠的各脏器未见肉眼可见的改变。用Bliss法测得半数致死量(LD50)为2914.45mg/kg，其95%的可信限为2538.83～3345.63mg/kg，详见表1。对照组无一死亡。
表1 TP一次灌胃(ig)的小鼠急性毒性(LD50)(Bliss法) 剂 量
(mg/kg)
对数剂量
(X)
动物数
, http://www.100md.com
(只)
死亡动物数
(只)
死亡率
(%)
机率单位(Y)
LD50及95%可信限
(mg/kg)
5333.33
3.7270
10
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, http://www.100md.com 100(1.0)
—
4000.00
3.6021
10
8
80(0.8)
5.8416
2914.45
3000.00
3.4771
10
5
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50(0.5)
5.0000
(2538.83～3345.63)
2250.00
3.3522
10
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30(0.3)
4.4756
1687.50
3.2272
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2.2 亚硒酸钠的急性毒性试验 灌胃给药后5min开始小鼠活动减少，嗜睡，乏力，吸收逐渐减弱，反应迟钝，继之出现松毛，4h后开始有动物死亡。死亡时间大多数在24h内，72h后不再有动物死亡。肉眼观察尸解各脏器未见明显的病理改变。测得LD50为33.54mg/kg，其95%的可信限为28.69～39.21mg/kg，详见表2。对照组小鼠无一死亡。表2 亚硒酸钠一次灌胃(ig)的小鼠急性毒性(LD50(Bliss法) 剂 量
(mg/kg)
对数剂量
(X)
动物数
, 百拇医药
(只)
死亡动物数
(只)
死亡率
(%)
机率单位(Y)
LD50及95%可信限
(mg/kg)
60.00
1.7782
10
9
90(0.9)
, http://www.100md.com
6.2816
48.00
1.6812
10
8
80(0.8)
5.8416
38.40
1.5843
10
6
60(0.6)
5.2533
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33.54
30.72
1.4874
10
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50(0.5)
5.0000
(28.69～39.21)
24.58
1.3906
10
2
20(0.2)
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4.1584
19.66
1.2936
10
1
10(0.1)
3.7184
2.3 茶酚硒混合物的急性毒性试验 灌胃给药20min后出现烦躁不安，在笼内乱窜，几分钟后活动减少，渐渐变为安静，继之呼吸加快，唇、肢、尾发绀，呼吸困难，1h后开始有小鼠死亡，大多数在24h内死亡，72h后不再有动物死亡。肉眼观察尸解各脏器未见有明显的改变。测得LD50为2510.29mg/kg，其95%可信限为2298.05～2742.13mg/kg，详见表3。在LD502510.29mg/kg中，sodium selenite 的实际含量为0.85mg/kg(根据上述TP与sodium selenite的比例计算而得)。而对照组小鼠无死亡，一切活动如常。表3 茶酚硒混合物*一次灌胃(ig)的小鼠急性毒性(LD50)(Bliss法) 剂 量
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(mg/kg)
对数剂量
(X)
动物数
(只)
死亡动物数
(只)
死亡率
(%)
机率单位(Y)
LD50及95%可信限
(mg/kg)
, 百拇医药 3400.00
3.5315
10
9
90(0.9)
6.2816
2890.00
3.4609
10
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70(0.7)
5.5244
2510.29
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2456.50
3.3903
10
6
60(0.6)
5.2533
(2298.05～2742.13)
2088.02
3.3197
10
2
20(0.2)
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1774.82
3.2492
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*混合物TP：Se为7997.3mg∶2.7mg
3 讨论
茶多酚主要有效成分为儿茶素类物质。据文献报道，不同工艺制备的茶多酚对大小鼠经口给药的LD50为2496～10000mg/kg。杨校华等[10]报告，茶多酚，雌雄性大小鼠经口的LD50为3160～4640mg/kg。本实验测定茶多酚一次灌胃给予小鼠的LD50为2914.45mg/kg，而亚硒酸钠LD50为33.54mg/kg。根据世界卫生组织(WHO)对化合物经口急性毒性分类标准[11]，茶多酚属于低毒性化合物，而亚硒酸钠为高毒化合物。按茶多酚7997.3mg∶亚硒酸钠2.7mg比例的茶多酚和亚硒酸钠混合物经口给药的LD50为2510.29mg/kg，仍属低毒性混合物，混合物的毒性表现类似TP的毒性，表现为先兴奋后抑制。
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8000mg茶酚硒混合物中含亚硒酸钠2.7mg，按此推算一个LD50剂量(2510.29mg)混合物中含亚硒酸钠0.85mg。此量约为单纯亚硒酸钠LD50剂量(33.54mg)的四十分之一。有关人体对硒的正常需要量尚无统一的标准[12]，认为人体生理需要量为50～350μg/日。可用本实验的LD50剂量或动物的最大耐受量来推算临床用量。
本课题由国家科委“九五”科技攻关课题(编号96-906-01-03)及中山医科大学“211工程”重点学科建设基金(编号98069)联合资助。
参考文献
1.曾毅.鼻咽癌病因研究.中国肿瘤.1996，5(5)：8
2.黄腾波，汪慧民，李景廉，覃柳亮，等.鼻咽癌高危人群癌前病变的确定.癌症.1997，16(2)：81～84
, 百拇医药
3.Chung S. Yang,Zhi-Yuan Wang.Tea and Cancer(Review). Jounal of the National Cancer Institue.1993,85(13)：1038～1049
4.李瑗，覃国忠，覃柳亮，等.绿茶预防肝癌的系列动物实验研究.四川肿癌防治.1997，10(4)：1～4
5.谢冰芬，刘宗潮，郝东磊，等.茶多酚的细菌毒作用和抗癌作用研究.癌症.1998，17(6)：418～420
6.李艳如.茶色素治疗恶性肿瘤的临床观察.现代诊断与治疗.1995，6(增刊)：61
7.韩锐主编.肿瘤化学预防及药物治疗.北京医科大学中国协和医科大学联合出版社，1991：80～87
8.王辉云，区宝祥.硒预防鼻咽癌的实验研究.中华预防医学杂志.1992，26(5)：281～282
, 百拇医药
9.刘宗潮，简少文，李志铭，等.茶多酚与亚硒酸钠联合对EBV抗原表达的抑制作用.中草药.2000，31(2)：110～112
10.杨校华，尔俊仪，孙建析，等.茶多酚急性毒性试验.浙江省医学科学院学报.1992，3(3)：48
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(收稿：2000-01-19；修回：2000-03-22), 百拇医药