丙型病毒性肝炎患者肝组织Fas抗原的表达与HAI积分关系的研究
作者：李琳 陈乃玲 陈佩兰
单位：北京军区总医院解放军肝病研究所，北京 100700
关键词：丙肝病毒；Fas抗原；细胞凋亡
丙型病毒性肝炎患者肝组织Fas抗 原的表达与HAI积分关系的研究 摘要 目的：研究丙型病毒性肝炎患者肝组织Fas抗原的表达状况与肝细胞病理损伤的关系，探讨细胞凋亡在丙型肝炎发病机制中的作用和意义。方法：69 例丙型肝炎患者，均为血清抗-HCV IgG阳性或HCV RNA(PCR)阳性，肝组织均为快速肝穿，福尔马林固定，连续切片，常规HE染色，按Knodel方法计算HAI积分前三项，根据Kiyoshi方法进行Fas抗原半定量分析。结果：Fas抗原在丙肝的阳性率为 74%，其中CAH(84.5%)。急肝(83.4%)明显高于CPH(64.9%，P<0.05)。HAI积分与Fas抗原半定量分析显示，肝组织病理炎症积分越高，Fas抗原表达量越高(P<0.05)。结论：Fas抗原在丙型病毒性肝炎患者肝组织的表达与肝细胞的病理损伤明显相关，Fas-FasL介导的细胞凋亡可能是丙型病毒性肝炎肝细胞坏死形式之一。
, http://www.100md.com
中国图书资料分类法分类号 R 575.1
The relationship between Fas antigen in liver tissue and
histological activity index in patients with hepatitis C
Li Ling,Chen Nailing,Chen Peilan
(Institute of liver disease,Beijing Army General Hospital Beijing100700)
Abstract Objective：To evaluate the possible role of apoptisis on liver injury in hepatitis C.Methods:The expression of Fas antigen in liver tissue were studied by immunohistochemical staining (SP method),meanwhile,the histological activity index (HAI) were analyzed by knodels method.Results：The Expression rate of Fas antigen in 69 patients infected with HCV was 74%,and the expression of Fas antigen was found mainly in the cytoplasm of hepatocytes.The positive staining cells were found particularly at the edges of piecemeal necrosis.Semiquatitative analysis revealed more expression of Fas antigen and higher HAI in liver tissues with active imflammalion than those without it (P<0.05).Conclusion:Our findings suggest that Fas antigen expression plays an important role in the inflammatory process of hepatitis C,especiaely in the active inflammation stage.Apoptosis,mediated through Fas antigen may be a type of hepatocyte necrosis in heptitis C.
, 百拇医药
Key words hepatitis C virus; Fas antigen; apoptosis.
Fas是多种细胞表面的一种膜蛋白，为Fas配体(FasL)的受体，效应细胞的FasL与靶细胞的Fas结合时，可诱导靶细胞凋亡〔1〕。有研究报道〔2〕，病毒性肝炎患者肝细胞的Fas抗原表达与肝组织病理损伤相关，本研究旨在探讨丙型病毒性肝炎患者Fas抗原的表达与肝细胞损伤的关系及意义。
1 材料和方法
1.1 标本收集 69 例丙型病毒性肝炎患者，均为血清抗-HCV抗体或/和HCV RNA阳性。其中男 47 例，女 22 例，平均年龄 30.9±10.5(16～55)岁。肝组织均为快速肝穿，经 10% 福尔马林固定，石蜡包埋后制成 4μm厚连续切片。
1.2 Fas抗原表达的检测 兔抗-Fas多克隆抗体及免疫组化染色的过氧化酶标记的链霉卵白素试剂盒购自北京中山生物技术公司，分别为美国Santacruz公司及Ezyme Lab公司产品，按试剂盒说明进行染色，兔抗-Fas多克隆抗体工作稀释滴度 1∶100。实验中分别设阴、阳性对照，阴性对照用 8 例正常肝组织，其血清学其它各型肝炎病毒标志均为阴性。阳性对照为预试验中Fas呈阳性的CAH肝组织。并分别用兔血清和PBS替代第一抗体作为空白对照，以确定其特异性。Fas免疫组化半定量判断根据Kiyoshi等〔3〕报道方法进行半定量：未见Fas阳性细胞(—)；Fas阳性细胞占肝小叶全部肝细胞的1/3以下(+)；Fas阳性细胞占肝小叶全部肝细胞的 1/3～2/3(
)；Fas阳性细胞占肝小叶全部肝细胞 2/3 以上(
)。
, http://www.100md.com
1.3 肝组织HAI积分 常规HE染色进行病理诊断，根据Knodel方法〔4〕记算炎症活动度积分(HAI)前三项，不包括纤维化积分部分。
1.4 统计学方法 χ2检验。
2 结果
2.1 Fas抗原的表达及特点 结果见表 1。Fas在 69 例丙肝组织总阳性率为 74%，其中CAH(84.5%)、急肝(83.4%)明显高于CPH(64.9%，P<0.05)。Fas抗原主要呈颗粒状分布于肝细胞胞浆内和胆管上皮细胞胞浆内，少数于肝细胞膜上，多呈弥漫性散在分布，主要围绕于碎屑样坏死灶周围。
表 1 肝细胞Fas抗原的表达
临床
诊断
, 百拇医药
例数
Fas抗原阳性率(%)
总阳性率
(%)
P
+
, http://www.100md.com CPH
37
59.5(22)
5.4(2)
(0)
64.9
CAH
26
38.4(10)
34.6(9)
11.6(3)
84.5
<0.05
, http://www.100md.com
急肝
6
50(3)
33.3(2)
(0)
83.3
<0.05
2.2 Fas抗原的表达与肝组织HAI积分的关系 表 2可见碎屑样坏死及小叶炎症越严重，Fas抗原的表达越高，二者具有明显的相关性(P<0.05)。 表 2 Fas抗原的表达与肝组织炎症相关性分析
Fas抗原的表达
Fas抗原阳性率(%)
, 百拇医药 Ⅰ(碎屑桥样坏死)
Ⅱ(小叶炎症)
Ⅲ(汇管炎症)
0～1
>3
0～1
>3
0～1
>3
-
28.8(17)
10(1)
29.6(16)
, http://www.100md.com
13.3(2)
35(14)
13.8(4)
+
55.9(33)
20(2)
55.6(30)
33.3(5)
60(24)
37.9(11)
, 百拇医药
13.5(8)
50(5)
14.8(8)
40(6)
5(2)
37.9(11)
1.8(1)
20(2)
0(0)
, http://www.100md.com
13.4(2)
0(0)
10.4(3)
3 讨论
细胞死亡形式有两种，一种是由各种原因引起的细胞被动性坏死，另一种为主动的程序性细胞死亡(PCD)，亦称凋亡(Apoptosis)。Fas抗原是多种细胞表面的一种膜蛋白，属于肿瘤坏死因子受体家族类，当效应细胞的FasL和靶细胞的Fas结合时，可诱导靶细胞凋亡。
此前，作者已研究发现，慢性乙型病毒性肝炎患者肝组织Fas抗原的表达与肝组织炎症活动度相关〔5〕，为研究Fas抗原在丙型病毒性肝炎肝组织的表达状况，探讨细胞凋亡与肝细胞损伤的关系和意义，作者应用免疫组化(SP)法对 69 例丙肝组织进行了Fas抗原半定量分析，并分析了Fas抗原表达状况与肝组织HAI积分的关系。结果提示Fas抗原的表达与肝组织病理损伤相关，细胞凋亡可能是丙型病毒性肝炎肝细胞坏死形式之一，与Hirametsn等研究结果类似。Ruggier等〔6〕最近报道，HCV核心蛋白可诱导FAS系统介导的肝细胞系凋亡，HCV抗原的表达与Fas抗原、FasL表达及其相互关系均有待深入研究。
, 百拇医药
参考文献
[1]Hiramatsa N,Hayasni N,Katayama K et al.Immuohistochemical detection of Fas antigen to liver tissue of patients with chronic hepatitis C.Hepatology,1994，19∶1354
[2]Ryo K.Fas and Fas ligand strongly expressed in liver of fulminant hepatitis patients.Hepatology,1993，22∶23
[3]Kiyoshi Mochizuki,Hayashi N,Hiramatsn N et al.Fas antigen expression in liver tissues of patients with chronic hepatitis B.J Hepatol,1996，24∶2
, 百拇医药
[4]Knodell GR,Lshak KG,Bleek WC et al.Formulation and application of a numerical scoring systerm for assessing histological activity in asymptomatic chronic active hepatitis.Hepatology,1981，1157∶431
[5]陈乃玲，刘倩，邓涛 等.细胞凋亡在病毒性肝炎及原发性肝癌中的表达.胃肠病学和肝病学杂志，1997，24(3)∶222
[6]Ruggerieri A,Harada F,Matsuura Y et al.Sensitization to Fas-mediated apoptosis by hepatitis C virus core protein.Virology,1997，229∶68
(1998—08—12收稿，1998—09—18修回), 百拇医药
单位：北京军区总医院解放军肝病研究所，北京 100700
关键词：丙肝病毒；Fas抗原；细胞凋亡
丙型病毒性肝炎患者肝组织Fas抗 原的表达与HAI积分关系的研究 摘要 目的：研究丙型病毒性肝炎患者肝组织Fas抗原的表达状况与肝细胞病理损伤的关系，探讨细胞凋亡在丙型肝炎发病机制中的作用和意义。方法：69 例丙型肝炎患者，均为血清抗-HCV IgG阳性或HCV RNA(PCR)阳性，肝组织均为快速肝穿，福尔马林固定，连续切片，常规HE染色，按Knodel方法计算HAI积分前三项，根据Kiyoshi方法进行Fas抗原半定量分析。结果：Fas抗原在丙肝的阳性率为 74%，其中CAH(84.5%)。急肝(83.4%)明显高于CPH(64.9%，P<0.05)。HAI积分与Fas抗原半定量分析显示，肝组织病理炎症积分越高，Fas抗原表达量越高(P<0.05)。结论：Fas抗原在丙型病毒性肝炎患者肝组织的表达与肝细胞的病理损伤明显相关，Fas-FasL介导的细胞凋亡可能是丙型病毒性肝炎肝细胞坏死形式之一。
, http://www.100md.com
中国图书资料分类法分类号 R 575.1
The relationship between Fas antigen in liver tissue and
histological activity index in patients with hepatitis C
Li Ling,Chen Nailing,Chen Peilan
(Institute of liver disease,Beijing Army General Hospital Beijing100700)
Abstract Objective：To evaluate the possible role of apoptisis on liver injury in hepatitis C.Methods:The expression of Fas antigen in liver tissue were studied by immunohistochemical staining (SP method),meanwhile,the histological activity index (HAI) were analyzed by knodels method.Results：The Expression rate of Fas antigen in 69 patients infected with HCV was 74%,and the expression of Fas antigen was found mainly in the cytoplasm of hepatocytes.The positive staining cells were found particularly at the edges of piecemeal necrosis.Semiquatitative analysis revealed more expression of Fas antigen and higher HAI in liver tissues with active imflammalion than those without it (P<0.05).Conclusion:Our findings suggest that Fas antigen expression plays an important role in the inflammatory process of hepatitis C,especiaely in the active inflammation stage.Apoptosis,mediated through Fas antigen may be a type of hepatocyte necrosis in heptitis C.
, 百拇医药
Key words hepatitis C virus; Fas antigen; apoptosis.
Fas是多种细胞表面的一种膜蛋白，为Fas配体(FasL)的受体，效应细胞的FasL与靶细胞的Fas结合时，可诱导靶细胞凋亡〔1〕。有研究报道〔2〕，病毒性肝炎患者肝细胞的Fas抗原表达与肝组织病理损伤相关，本研究旨在探讨丙型病毒性肝炎患者Fas抗原的表达与肝细胞损伤的关系及意义。
1 材料和方法
1.1 标本收集 69 例丙型病毒性肝炎患者，均为血清抗-HCV抗体或/和HCV RNA阳性。其中男 47 例，女 22 例，平均年龄 30.9±10.5(16～55)岁。肝组织均为快速肝穿，经 10% 福尔马林固定，石蜡包埋后制成 4μm厚连续切片。
1.2 Fas抗原表达的检测 兔抗-Fas多克隆抗体及免疫组化染色的过氧化酶标记的链霉卵白素试剂盒购自北京中山生物技术公司，分别为美国Santacruz公司及Ezyme Lab公司产品，按试剂盒说明进行染色，兔抗-Fas多克隆抗体工作稀释滴度 1∶100。实验中分别设阴、阳性对照，阴性对照用 8 例正常肝组织，其血清学其它各型肝炎病毒标志均为阴性。阳性对照为预试验中Fas呈阳性的CAH肝组织。并分别用兔血清和PBS替代第一抗体作为空白对照，以确定其特异性。Fas免疫组化半定量判断根据Kiyoshi等〔3〕报道方法进行半定量：未见Fas阳性细胞(—)；Fas阳性细胞占肝小叶全部肝细胞的1/3以下(+)；Fas阳性细胞占肝小叶全部肝细胞的 1/3～2/3(
)；Fas阳性细胞占肝小叶全部肝细胞 2/3 以上()。, http://www.100md.com
1.3 肝组织HAI积分 常规HE染色进行病理诊断，根据Knodel方法〔4〕记算炎症活动度积分(HAI)前三项，不包括纤维化积分部分。
1.4 统计学方法 χ2检验。
2 结果
2.1 Fas抗原的表达及特点 结果见表 1。Fas在 69 例丙肝组织总阳性率为 74%，其中CAH(84.5%)、急肝(83.4%)明显高于CPH(64.9%，P<0.05)。Fas抗原主要呈颗粒状分布于肝细胞胞浆内和胆管上皮细胞胞浆内，少数于肝细胞膜上，多呈弥漫性散在分布，主要围绕于碎屑样坏死灶周围。
表 1 肝细胞Fas抗原的表达
临床
诊断
, 百拇医药
例数
Fas抗原阳性率(%)
总阳性率
(%)
P
+
, http://www.100md.com CPH
37
59.5(22)
5.4(2)
(0)
64.9
CAH
26
38.4(10)
34.6(9)
11.6(3)
84.5
<0.05
, http://www.100md.com
急肝
6
50(3)
33.3(2)
(0)
83.3
<0.05
2.2 Fas抗原的表达与肝组织HAI积分的关系 表 2可见碎屑样坏死及小叶炎症越严重，Fas抗原的表达越高，二者具有明显的相关性(P<0.05)。 表 2 Fas抗原的表达与肝组织炎症相关性分析
Fas抗原的表达
Fas抗原阳性率(%)
, 百拇医药 Ⅰ(碎屑桥样坏死)
Ⅱ(小叶炎症)
Ⅲ(汇管炎症)
0～1
>3
0～1
>3
0～1
>3
-
28.8(17)
10(1)
29.6(16)
, http://www.100md.com
13.3(2)
35(14)
13.8(4)
+
55.9(33)
20(2)
55.6(30)
33.3(5)
60(24)
37.9(11)
, 百拇医药
13.5(8)
50(5)
14.8(8)
40(6)
5(2)
37.9(11)
1.8(1)
20(2)
0(0)
, http://www.100md.com
13.4(2)
0(0)
10.4(3)
3 讨论
细胞死亡形式有两种，一种是由各种原因引起的细胞被动性坏死，另一种为主动的程序性细胞死亡(PCD)，亦称凋亡(Apoptosis)。Fas抗原是多种细胞表面的一种膜蛋白，属于肿瘤坏死因子受体家族类，当效应细胞的FasL和靶细胞的Fas结合时，可诱导靶细胞凋亡。
此前，作者已研究发现，慢性乙型病毒性肝炎患者肝组织Fas抗原的表达与肝组织炎症活动度相关〔5〕，为研究Fas抗原在丙型病毒性肝炎肝组织的表达状况，探讨细胞凋亡与肝细胞损伤的关系和意义，作者应用免疫组化(SP)法对 69 例丙肝组织进行了Fas抗原半定量分析，并分析了Fas抗原表达状况与肝组织HAI积分的关系。结果提示Fas抗原的表达与肝组织病理损伤相关，细胞凋亡可能是丙型病毒性肝炎肝细胞坏死形式之一，与Hirametsn等研究结果类似。Ruggier等〔6〕最近报道，HCV核心蛋白可诱导FAS系统介导的肝细胞系凋亡，HCV抗原的表达与Fas抗原、FasL表达及其相互关系均有待深入研究。
, 百拇医药
参考文献
[1]Hiramatsa N,Hayasni N,Katayama K et al.Immuohistochemical detection of Fas antigen to liver tissue of patients with chronic hepatitis C.Hepatology,1994，19∶1354
[2]Ryo K.Fas and Fas ligand strongly expressed in liver of fulminant hepatitis patients.Hepatology,1993，22∶23
[3]Kiyoshi Mochizuki,Hayashi N,Hiramatsn N et al.Fas antigen expression in liver tissues of patients with chronic hepatitis B.J Hepatol,1996，24∶2
, 百拇医药
[4]Knodell GR,Lshak KG,Bleek WC et al.Formulation and application of a numerical scoring systerm for assessing histological activity in asymptomatic chronic active hepatitis.Hepatology,1981，1157∶431
[5]陈乃玲，刘倩，邓涛 等.细胞凋亡在病毒性肝炎及原发性肝癌中的表达.胃肠病学和肝病学杂志，1997，24(3)∶222
[6]Ruggerieri A,Harada F,Matsuura Y et al.Sensitization to Fas-mediated apoptosis by hepatitis C virus core protein.Virology,1997，229∶68
(1998—08—12收稿，1998—09—18修回), 百拇医药