苯那普利对急性间质性肾炎防治作用的实验研究
作者：袁曙光 刘瑞洪 刘 虹 许向青
单位：(第二附属医院肾内科 长沙 410011)
关键词：血管紧张素转换酶抑制剂；肾炎；间质性；血管紧张素Ⅱ；SD大鼠
湖南医科大学学报990611
提要 应用苯那普利对鼠单侧输尿管梗阻(UUO)的肾间质炎性细胞浸润的作用进行观察。结果显示：UUO后第5d，苯那普利治疗组鼠肾间质的相对体积及浸润炎性细胞数明显低于对照组(P<0.05)；UUO后第10d，两组差异无显著性(P>0.05)。表明苯那普利对UUO早期肾间质性炎症有防治作用。
中国图书分类号 R692.3+3 Q959.837
Effect of benazeprile on renal interstitial inflammatory cell
, http://www.100md.com
infiltration in rats with unilateral ureteral obstruction
Yuan Shuguang Liu Ruihong Liu Hong Xu Xiangqing
(Department of Medicine, The Second Affiliated Hospital, Hunan Medical University, Changsha 410011)
Effect of benazeprile on renal interstitial inflammatory cell infiltration was observed in rats with unilateral ureteral obstruction(UUO). The results showed that the relative volume of interstitium and number of infiltrating inflam matory cell on the fifth day were significantly less in rats with benazeprile th an the control group, but the difference between two groups lose significance on the tenth day. These data indicate that benazeprile can ameliorate early phase of renal interstitial inflammation in UUO.
, 百拇医药
Key words angiotensin-convtering enzyme inhibitors; angiotens in Ⅱ; nephritis,interstitial; rats,Sprague-Dawley
在许多肾脏病模型中，进行性小管间质纤维化是其组织病理学主要变化之一，且易造成不可逆性的肾损害。单侧输尿管梗阻(Unilateralureteral obstraction,UUO)是一种急性间质性肾炎进行性小管间质纤维化的实验模型。有研究证实，在UUO诱导的肾间质损伤中，肾脏局部的肾素-血管紧张素系统起十分重要的作用[1]。Kaneto等[2]及Morrissey等[3]应用依那普利——一种血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)可减少UUO所致的肾间质纤维化，本研究观察，ACEI苯那普利对UUO所致的肾间质炎性细胞浸润的作用。
1 材料和方法
, 百拇医药
1.1 动物及分组 雌性6周龄SD大鼠30只，体重150～180g，用戊巴比妥30mg.kg-1作皮下注射麻醉；其中24只行左侧输尿管结扎术，术后随机分为两组：①治疗组(n=12)以苯那普利(放入饮用水中，6mg.L-1)喂饲；②对照组(n=12)以自来水喂饲。两组大鼠分别于术后第5d、第10d各处死6只，留取术侧及对侧肾组织置4%多聚甲醛/PBS固定液中，4℃过夜。其余6只大鼠为假手术组，于术后第10d处死。
1.2 方法
1.2.1 肾组织病理检查 将已固定的肾组织常规石蜡包埋、切片，以HE染色，在光镜下观察、照相，将含117(13×19)个点的透明格放在高倍镜上(×400)照片上，以点计数法计算肾间质相对体积(Vv)[2]，将压在肾小管基底膜及间质上的点计算，而在Bowan's囊、小管周围毛细血管及小管上皮细胞上的点不计算，位于小球上的点从总点数中去除；间质中的细胞数以高倍镜(×400)照片直接计算。
, 百拇医药
1.2.2 统计学处理 计量资料用均数±标准差(
±s)表示，采用t检验，在stata统计软件包中进行。
2 结 果
在UUO第5d对照组出现间质增宽，以间质水肿为主，伴有少量炎性细胞浸润；治疗组间质增宽程度较对照组减轻，未见明显细胞浸润(表1，2)。在UUO第10d两组间质均明显增宽，大量细胞浸润，伴有纤维素样物质渗出(P>0.05)(附图)。
表1 肾间质相对体积(%) 组别
n
术后(d)
5
10
, http://www.100md.com
假手术组
6
10.7±2.0
对照组
6
38.3±4.1
66.6±2.4
治疗组
6
26.9±3.2①
62.6±5.5
①与对照组比较P<0.05
, 百拇医药
表2 肾间质浸润细胞数(±s) 组别
n
术后(d)
5
10
假手术组
6
3±0.8
对照组
6
82±9.4
169±13.1
, http://www.100md.com
治疗组
6
51±6.3①
167±9.7
①与对照组比较P<0.05
附图 各组大鼠肾间质形态学比较。HE染色，×200。A：假手术组，肾间质结构正常；B：UUO后第5d对照组，间质水肿伴少量炎性细胞浸润；C：UUO后第5d治疗组，间质水肿较对照组轻，无明显细胞浸润；D：UUO后第10d治疗组，间质明显增宽伴大量淋巴细胞浸润
Fig. Morphology of renal interstitium in different groups of rats. HE stain, ×200. A: Shame operation group, normal renal interstitia l structure. B: Five day after UUO in the control group, renal interstitial swollen with a few inflammatory cells infiltration. C: Five days after UUO in the be nazepril group, less severe interstitial swollen compared with the control group and noinflammatory cells infiltration observed. D: Ten days after UUO in the benazepril group, broadening interstitium with massive lymphocyte infiltration
, 百拇医药
3 讨 论
UUO可以导致严重的肾小管间质病变，包括间质炎性细胞浸润，肾小管扩张、坏死以及间质的纤维化等[4]。本研究结果显示，梗阻第5d即可见明显的间质增宽，小管扩张及炎性细胞浸润，梗阻后第10d病变更为严重。在输尿管梗阻后，肾素-血管紧张素系统被激活[1]，产生大量的血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ,AngⅡ)，不仅引起肾间质局部血流动力学改变，还可促进肾脏细胞增生，并具有化学诱导剂作用[5]。在体外实验中，注入AngⅡ可引起血管、肾小球及小管间质显著的损害，并伴有肾脏固有细胞的增生及炎性细胞的聚集[6]。应用ACEI可减少UUO对肾间质的炎性细胞的浸润[2]。本实验观察到UUO第5d苯那普利治疗组的肾间质炎性细胞比对照组显著减少，亦支持上述观点。浸润的炎性细胞可分泌大量的细胞因子，其中较受关注的是TGF-β，因为TGF-β被认为在调节细胞外基质(ECM)，包括调节Ⅰ型、Ⅲ型及Ⅳ型胶原，纤维连接蛋白及层粘连蛋白的转录及合成中起主要作用[7]。已有实验证实，在UUO时，梗阻侧肾脏中TGF-βmRNA的表达增加[8]，间质中Ⅰ型、Ⅲ型、Ⅳ型胶原及纤维蛋白的合成增加[2]。这些均预示着肾间质纤维化开始，应用ACEI可抑制TGF-β的表达，减少胶原的合成，进而延缓间质纤维化。在急性间质性肾炎的临床研究中发现，炎性细胞(CD68，CD45RO，CD20)对肾间质的浸润程度与临床预后密切相关[9]，也证实了这一点。笔者认为，在间质纤维化早期，炎性细胞的浸润起重要作用。
, http://www.100md.com
在输尿管梗阻后，除AngⅡ大量增加外，还有大量的炎症介质增加，包括IL-1，IL-8，TNF-α及内皮素等[10]，这些炎症介质是由梗阻后激活的肾小管上皮细胞及血管内皮细胞分泌的，它们亦能使血管中的炎性细胞趋化、游走，从而导致肾间质大量炎性细胞的浸润，尤其是单核巨噬细胞的浸润。在本实验中，UUO第10d两组均可见大量炎性细胞弥漫性浸润于肾皮质及肾髓质的间质中(P>0.05)。这可能由于阶段性介质的作用占主导地位，故不解除输尿管梗阻，药物亦难以控制间质的细胞浸润及纤维化。此外，体内存在AngⅡ合成的旁路途径，ACEI不能完全抑制局部肾素-血管紧张素系统的作用，也可能是其原因之一。血管紧张素受体拮抗剂能够完全阻断AngⅡ通过其Ⅰ型受体发挥作用；而它对间质性肾炎及间质纤维化是否有更好的疗效这是许多学者关注的问题，有待进一步深入研究。
在临床观察中，导致肾间质纤维化的疾病较多，包括过敏性间质性肾炎、氨基糖甙类所致肾损害、狼疮性肾炎、原因不明的间质性肾炎及原发性肾小球疾病等。对于如何防治这些疾病的间质纤维化问题，愈来愈受到广大肾病学者的高度重视。
, 百拇医药
参 考 文 献
1 Pimental JRJL, Martinexz-maldonado M, Wilcox JN. Regulation of renin-angiotensin system in unilateral ureteral obstruction. Kidney Int, 19 93,44:390～400
2 Kaneto H, Morrissey J, McCracken R, et al. Enalapril reduces colleagen ty pe Ⅳ synthesis and expansion of the interstitium in the obstructed rat kidney. Kidney Int, 1994,45:1637～1647
3 Morrissey J, Ishidoya S, Morrissey J, et al. The effect of ACE inhibitors on the expression of matrix genes and the role p53 and p21(WAF1) in experimental renal fibrosis. Kidney Int, 1996,49:S83～S87
, http://www.100md.com
4 Sharma AK, Mauer SM, Kim Y. Interstitial fibrosis in obstructive nephropathy. Kidney Int, 1993,44:774～788
5 Ichikawa I, Harris RC. Angiotensin actions in the kidney: Renewed insight into the old hormone. Kidney Int, 1991,40:583～596
6 Johnson RJ, Alpers CE, Yoshimara A, et al. Renal injury from angiotensin Ⅱ mediated hypertension. Hypertension, 1992,19:464～474
7 Kuncio GS, Neilson EG, Haverty T. Mechanisms of tubulointeerstitial fibrosis. Kidney Int, 1991,39:550～556
, 百拇医药
8 Kaneto H, Morrissey J, Klahr S. Increased expression of TGF-β1 mRNA in the obstructed kidney of rats with unilateral ureteral ligation. Kidney Int, 1993,44 :313～321
9 刘虹，刘瑞洪，袁曙光，等.急性间质小管性疾病肾组织中巨噬细胞及淋巴细胞浸润的研究.湖南医科大学学报，1997，22：145～148
10 Ong ACM, Fine LG. Tubular-derived growth factor and cytokine in the pathogenesis of tubulointerstitial fibrosis: implication for human renal disease progression. Am J Kidney Dis, 1994,23:205～211, 百拇医药
单位：(第二附属医院肾内科 长沙 410011)
关键词：血管紧张素转换酶抑制剂；肾炎；间质性；血管紧张素Ⅱ；SD大鼠
湖南医科大学学报990611
提要 应用苯那普利对鼠单侧输尿管梗阻(UUO)的肾间质炎性细胞浸润的作用进行观察。结果显示：UUO后第5d，苯那普利治疗组鼠肾间质的相对体积及浸润炎性细胞数明显低于对照组(P<0.05)；UUO后第10d，两组差异无显著性(P>0.05)。表明苯那普利对UUO早期肾间质性炎症有防治作用。
中国图书分类号 R692.3+3 Q959.837
Effect of benazeprile on renal interstitial inflammatory cell
, http://www.100md.com
infiltration in rats with unilateral ureteral obstruction
Yuan Shuguang Liu Ruihong Liu Hong Xu Xiangqing
(Department of Medicine, The Second Affiliated Hospital, Hunan Medical University, Changsha 410011)
Effect of benazeprile on renal interstitial inflammatory cell infiltration was observed in rats with unilateral ureteral obstruction(UUO). The results showed that the relative volume of interstitium and number of infiltrating inflam matory cell on the fifth day were significantly less in rats with benazeprile th an the control group, but the difference between two groups lose significance on the tenth day. These data indicate that benazeprile can ameliorate early phase of renal interstitial inflammation in UUO.
, 百拇医药
Key words angiotensin-convtering enzyme inhibitors; angiotens in Ⅱ; nephritis,interstitial; rats,Sprague-Dawley
在许多肾脏病模型中，进行性小管间质纤维化是其组织病理学主要变化之一，且易造成不可逆性的肾损害。单侧输尿管梗阻(Unilateralureteral obstraction,UUO)是一种急性间质性肾炎进行性小管间质纤维化的实验模型。有研究证实，在UUO诱导的肾间质损伤中，肾脏局部的肾素-血管紧张素系统起十分重要的作用[1]。Kaneto等[2]及Morrissey等[3]应用依那普利——一种血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)可减少UUO所致的肾间质纤维化，本研究观察，ACEI苯那普利对UUO所致的肾间质炎性细胞浸润的作用。
1 材料和方法
, 百拇医药
1.1 动物及分组 雌性6周龄SD大鼠30只，体重150～180g，用戊巴比妥30mg.kg-1作皮下注射麻醉；其中24只行左侧输尿管结扎术，术后随机分为两组：①治疗组(n=12)以苯那普利(放入饮用水中，6mg.L-1)喂饲；②对照组(n=12)以自来水喂饲。两组大鼠分别于术后第5d、第10d各处死6只，留取术侧及对侧肾组织置4%多聚甲醛/PBS固定液中，4℃过夜。其余6只大鼠为假手术组，于术后第10d处死。
1.2 方法
1.2.1 肾组织病理检查 将已固定的肾组织常规石蜡包埋、切片，以HE染色，在光镜下观察、照相，将含117(13×19)个点的透明格放在高倍镜上(×400)照片上，以点计数法计算肾间质相对体积(Vv)[2]，将压在肾小管基底膜及间质上的点计算，而在Bowan's囊、小管周围毛细血管及小管上皮细胞上的点不计算，位于小球上的点从总点数中去除；间质中的细胞数以高倍镜(×400)照片直接计算。
, 百拇医药
1.2.2 统计学处理 计量资料用均数±标准差(
±s)表示，采用t检验，在stata统计软件包中进行。2 结 果
在UUO第5d对照组出现间质增宽，以间质水肿为主，伴有少量炎性细胞浸润；治疗组间质增宽程度较对照组减轻，未见明显细胞浸润(表1，2)。在UUO第10d两组间质均明显增宽，大量细胞浸润，伴有纤维素样物质渗出(P>0.05)(附图)。
表1 肾间质相对体积(%) 组别
n
术后(d)
5
10
, http://www.100md.com
假手术组
6
10.7±2.0
对照组
6
38.3±4.1
66.6±2.4
治疗组
6
26.9±3.2①
62.6±5.5
①与对照组比较P<0.05
, 百拇医药
表2 肾间质浸润细胞数(
±s) 组别n
术后(d)
5
10
假手术组
6
3±0.8
对照组
6
82±9.4
169±13.1
, http://www.100md.com
治疗组
6
51±6.3①
167±9.7
①与对照组比较P<0.05
附图 各组大鼠肾间质形态学比较。HE染色，×200。A：假手术组，肾间质结构正常；B：UUO后第5d对照组，间质水肿伴少量炎性细胞浸润；C：UUO后第5d治疗组，间质水肿较对照组轻，无明显细胞浸润；D：UUO后第10d治疗组，间质明显增宽伴大量淋巴细胞浸润
Fig. Morphology of renal interstitium in different groups of rats. HE stain, ×200. A: Shame operation group, normal renal interstitia l structure. B: Five day after UUO in the control group, renal interstitial swollen with a few inflammatory cells infiltration. C: Five days after UUO in the be nazepril group, less severe interstitial swollen compared with the control group and noinflammatory cells infiltration observed. D: Ten days after UUO in the benazepril group, broadening interstitium with massive lymphocyte infiltration
, 百拇医药
3 讨 论
UUO可以导致严重的肾小管间质病变，包括间质炎性细胞浸润，肾小管扩张、坏死以及间质的纤维化等[4]。本研究结果显示，梗阻第5d即可见明显的间质增宽，小管扩张及炎性细胞浸润，梗阻后第10d病变更为严重。在输尿管梗阻后，肾素-血管紧张素系统被激活[1]，产生大量的血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ,AngⅡ)，不仅引起肾间质局部血流动力学改变，还可促进肾脏细胞增生，并具有化学诱导剂作用[5]。在体外实验中，注入AngⅡ可引起血管、肾小球及小管间质显著的损害，并伴有肾脏固有细胞的增生及炎性细胞的聚集[6]。应用ACEI可减少UUO对肾间质的炎性细胞的浸润[2]。本实验观察到UUO第5d苯那普利治疗组的肾间质炎性细胞比对照组显著减少，亦支持上述观点。浸润的炎性细胞可分泌大量的细胞因子，其中较受关注的是TGF-β，因为TGF-β被认为在调节细胞外基质(ECM)，包括调节Ⅰ型、Ⅲ型及Ⅳ型胶原，纤维连接蛋白及层粘连蛋白的转录及合成中起主要作用[7]。已有实验证实，在UUO时，梗阻侧肾脏中TGF-βmRNA的表达增加[8]，间质中Ⅰ型、Ⅲ型、Ⅳ型胶原及纤维蛋白的合成增加[2]。这些均预示着肾间质纤维化开始，应用ACEI可抑制TGF-β的表达，减少胶原的合成，进而延缓间质纤维化。在急性间质性肾炎的临床研究中发现，炎性细胞(CD68，CD45RO，CD20)对肾间质的浸润程度与临床预后密切相关[9]，也证实了这一点。笔者认为，在间质纤维化早期，炎性细胞的浸润起重要作用。
, http://www.100md.com
在输尿管梗阻后，除AngⅡ大量增加外，还有大量的炎症介质增加，包括IL-1，IL-8，TNF-α及内皮素等[10]，这些炎症介质是由梗阻后激活的肾小管上皮细胞及血管内皮细胞分泌的，它们亦能使血管中的炎性细胞趋化、游走，从而导致肾间质大量炎性细胞的浸润，尤其是单核巨噬细胞的浸润。在本实验中，UUO第10d两组均可见大量炎性细胞弥漫性浸润于肾皮质及肾髓质的间质中(P>0.05)。这可能由于阶段性介质的作用占主导地位，故不解除输尿管梗阻，药物亦难以控制间质的细胞浸润及纤维化。此外，体内存在AngⅡ合成的旁路途径，ACEI不能完全抑制局部肾素-血管紧张素系统的作用，也可能是其原因之一。血管紧张素受体拮抗剂能够完全阻断AngⅡ通过其Ⅰ型受体发挥作用；而它对间质性肾炎及间质纤维化是否有更好的疗效这是许多学者关注的问题，有待进一步深入研究。
在临床观察中，导致肾间质纤维化的疾病较多，包括过敏性间质性肾炎、氨基糖甙类所致肾损害、狼疮性肾炎、原因不明的间质性肾炎及原发性肾小球疾病等。对于如何防治这些疾病的间质纤维化问题，愈来愈受到广大肾病学者的高度重视。
, 百拇医药
参 考 文 献
1 Pimental JRJL, Martinexz-maldonado M, Wilcox JN. Regulation of renin-angiotensin system in unilateral ureteral obstruction. Kidney Int, 19 93,44:390～400
2 Kaneto H, Morrissey J, McCracken R, et al. Enalapril reduces colleagen ty pe Ⅳ synthesis and expansion of the interstitium in the obstructed rat kidney. Kidney Int, 1994,45:1637～1647
3 Morrissey J, Ishidoya S, Morrissey J, et al. The effect of ACE inhibitors on the expression of matrix genes and the role p53 and p21(WAF1) in experimental renal fibrosis. Kidney Int, 1996,49:S83～S87
, http://www.100md.com
4 Sharma AK, Mauer SM, Kim Y. Interstitial fibrosis in obstructive nephropathy. Kidney Int, 1993,44:774～788
5 Ichikawa I, Harris RC. Angiotensin actions in the kidney: Renewed insight into the old hormone. Kidney Int, 1991,40:583～596
6 Johnson RJ, Alpers CE, Yoshimara A, et al. Renal injury from angiotensin Ⅱ mediated hypertension. Hypertension, 1992,19:464～474
7 Kuncio GS, Neilson EG, Haverty T. Mechanisms of tubulointeerstitial fibrosis. Kidney Int, 1991,39:550～556
, 百拇医药
8 Kaneto H, Morrissey J, Klahr S. Increased expression of TGF-β1 mRNA in the obstructed kidney of rats with unilateral ureteral ligation. Kidney Int, 1993,44 :313～321
9 刘虹，刘瑞洪，袁曙光，等.急性间质小管性疾病肾组织中巨噬细胞及淋巴细胞浸润的研究.湖南医科大学学报，1997，22：145～148
10 Ong ACM, Fine LG. Tubular-derived growth factor and cytokine in the pathogenesis of tubulointerstitial fibrosis: implication for human renal disease progression. Am J Kidney Dis, 1994,23:205～211, 百拇医药
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