甲壳胺沉淀法代替醇沉法制备补肾益骨膏的研究
作者：赵瑞芝 林华 王小云
单位：(广东省中医院 广州 510120)
关键词：甲壳胺；澄清剂；工艺比较；薄层色谱法；淫羊藿苷
广东药学000416 摘要 应用新型澄清剂甲壳胺代替乙醇对补肾益骨膏提取液进行了精制。采用了薄层色谱法和薄层扫描法对其中成分进行了定性定量分析，并与醇沉工艺进行了比较。结果表明，甲壳胺作为澄清剂效果肯定，对其中有效成分无干扰。
补肾益骨膏为我院自制制剂，由淫羊藿、女贞子等9味药材组成，具有补肾，健骨，填髓的功效；临床用于治疗围绝经期骨质疏松症，疗效较好。原生产工艺采用水提醇沉工艺，需消耗大量乙醇，成本较高。我们采用甲壳胺澄清法代替醇沉，在降低制药成本的基础上，较好地解决了产品的精制问题。
1 材料与仪器
, http://www.100md.com
药材，购自广州市药材公司，符合中国药典(95版)标准。淫羊藿苷对照品(中国药品生物制品检定所)；甲壳胺，(自制)。
CS9301型薄层扫描仪(日本岛津公司)。81-2型磁力恒温搅拌器(上海司乐仪器厂)。硅胶G(青岛海洋化工厂)。
试剂均为分析纯。
2 实验方法及结果
2.1 补肾益骨膏水提液的制备 按处方量称取各药材，加3倍量水煎煮3次，第1次煎1h，第2、3次煎45min，合并滤液，滤液浓缩至生药-水(1∶2，1∶1，2∶1)(1)，观察药液颜色，备用。
2.2 天然絮凝剂的制备 称取甲壳胺4g，加2%醋酸100ml，放置24h，备用。
2.3 补肾益骨膏沉淀药液浓度及沉淀剂浓度的选择 将(1)液分别加入甲壳胺溶液5、6.5、10ml搅拌，滤过，观察滤过过程，记录，结果以沉淀剂用量为6.5ml相当浓度为0.22%时药液浓度以1∶2时沉淀量多，滤速快，药液澄清，选择此条件为沉淀条件。
, 百拇医药
2.4 醇沉工艺与天然絮凝剂的比较 取补肾益骨膏处方药材按2.1方法水煎煮提取，浓缩至生药-水比例为2∶1，等分为两份，其中一份依原醇沉工艺操作，观察并记录絮体产生、成长及沉降情况，10h后滤过，滤液定容于50ml(样品1)。另一份加入絮凝剂使其浓度为0.22%，观察并记录絮体产生、成长及沉降情况。其他同样品1操作(样品2)。结果见表1。
表1 两种工艺絮凝效果的比较 工艺
醇沉
甲壳胺沉淀
絮体出现时间
立刻出现
立刻出现
絮体状态
, 百拇医药 丝状，囊状
丝状，囊状
滤过速度
较快
快
滤液颜色
黑褐色
黑色
淫羊藿苷含量
9.68(970901)
10.04(970901)
(均值mg)
15.9(991022)
, 百拇医药
14.00(991022)
14.75(990920)
14.12(990920)
2.5 两种工艺对其中药物成分的影响 对其中女贞子、泽泻、川芎进行定性检测，并对淫羊藿苷进行定量检测，两种工艺进行比较。
2.6 鉴别用阳性对照药材以及阴性对照样品的提取均照处方量及原工艺提取制备。
3 分析方法
3.1 女贞子的鉴别 取阳性对照、样品(1，2)、阴性对照各10ml，分别加乙酸乙酯10ml萃取，萃取液浓缩至干，残渣加乙醇1ml溶解，作为供试品溶液，分别点样于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-乙酸乙酯(7∶1)为展开剂，展开15cm，取出，晾干。碘蒸气熏显色，结果见图1。
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图1 女贞子的鉴别
1.药材 2.样品1 3.样品2 4.阴性 S淫羊藿苷
3.2 泽泻的鉴别[1] 分别取各供试液5μl点样于同一硅胶G板上，以氯仿-乙酸乙酯-甲酸(5∶5∶0.3)为展开剂，展开10cm，取出，晾干，喷以10%的硅钨酸乙醇液显色，80℃烘10min，结果见图2。
图2 泽泻的鉴别
1.药材 2.样品1 3.样品2 4.阴性 S淫羊藿苷
3.3 川芎的鉴别 分别取各供试液5μl点样于同一硅胶G板上，以苯-乙酸乙酯(7∶2)为展开剂，展开15cm，取出，晾干，在UV365nm下检视，结果见图3。
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图3 川芎的鉴别
1.药材 2.样品1 3.样品2 4.阴性 S淫羊藿苷
3.4 淫羊藿的鉴别 取“3.5.1”项下的标准液(1)2μl，各供试液5μl分别点样于同一硅胶G板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(10∶1∶1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，在UV 254nm下检视，结果见图4。
图4 淫羊藿的鉴别
1.药材 2.样品1 3.样品2 4.阴性 S淫羊藿苷
3.5 淫羊藿苷的含量测定[2]
3.5.1 标准曲线及回收率实验 取淫羊藿苷对照品精密称定配制成浓度为0.118mg/ml的标准溶液(1)，精密吸取(1)液5、10、15、20、25μl点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(10∶1∶1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，在270nm扫描，以峰面积对浓度回归，得回归方程：A=315.59C-62.252,r=0.998,取已测定含量的样品加入标准品2、4、6ml，同样品方法处理，测定含量，计算回收率，分别为103.8%、96.9%、100.5%。
, 百拇医药
3.5.2 取样品(1，2)各10ml，分别加10ml乙酸乙酯萃取4次，萃取液浓缩至干，加乙醇5ml溶解定容，作为供试品溶液。取对照品2、10μl，样品液各10μl分别点于同一硅胶G板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(10∶1∶1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，在波长272nm扫描，外标两点法计算含量，结果见表1。
4 结果与讨论
4.1 由表1可以看出，两种工艺的沉淀效果相似，主药淫羊藿的有效成分淫羊藿苷含量相近。由图1、2、3、4可以看出，两种工艺的药物成分相同，因而可以考虑以甲壳胺沉淀代替醇沉法。
4.2 由于醇沉与甲壳胺沉淀原理不同，前者是利用不同成分在乙醇中溶解度不同而去粗取精，后者则是利用甲壳胺的吸附性能，其所沉淀掉的成分不会完全一致；中药常是多种成分的综合作用，化学成分的分析只能比较两种工艺所保留的成分是否一致，而不能确定孰优孰劣。其结果有待于药效学实验验证。
参考文献
1.彭国平，徐晓燕，李红阳.薄层扫描法测定泽泻中asismol的含量.中国中药杂志.1997，32(7)：422
2.王绮秋.中药制剂成分现代分析法.贵州科技出版社，1991：126
(收稿：2000-03-15；修回：2000-05-13), http://www.100md.com
单位：(广东省中医院 广州 510120)
关键词：甲壳胺；澄清剂；工艺比较；薄层色谱法；淫羊藿苷
广东药学000416 摘要 应用新型澄清剂甲壳胺代替乙醇对补肾益骨膏提取液进行了精制。采用了薄层色谱法和薄层扫描法对其中成分进行了定性定量分析，并与醇沉工艺进行了比较。结果表明，甲壳胺作为澄清剂效果肯定，对其中有效成分无干扰。
补肾益骨膏为我院自制制剂，由淫羊藿、女贞子等9味药材组成，具有补肾，健骨，填髓的功效；临床用于治疗围绝经期骨质疏松症，疗效较好。原生产工艺采用水提醇沉工艺，需消耗大量乙醇，成本较高。我们采用甲壳胺澄清法代替醇沉，在降低制药成本的基础上，较好地解决了产品的精制问题。
1 材料与仪器
, http://www.100md.com
药材，购自广州市药材公司，符合中国药典(95版)标准。淫羊藿苷对照品(中国药品生物制品检定所)；甲壳胺，(自制)。
CS9301型薄层扫描仪(日本岛津公司)。81-2型磁力恒温搅拌器(上海司乐仪器厂)。硅胶G(青岛海洋化工厂)。
试剂均为分析纯。
2 实验方法及结果
2.1 补肾益骨膏水提液的制备 按处方量称取各药材，加3倍量水煎煮3次，第1次煎1h，第2、3次煎45min，合并滤液，滤液浓缩至生药-水(1∶2，1∶1，2∶1)(1)，观察药液颜色，备用。
2.2 天然絮凝剂的制备 称取甲壳胺4g，加2%醋酸100ml，放置24h，备用。
2.3 补肾益骨膏沉淀药液浓度及沉淀剂浓度的选择 将(1)液分别加入甲壳胺溶液5、6.5、10ml搅拌，滤过，观察滤过过程，记录，结果以沉淀剂用量为6.5ml相当浓度为0.22%时药液浓度以1∶2时沉淀量多，滤速快，药液澄清，选择此条件为沉淀条件。
, 百拇医药
2.4 醇沉工艺与天然絮凝剂的比较 取补肾益骨膏处方药材按2.1方法水煎煮提取，浓缩至生药-水比例为2∶1，等分为两份，其中一份依原醇沉工艺操作，观察并记录絮体产生、成长及沉降情况，10h后滤过，滤液定容于50ml(样品1)。另一份加入絮凝剂使其浓度为0.22%，观察并记录絮体产生、成长及沉降情况。其他同样品1操作(样品2)。结果见表1。
表1 两种工艺絮凝效果的比较 工艺
醇沉
甲壳胺沉淀
絮体出现时间
立刻出现
立刻出现
絮体状态
, 百拇医药 丝状，囊状
丝状，囊状
滤过速度
较快
快
滤液颜色
黑褐色
黑色
淫羊藿苷含量
9.68(970901)
10.04(970901)
(均值mg)
15.9(991022)
, 百拇医药
14.00(991022)
14.75(990920)
14.12(990920)
2.5 两种工艺对其中药物成分的影响 对其中女贞子、泽泻、川芎进行定性检测，并对淫羊藿苷进行定量检测，两种工艺进行比较。
2.6 鉴别用阳性对照药材以及阴性对照样品的提取均照处方量及原工艺提取制备。
3 分析方法
3.1 女贞子的鉴别 取阳性对照、样品(1，2)、阴性对照各10ml，分别加乙酸乙酯10ml萃取，萃取液浓缩至干，残渣加乙醇1ml溶解，作为供试品溶液，分别点样于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-乙酸乙酯(7∶1)为展开剂，展开15cm，取出，晾干。碘蒸气熏显色，结果见图1。
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图1 女贞子的鉴别
1.药材 2.样品1 3.样品2 4.阴性 S淫羊藿苷
3.2 泽泻的鉴别[1] 分别取各供试液5μl点样于同一硅胶G板上，以氯仿-乙酸乙酯-甲酸(5∶5∶0.3)为展开剂，展开10cm，取出，晾干，喷以10%的硅钨酸乙醇液显色，80℃烘10min，结果见图2。
图2 泽泻的鉴别
1.药材 2.样品1 3.样品2 4.阴性 S淫羊藿苷
3.3 川芎的鉴别 分别取各供试液5μl点样于同一硅胶G板上，以苯-乙酸乙酯(7∶2)为展开剂，展开15cm，取出，晾干，在UV365nm下检视，结果见图3。
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图3 川芎的鉴别
1.药材 2.样品1 3.样品2 4.阴性 S淫羊藿苷
3.4 淫羊藿的鉴别 取“3.5.1”项下的标准液(1)2μl，各供试液5μl分别点样于同一硅胶G板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(10∶1∶1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，在UV 254nm下检视，结果见图4。
图4 淫羊藿的鉴别
1.药材 2.样品1 3.样品2 4.阴性 S淫羊藿苷
3.5 淫羊藿苷的含量测定[2]
3.5.1 标准曲线及回收率实验 取淫羊藿苷对照品精密称定配制成浓度为0.118mg/ml的标准溶液(1)，精密吸取(1)液5、10、15、20、25μl点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(10∶1∶1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，在270nm扫描，以峰面积对浓度回归，得回归方程：A=315.59C-62.252,r=0.998,取已测定含量的样品加入标准品2、4、6ml，同样品方法处理，测定含量，计算回收率，分别为103.8%、96.9%、100.5%。
, 百拇医药
3.5.2 取样品(1，2)各10ml，分别加10ml乙酸乙酯萃取4次，萃取液浓缩至干，加乙醇5ml溶解定容，作为供试品溶液。取对照品2、10μl，样品液各10μl分别点于同一硅胶G板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(10∶1∶1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，在波长272nm扫描，外标两点法计算含量，结果见表1。
4 结果与讨论
4.1 由表1可以看出，两种工艺的沉淀效果相似，主药淫羊藿的有效成分淫羊藿苷含量相近。由图1、2、3、4可以看出，两种工艺的药物成分相同，因而可以考虑以甲壳胺沉淀代替醇沉法。
4.2 由于醇沉与甲壳胺沉淀原理不同，前者是利用不同成分在乙醇中溶解度不同而去粗取精，后者则是利用甲壳胺的吸附性能，其所沉淀掉的成分不会完全一致；中药常是多种成分的综合作用，化学成分的分析只能比较两种工艺所保留的成分是否一致，而不能确定孰优孰劣。其结果有待于药效学实验验证。
参考文献
1.彭国平，徐晓燕，李红阳.薄层扫描法测定泽泻中asismol的含量.中国中药杂志.1997，32(7)：422
2.王绮秋.中药制剂成分现代分析法.贵州科技出版社，1991：126
(收稿：2000-03-15；修回：2000-05-13), http://www.100md.com