不同产地和品种淫羊藿中淫羊藿苷的HPLC分析
作者：徐玲玲 黄礼杰 顾国献
单位：黄礼杰(上海中医药大学 上海 200332)；徐玲玲 顾国献(上海中医药大学附属岳阳中西医结合医院 上海 200437)
关键词：淫羊藿；淫羊藿苷；RP-HPLC；含量测定
中国现代应用药学000209 摘要 目的：对中药淫羊藿中淫羊藿苷的含量分析进行方法学研究，并测定淫羊藿的不同产地、不同品种、不同药用部位的淫羊藿苷的含量。方法：采用RP-HPLC技术对7个品种23个样品进行测定。以PERKIN-EIMER-SH/5C18柱为分析柱，流动相为乙腈-水-36%乙酸(25∶73.5∶1.5)流速1.0ml/min。UV检测波长270nm。结果：本方法测定淫羊藿苷含量在0.0212～0.127μg，0.53～1.696μg范围内呈良好的线性关系。不同产地、不同品种、不同药用部位的淫羊藿其淫羊藿苷的含量为0.00307%～1.55%。同一植株不同部位中淫羊藿苷的含量分布叶>叶茎>茎>根。结论：淫羊藿由于产地不同、品种不同其淫羊藿苷的含量相差悬殊。本测定方法为筛选优良品种和扩大药源提供了简便易行的方法。
, 百拇医药
HPLC analysis of icariine of heiba epimebii in different variety and different planting areas
Xu Lingling(Xu LL),Huang Lijie(Huang LJ),Gu Guoxian(Gu GX)
(Yue Yang Hospital,Shanghai College of Traditional Chinese Medicine,Shanghai 200043)
ABSTRACT OBJECTIVE：The methodology of quantitative analysis of icariin in Chinese herb Heiba Epimebii was investigated and the content of ICARIINE OF HEIBA EPIMEBII in different parts,different variety and different planting areas of the plant was also measured.METHOD:The 23 samples in seven variety of Heiba Epimebii were measured with RP-HPLC technique.The analysis column of this method was PERKIN-EIMER-SH/5C18 column, the flow phase was CH3CN-water-36% acetic acid(25∶73.5∶1.5) and flow velocity was 1.0ml/min.The wavelength of UV for the analysis was 270nm.RESULTS:There are excellent linear correlation in two ranges,0.0212～0.127μg and 0.53～1.696μg,with this quantitative method.The content of icariin in different parts,different variety and different planting areas of the plant were 0.00307%～1.55%.The quantitative distribution of icariin in a plant of Heiba Epimebii is leaf>leaf stalk>stem>root.CONCLUSION:The content of icariin was obviously variable in different variety and different planting areas of Heiba Epimebii.This quantitative measurement method is an easy way to select good variety and extend source of this kind of Chinese medicine
, 百拇医药
KEY WORDS Heiba Epimebii,icariin,RP-HPLC,content measurement
淫羊藿为小檗科淫羊藿属Epimedium植物。1995版《中华人民共和国药典》载有5种淫羊藿为药用植物，分别为淫羊藿Epimedium Breuicornum Maxin、箭叶淫羊藿Epimedium Sagittatum Maxin、柔毛淫羊藿Epimedium Pubescens Maxin、巫山淫羊藿Epimedium Washanense T.Sying、朝鲜淫羊藿Epimedium Koreanum Maxin的干燥地上部分。淫羊藿性辛、甘、温，有补肝肾，强筋骨，祛风湿的功效。《本草纲目》曰：“淫羊藿味甘，气香，性温不寒，能益精气，乃手足阳明三焦命门药也。”它作为传统的补肾壮阳药，因其独特的化学成分和显著的生物活性一直成为国内外研究的热点之一。据多种药理实验表明，淫羊藿苷icariin 为其主要化学成分。有关淫羊藿苷的含量测定方法有一阶导数光谱法[1]，二阶导数光谱法[2]，薄层扫描法[3，4]，紫外分光光度法[5，6]，高效液相色谱法[7～14]等。本文采用高效液相色谱法对不同品种不同产地及不同药用部位淫羊藿属植物中的淫羊藿苷进行含量测定，该法简便易行，结果准确，为筛选优良品种，扩大药用资源提供了质量控制的科学依据。
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1 实验材料
1.1 仪器与色谱条件
仪器：PE公司的HPLC仪；PE 1022 LC PLUS色谱工作站；PE 235C DETECTOR DAD 检测仪；PE SERIES 200 IC PUMP 泵；电子天平 MD100-1 SHANGPING；离心机 80-1(上海手术器械厂)。
色谱条件：色谱柱：PERKIN-EIMER-SH/5C18；流动相：乙腈-水-36%乙酸(25∶73.5∶1.5)；流速：1.0ml/min；检测波长：270nm；柱温：室温。
1.2 试剂、对照品及样品
甲醇(HPLC级)；双蒸水；乙酸(分析纯)；淫羊藿苷标准品(由中国药品生物制品鉴定所提供)；样品由上海医科大学施大文教授鉴定并提供。
, 百拇医药
样 品
部 位
来 源
1
黔岭淫羊藿
叶
贵州黔岭山
2
E.Leptorrhizum
叶
上海药材公司
3
茎
, 百拇医药
贵州黔岭山
4
巫山淫羊藿
叶茎
贵州
5
E. Washanense
根
陕西安康
6
茎
陕西安康
7
, http://www.100md.com
叶
陕西安康
8
箭叶淫羊藿
茎
陕西安康
9
E. Sagittatum
叶
陕西安康
10
叶
安徽
, 百拇医药
11
茎
安徽
12
叶
广西灵山
13
宝兴淫羊藿
叶
云南
14
E.Davidii
茎
, 百拇医药 云南
15
叶茎
湖南
16
柔毛淫羊藿
茎
四川灌县
17
E.Pubescens
叶
四川灌县
18
, http://www.100md.com 朝鲜淫羊藿
叶
洛阳
19
E.Grandiflorum
茎叶
辽宁
20
叶茎
青海药检所
21
淫羊藿
叶茎
, 百拇医药
无锡
22
E.Brevicornum
叶茎
浙江临安
23
叶茎
陕西
2 实验方法
2.1 吸收波长选择
取上述淫羊藿苷的标准品溶液，分别在波长235～360nm间，采用DAD紫外检测器，分别在淫羊藿色谱峰的顶点和两侧各取一点进行扫描，表明该组分在270nm处有较大吸收，见图1。故选择270nm为测定波长。
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2.2 线性范围考查
取淫羊藿苷标准品，甲醇溶解，经0.45um滤膜过滤，定容，得浓度为0.106mg/ml的淫羊藿苷标准溶液，在本实验条件下，分别进样5,8,12和16μl,求出峰面积与淫羊藿苷量之间的线性关系，结果表明在0.53～1.696μg范围内呈良好线性关系，标准曲线见图2。并求得回归方程为Y1=1.75791×107+9.12783×107X。相关系数r=0.99892。考虑到有些样品的淫羊藿苷含量很低，所以又制备了低浓度的标准曲线：另取经稀释的0.0106μg淫羊藿标准溶液，分别进样2,5,8，12和14μl,结果表明在0.0121～0.127μg淫羊藿苷范围内，峰面积与淫羊藿苷量线性良好。标准曲线见图3。得回归方程Y2=7.14382×105+8.91207×107X，相关系数r=0.99941。
, 百拇医药
图1 淫羊藿紫外吸收曲线
图2 高浓度的标准曲线
图3 低浓度的标准曲线
2.3 实验条件考察
2.3.1流动相选择 本实验比较了甲醇-水(20∶80)；乙腈-水(25∶75)；乙腈-水-36%乙酸(25∶73.5∶1.5)三种不同的流动相，结果表明乙腈-水-36%乙酸(25∶73.5∶1.5)作流动相时，从分析时间及峰形看都较其它两者为好。
2.3.2 提取溶剂考察 以9号箭叶淫羊藿(叶)作分析样品，用不同溶剂超声提取30min，以淫羊藿苷含量作指标,结果见表1。
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表1 提取溶剂的考察 提取溶剂
含量
无水乙醇
0.665%
70%乙醇
1.27%
70%甲醇
1.42%
甲醇
1.48%
结果表明，以甲醇作溶剂提取淫羊藿苷效果最好。
2.3.3 超声提取时间的考察 以9号箭叶淫羊藿(叶)、20号朝鲜淫羊藿(叶茎)、21号淫羊藿(叶茎)作为样品，甲醇为溶剂，进行超声提取，以淫羊藿苷含量作指标，结果见表2。表2 超声提取时间的考察/含量% 样品编号
, 百拇医药
时间/min
10
20
30
40
9
1.07
1.36
1.49
1.42
20
0.165
0.331
, http://www.100md.com
0.375
0.388
21
0.128
0.293
0.343
0.339
结果表明，超声提取30min基本上可将样品中淫羊藿苷提取完全，故本实验采用甲醇作溶剂，超声提取30min来制备样品液。
2.4 精密度实验
以6号巫山淫羊藿(茎)及17号柔毛淫羊藿(叶)为样品。分别连续进样8次，每次进样20μl。测得淫羊藿苷及峰面积含量，求得RSD。结果见表4-1、表4-2。表4-1 6号样品的精密度实验
, http://www.100md.com
面 积
含量/%
RSD/%
1
23799936
0.0311
2
21318832
0.0278
3
22352960
0.0292
4
, http://www.100md.com
23429920
0.0306
4.55
5
22707808
0.0296
6
22607808
0.0295
7
21693648
0.0283
8
, 百拇医药
20810912
0.0272
表4-2 17号样品的精密度实验
面 积
含量/%
RSD/%
1
298129376
1.56
2
308934592
1.62
, 百拇医药 3
318512384
1.68
4
288472096
1.52
4.205
5
286131072
1.49
6
283377216
1.48
, http://www.100md.com
7
297444928
1.56
8
286574251
1.51
2.5 回收率实验
精密称取适量的6号巫山淫羊藿(茎)、17号柔毛淫羊藿(叶)、23号淫羊藿(叶茎)样品，分别定量加入淫羊藿苷标准品溶液后，按上述供试品溶液制备法制备供试液，根据回归方程1分别测得淫羊藿苷回收率，见表5-1A、5-1B、5-1C。表5-1A 6号样品加样回收率 样品称
量/g
淫羊藿苷
, 百拇医药
量/mg
加入标准
品量/mg
检出量
/mg
回收率
/%
平均回
收率/%
RSD
/%
0.406
0.116
, 百拇医药
0.30
0.404
95.74
0.351
0.101
0.35
0.439
96.57
95.57
1.322
0.195
0.056
0.45
, 百拇医药
0.4797
94.15
表5-1B 17号样品柔毛淫羊藿 样品称
量/g
淫羊藿苷
量/mg
加入标准
品量/mg
检出量
/mg
回收率
/%
平均回
, 百拇医药
收率/%
RSD
/%
0.088
1.35
0.80
2.14
98.75
0.090
1.38
1.2
2.55
97.5
, http://www.100md.com
96.25
3.436
0.091
1.39
1.6
2.87
92.5
表5-1C 23号样品加样回收率 样品称
量/g
淫羊藿苷
量/mg
加入标准
品量/mg
, 百拇医药
检出量
/mg
回收率
/%
平均回
收率/%
RSD
/%
0.1
0.537
0.3
0.84
101.6
, 百拇医药
0.103
0.553
0.4
0.946
98.25
97.42
4.781
0.102
0.548
0.5
1.01
92.4
以2号黔岭淫羊藿(叶)、12号箭叶淫羊藿(叶)作样品，在其生药中分别定量加入对照品溶液后，同上述供试品溶液制备法制备进样液，根据回归方程2分别测得回收率，见表5-2A、5-2B。表5-2A 2号样品加样回收率 样品称
, http://www.100md.com
量/g
淫羊藿苷
量/mg
加入标准
品量/mg
检出量
/mg
回收率
/%
平均回
收率/%
RSD
/%
, 百拇医药
0.294
9.03
5
12.9
77.4
0.296
9.09
10
17.14
88.5
82.16
6.95
0.303
, 百拇医药
9.3
15
21.4
80.6
表5-2B 12号样品加样回收率 样品称
量/g
淫羊藿苷
量/mg
加入标准
品量/mg
检出量
/mg
回收率
, http://www.100md.com
/%
平均回
收率/%
RSD
/%
0.316
24.1
40
60.3
88.0
0.316
24.1
80
, 百拇医药
106
81.8
83.2
5.14
0.318
24.2
100
104
79.8
2.6 样品测定
称取淫羊藿叶的样品约0.08g，淫羊藿根或茎的样品约0.3g，以10ml甲醇超声提取30min，冷却，定容10ml，离心，上清液经0.45um滤膜滤过，进样20ul，分别测得各种样品中淫羊藿苷的含量，综合结果见表6-A、6-B、6-C色谱图见图4。表6-A 不同品种的叶中淫羊藿苷含量的比较 品 种
, 百拇医药
部位
来源
含量/%
平均含
量/%
CV
/%
黔岭淫羊藿
叶
市售
0.00299 0.00312 0.00311
0.00307
0.0921
, 百拇医药
黔岭淫羊藿
叶
贵州
0.00349 0.00384 0.00357
0.00363
5.0495
巫山淫羊藿
叶
陕西
0.456 0.423 0.450
0.443
3.968
, 百拇医药
箭叶淫羊藿
叶
陕西
1.49 1.60 1.48
1.55
4.37
箭叶淫羊藿
叶
安徽
0.0351 0.0393 0.0361
0.368
5.963
, 百拇医药 箭叶淫羊藿
叶
广西
0.328 0.3312 0.341
0.334
1.997
宝兴淫羊藿
叶
云南
0.538 0.559 0.588
0.562
4.468
柔毛淫羊藿
, 百拇医药
叶
四川
1.54 1.51 1.54
1.53
1.132
朝鲜淫羊藿
叶
洛阳
0.727 0.725 0.698
0.717
2.26
表6-B 不同品种的茎中淫羊藿苷含量的比较 品 种
, http://www.100md.com
部位
来源
含量/%
平均含
量/%
RSD
/%
黔岭淫羊藿
茎
贵州
0.0446 0.0472 0.0429
0.0449
4.8
, 百拇医药
巫山淫羊藿
茎
陕西
0.0278 0.0292 0.0291
0.0287
2.72
箭叶淫羊藿
茎
陕西
0.0351 0.393 0.0361
0.0368
5.963
, http://www.100md.com
箭叶淫羊藿
茎
安徽
0.00775 0.00796 0.00715
0.00762
5.516
宝兴淫羊藿
茎
云南
0.0412 0.0391 0.0383
0.0395
3.789
, 百拇医药
柔毛淫羊藿
茎
四川
0.0521 0.0529 0.0512
0.0521
1.634
表6-C 不同品种的叶茎中淫羊藿苷含量的比较 品 种
部位
来源
含量/%
平均含
量/%
, 百拇医药
RSD
/%
巫山淫羊藿
叶茎
贵州
0.0758 0.0748 0.0754
0.0753
0.812
宝兴淫羊藿
叶茎
湖南
0.0362 0.0384 0.0372
, 百拇医药
0.0373
2.956
朝鲜淫羊藿
叶茎
辽宁
0.362 0.382 0.394
0.379
4.267
朝鲜淫羊藿
叶茎
青海
0.399 0.407 0.410
, 百拇医药
0.405
1.408
淫羊藿
叶茎
无锡
0.372 0.346 0.357
0.358
3.647
淫羊藿
叶茎
浙江
0.745 0.683 0.715
, 百拇医药 0.714
4.343
淫羊藿
叶茎
陕西
0.536 0.549 0.528
0.537
1.98
巫山淫羊藿
根
陕西
0.0518 0.0532 0.0529
0.0526
, 百拇医药
1.40
图4 淫羊藿苷标准品与21号样品淫羊藿的HPLC图谱
1-淫羊藿苷标准品；2-21号样品淫羊藿
3 讨 论
3.1 本文采用RP-HPLC技术对不同产地、不同品种淫羊藿中淫羊藿苷的含量进行了比较研究。为探求高质量的淫羊藿品种和产地，筛选优良品种和扩大药源提供了简便易行的方法。
3.2 实验结果表明，不同品种、不同产地、不同药用部位的淫羊藿中淫羊藿苷的含量相差是十分悬殊的，其在植株中的分布是叶>叶茎>茎>根。从药典的要求来看，叶中含量应>1%，在本实验所分析的样品中，仅陕西产的箭叶淫羊藿和上厂四川产的柔毛淫羊藿才符合药典标准，即使是药典收载的巫山和朝鲜淫羊藿也不合格(见表6-A)。
, 百拇医药
3.3 根据淫羊藿的药用部位为地上部分来看，不同产地的朝鲜淫羊藿和淫羊藿品种其淫羊藿苷含量均较高，可达0.3%～0.7%(见表6-C),不同品种不同产地的淫羊藿茎和根的含量甚低(见表6-B),不宜单独使用，3.4 黔岭淫羊藿和宝兴淫羊藿为非药典收载品种,前者叶中淫羊藿苷的含量甚微,仅达十万分之几;后者叶中含量尚可,达0.5%,但叶茎中含量甚低,其含量分布与药典收载的巫山淫羊藿接近，参考文献
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, 百拇医药
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收稿日期：1999-03-22, 百拇医药
单位：黄礼杰(上海中医药大学 上海 200332)；徐玲玲 顾国献(上海中医药大学附属岳阳中西医结合医院 上海 200437)
关键词：淫羊藿；淫羊藿苷；RP-HPLC；含量测定
中国现代应用药学000209 摘要 目的：对中药淫羊藿中淫羊藿苷的含量分析进行方法学研究，并测定淫羊藿的不同产地、不同品种、不同药用部位的淫羊藿苷的含量。方法：采用RP-HPLC技术对7个品种23个样品进行测定。以PERKIN-EIMER-SH/5C18柱为分析柱，流动相为乙腈-水-36%乙酸(25∶73.5∶1.5)流速1.0ml/min。UV检测波长270nm。结果：本方法测定淫羊藿苷含量在0.0212～0.127μg，0.53～1.696μg范围内呈良好的线性关系。不同产地、不同品种、不同药用部位的淫羊藿其淫羊藿苷的含量为0.00307%～1.55%。同一植株不同部位中淫羊藿苷的含量分布叶>叶茎>茎>根。结论：淫羊藿由于产地不同、品种不同其淫羊藿苷的含量相差悬殊。本测定方法为筛选优良品种和扩大药源提供了简便易行的方法。
, 百拇医药
HPLC analysis of icariine of heiba epimebii in different variety and different planting areas
Xu Lingling(Xu LL),Huang Lijie(Huang LJ),Gu Guoxian(Gu GX)
(Yue Yang Hospital,Shanghai College of Traditional Chinese Medicine,Shanghai 200043)
ABSTRACT OBJECTIVE：The methodology of quantitative analysis of icariin in Chinese herb Heiba Epimebii was investigated and the content of ICARIINE OF HEIBA EPIMEBII in different parts,different variety and different planting areas of the plant was also measured.METHOD:The 23 samples in seven variety of Heiba Epimebii were measured with RP-HPLC technique.The analysis column of this method was PERKIN-EIMER-SH/5C18 column, the flow phase was CH3CN-water-36% acetic acid(25∶73.5∶1.5) and flow velocity was 1.0ml/min.The wavelength of UV for the analysis was 270nm.RESULTS:There are excellent linear correlation in two ranges,0.0212～0.127μg and 0.53～1.696μg,with this quantitative method.The content of icariin in different parts,different variety and different planting areas of the plant were 0.00307%～1.55%.The quantitative distribution of icariin in a plant of Heiba Epimebii is leaf>leaf stalk>stem>root.CONCLUSION:The content of icariin was obviously variable in different variety and different planting areas of Heiba Epimebii.This quantitative measurement method is an easy way to select good variety and extend source of this kind of Chinese medicine
, 百拇医药
KEY WORDS Heiba Epimebii,icariin,RP-HPLC,content measurement
淫羊藿为小檗科淫羊藿属Epimedium植物。1995版《中华人民共和国药典》载有5种淫羊藿为药用植物，分别为淫羊藿Epimedium Breuicornum Maxin、箭叶淫羊藿Epimedium Sagittatum Maxin、柔毛淫羊藿Epimedium Pubescens Maxin、巫山淫羊藿Epimedium Washanense T.Sying、朝鲜淫羊藿Epimedium Koreanum Maxin的干燥地上部分。淫羊藿性辛、甘、温，有补肝肾，强筋骨，祛风湿的功效。《本草纲目》曰：“淫羊藿味甘，气香，性温不寒，能益精气，乃手足阳明三焦命门药也。”它作为传统的补肾壮阳药，因其独特的化学成分和显著的生物活性一直成为国内外研究的热点之一。据多种药理实验表明，淫羊藿苷icariin 为其主要化学成分。有关淫羊藿苷的含量测定方法有一阶导数光谱法[1]，二阶导数光谱法[2]，薄层扫描法[3，4]，紫外分光光度法[5，6]，高效液相色谱法[7～14]等。本文采用高效液相色谱法对不同品种不同产地及不同药用部位淫羊藿属植物中的淫羊藿苷进行含量测定，该法简便易行，结果准确，为筛选优良品种，扩大药用资源提供了质量控制的科学依据。
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1 实验材料
1.1 仪器与色谱条件
仪器：PE公司的HPLC仪；PE 1022 LC PLUS色谱工作站；PE 235C DETECTOR DAD 检测仪；PE SERIES 200 IC PUMP 泵；电子天平 MD100-1 SHANGPING；离心机 80-1(上海手术器械厂)。
色谱条件：色谱柱：PERKIN-EIMER-SH/5C18；流动相：乙腈-水-36%乙酸(25∶73.5∶1.5)；流速：1.0ml/min；检测波长：270nm；柱温：室温。
1.2 试剂、对照品及样品
甲醇(HPLC级)；双蒸水；乙酸(分析纯)；淫羊藿苷标准品(由中国药品生物制品鉴定所提供)；样品由上海医科大学施大文教授鉴定并提供。
, 百拇医药
样 品
部 位
来 源
1
黔岭淫羊藿
叶
贵州黔岭山
2
E.Leptorrhizum
叶
上海药材公司
3
茎
, 百拇医药
贵州黔岭山
4
巫山淫羊藿
叶茎
贵州
5
E. Washanense
根
陕西安康
6
茎
陕西安康
7
, http://www.100md.com
叶
陕西安康
8
箭叶淫羊藿
茎
陕西安康
9
E. Sagittatum
叶
陕西安康
10
叶
安徽
, 百拇医药
11
茎
安徽
12
叶
广西灵山
13
宝兴淫羊藿
叶
云南
14
E.Davidii
茎
, 百拇医药 云南
15
叶茎
湖南
16
柔毛淫羊藿
茎
四川灌县
17
E.Pubescens
叶
四川灌县
18
, http://www.100md.com 朝鲜淫羊藿
叶
洛阳
19
E.Grandiflorum
茎叶
辽宁
20
叶茎
青海药检所
21
淫羊藿
叶茎
, 百拇医药
无锡
22
E.Brevicornum
叶茎
浙江临安
23
叶茎
陕西
2 实验方法
2.1 吸收波长选择
取上述淫羊藿苷的标准品溶液，分别在波长235～360nm间，采用DAD紫外检测器，分别在淫羊藿色谱峰的顶点和两侧各取一点进行扫描，表明该组分在270nm处有较大吸收，见图1。故选择270nm为测定波长。
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2.2 线性范围考查
取淫羊藿苷标准品，甲醇溶解，经0.45um滤膜过滤，定容，得浓度为0.106mg/ml的淫羊藿苷标准溶液，在本实验条件下，分别进样5,8,12和16μl,求出峰面积与淫羊藿苷量之间的线性关系，结果表明在0.53～1.696μg范围内呈良好线性关系，标准曲线见图2。并求得回归方程为Y1=1.75791×107+9.12783×107X。相关系数r=0.99892。考虑到有些样品的淫羊藿苷含量很低，所以又制备了低浓度的标准曲线：另取经稀释的0.0106μg淫羊藿标准溶液，分别进样2,5,8，12和14μl,结果表明在0.0121～0.127μg淫羊藿苷范围内，峰面积与淫羊藿苷量线性良好。标准曲线见图3。得回归方程Y2=7.14382×105+8.91207×107X，相关系数r=0.99941。
, 百拇医药
图1 淫羊藿紫外吸收曲线
图2 高浓度的标准曲线
图3 低浓度的标准曲线
2.3 实验条件考察
2.3.1流动相选择 本实验比较了甲醇-水(20∶80)；乙腈-水(25∶75)；乙腈-水-36%乙酸(25∶73.5∶1.5)三种不同的流动相，结果表明乙腈-水-36%乙酸(25∶73.5∶1.5)作流动相时，从分析时间及峰形看都较其它两者为好。
2.3.2 提取溶剂考察 以9号箭叶淫羊藿(叶)作分析样品，用不同溶剂超声提取30min，以淫羊藿苷含量作指标,结果见表1。
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表1 提取溶剂的考察 提取溶剂
含量
无水乙醇
0.665%
70%乙醇
1.27%
70%甲醇
1.42%
甲醇
1.48%
结果表明，以甲醇作溶剂提取淫羊藿苷效果最好。
2.3.3 超声提取时间的考察 以9号箭叶淫羊藿(叶)、20号朝鲜淫羊藿(叶茎)、21号淫羊藿(叶茎)作为样品，甲醇为溶剂，进行超声提取，以淫羊藿苷含量作指标，结果见表2。表2 超声提取时间的考察/含量% 样品编号
, 百拇医药
时间/min
10
20
30
40
9
1.07
1.36
1.49
1.42
20
0.165
0.331
, http://www.100md.com
0.375
0.388
21
0.128
0.293
0.343
0.339
结果表明，超声提取30min基本上可将样品中淫羊藿苷提取完全，故本实验采用甲醇作溶剂，超声提取30min来制备样品液。
2.4 精密度实验
以6号巫山淫羊藿(茎)及17号柔毛淫羊藿(叶)为样品。分别连续进样8次，每次进样20μl。测得淫羊藿苷及峰面积含量，求得RSD。结果见表4-1、表4-2。表4-1 6号样品的精密度实验
, http://www.100md.com
面 积
含量/%
RSD/%
1
23799936
0.0311
2
21318832
0.0278
3
22352960
0.0292
4
, http://www.100md.com
23429920
0.0306
4.55
5
22707808
0.0296
6
22607808
0.0295
7
21693648
0.0283
8
, 百拇医药
20810912
0.0272
表4-2 17号样品的精密度实验
面 积
含量/%
RSD/%
1
298129376
1.56
2
308934592
1.62
, 百拇医药 3
318512384
1.68
4
288472096
1.52
4.205
5
286131072
1.49
6
283377216
1.48
, http://www.100md.com
7
297444928
1.56
8
286574251
1.51
2.5 回收率实验
精密称取适量的6号巫山淫羊藿(茎)、17号柔毛淫羊藿(叶)、23号淫羊藿(叶茎)样品，分别定量加入淫羊藿苷标准品溶液后，按上述供试品溶液制备法制备供试液，根据回归方程1分别测得淫羊藿苷回收率，见表5-1A、5-1B、5-1C。表5-1A 6号样品加样回收率 样品称
量/g
淫羊藿苷
, 百拇医药
量/mg
加入标准
品量/mg
检出量
/mg
回收率
/%
平均回
收率/%
RSD
/%
0.406
0.116
, 百拇医药
0.30
0.404
95.74
0.351
0.101
0.35
0.439
96.57
95.57
1.322
0.195
0.056
0.45
, 百拇医药
0.4797
94.15
表5-1B 17号样品柔毛淫羊藿 样品称
量/g
淫羊藿苷
量/mg
加入标准
品量/mg
检出量
/mg
回收率
/%
平均回
, 百拇医药
收率/%
RSD
/%
0.088
1.35
0.80
2.14
98.75
0.090
1.38
1.2
2.55
97.5
, http://www.100md.com
96.25
3.436
0.091
1.39
1.6
2.87
92.5
表5-1C 23号样品加样回收率 样品称
量/g
淫羊藿苷
量/mg
加入标准
品量/mg
, 百拇医药
检出量
/mg
回收率
/%
平均回
收率/%
RSD
/%
0.1
0.537
0.3
0.84
101.6
, 百拇医药
0.103
0.553
0.4
0.946
98.25
97.42
4.781
0.102
0.548
0.5
1.01
92.4
以2号黔岭淫羊藿(叶)、12号箭叶淫羊藿(叶)作样品，在其生药中分别定量加入对照品溶液后，同上述供试品溶液制备法制备进样液，根据回归方程2分别测得回收率，见表5-2A、5-2B。表5-2A 2号样品加样回收率 样品称
, http://www.100md.com
量/g
淫羊藿苷
量/mg
加入标准
品量/mg
检出量
/mg
回收率
/%
平均回
收率/%
RSD
/%
, 百拇医药
0.294
9.03
5
12.9
77.4
0.296
9.09
10
17.14
88.5
82.16
6.95
0.303
, 百拇医药
9.3
15
21.4
80.6
表5-2B 12号样品加样回收率 样品称
量/g
淫羊藿苷
量/mg
加入标准
品量/mg
检出量
/mg
回收率
, http://www.100md.com
/%
平均回
收率/%
RSD
/%
0.316
24.1
40
60.3
88.0
0.316
24.1
80
, 百拇医药
106
81.8
83.2
5.14
0.318
24.2
100
104
79.8
2.6 样品测定
称取淫羊藿叶的样品约0.08g，淫羊藿根或茎的样品约0.3g，以10ml甲醇超声提取30min，冷却，定容10ml，离心，上清液经0.45um滤膜滤过，进样20ul，分别测得各种样品中淫羊藿苷的含量，综合结果见表6-A、6-B、6-C色谱图见图4。表6-A 不同品种的叶中淫羊藿苷含量的比较 品 种
, 百拇医药
部位
来源
含量/%
平均含
量/%
CV
/%
黔岭淫羊藿
叶
市售
0.00299 0.00312 0.00311
0.00307
0.0921
, 百拇医药
黔岭淫羊藿
叶
贵州
0.00349 0.00384 0.00357
0.00363
5.0495
巫山淫羊藿
叶
陕西
0.456 0.423 0.450
0.443
3.968
, 百拇医药
箭叶淫羊藿
叶
陕西
1.49 1.60 1.48
1.55
4.37
箭叶淫羊藿
叶
安徽
0.0351 0.0393 0.0361
0.368
5.963
, 百拇医药 箭叶淫羊藿
叶
广西
0.328 0.3312 0.341
0.334
1.997
宝兴淫羊藿
叶
云南
0.538 0.559 0.588
0.562
4.468
柔毛淫羊藿
, 百拇医药
叶
四川
1.54 1.51 1.54
1.53
1.132
朝鲜淫羊藿
叶
洛阳
0.727 0.725 0.698
0.717
2.26
表6-B 不同品种的茎中淫羊藿苷含量的比较 品 种
, http://www.100md.com
部位
来源
含量/%
平均含
量/%
RSD
/%
黔岭淫羊藿
茎
贵州
0.0446 0.0472 0.0429
0.0449
4.8
, 百拇医药
巫山淫羊藿
茎
陕西
0.0278 0.0292 0.0291
0.0287
2.72
箭叶淫羊藿
茎
陕西
0.0351 0.393 0.0361
0.0368
5.963
, http://www.100md.com
箭叶淫羊藿
茎
安徽
0.00775 0.00796 0.00715
0.00762
5.516
宝兴淫羊藿
茎
云南
0.0412 0.0391 0.0383
0.0395
3.789
, 百拇医药
柔毛淫羊藿
茎
四川
0.0521 0.0529 0.0512
0.0521
1.634
表6-C 不同品种的叶茎中淫羊藿苷含量的比较 品 种
部位
来源
含量/%
平均含
量/%
, 百拇医药
RSD
/%
巫山淫羊藿
叶茎
贵州
0.0758 0.0748 0.0754
0.0753
0.812
宝兴淫羊藿
叶茎
湖南
0.0362 0.0384 0.0372
, 百拇医药
0.0373
2.956
朝鲜淫羊藿
叶茎
辽宁
0.362 0.382 0.394
0.379
4.267
朝鲜淫羊藿
叶茎
青海
0.399 0.407 0.410
, 百拇医药
0.405
1.408
淫羊藿
叶茎
无锡
0.372 0.346 0.357
0.358
3.647
淫羊藿
叶茎
浙江
0.745 0.683 0.715
, 百拇医药 0.714
4.343
淫羊藿
叶茎
陕西
0.536 0.549 0.528
0.537
1.98
巫山淫羊藿
根
陕西
0.0518 0.0532 0.0529
0.0526
, 百拇医药
1.40
图4 淫羊藿苷标准品与21号样品淫羊藿的HPLC图谱
1-淫羊藿苷标准品；2-21号样品淫羊藿
3 讨 论
3.1 本文采用RP-HPLC技术对不同产地、不同品种淫羊藿中淫羊藿苷的含量进行了比较研究。为探求高质量的淫羊藿品种和产地，筛选优良品种和扩大药源提供了简便易行的方法。
3.2 实验结果表明，不同品种、不同产地、不同药用部位的淫羊藿中淫羊藿苷的含量相差是十分悬殊的，其在植株中的分布是叶>叶茎>茎>根。从药典的要求来看，叶中含量应>1%，在本实验所分析的样品中，仅陕西产的箭叶淫羊藿和上厂四川产的柔毛淫羊藿才符合药典标准，即使是药典收载的巫山和朝鲜淫羊藿也不合格(见表6-A)。
, 百拇医药
3.3 根据淫羊藿的药用部位为地上部分来看，不同产地的朝鲜淫羊藿和淫羊藿品种其淫羊藿苷含量均较高，可达0.3%～0.7%(见表6-C),不同品种不同产地的淫羊藿茎和根的含量甚低(见表6-B),不宜单独使用，3.4 黔岭淫羊藿和宝兴淫羊藿为非药典收载品种,前者叶中淫羊藿苷的含量甚微,仅达十万分之几;后者叶中含量尚可,达0.5%,但叶茎中含量甚低,其含量分布与药典收载的巫山淫羊藿接近，参考文献
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收稿日期：1999-03-22, 百拇医药