呋喃唑酮片大肠杆菌检验方法的探讨
作者：邱元素 王 珑
单位：厦门市药品检验所
关键词：
海峡药学990393 呋喃唑酮(痢特灵)片是硝基呋喃类的抗菌药，主要用于痢疾杆菌、大肠杆菌所引起的菌痢和肠炎，对大肠杆菌有很强的杀菌和抑菌能力，采用卫生学检查中几种处理样品的方法均无法检出呋喃唑酮片中的大肠杆菌，长期以来给检验工作造成困难。本文采用特殊的处理方法，即离心-双重滤膜结合法，在检验中尽最大限度降低呋喃唑酮在BL增菌液中的含量，以提高大肠杆菌的检出率，得到了满意结果。
1 材料 呋喃唑酮片(地产及市售，规格0.10g/片)，混合纤维素酯微孔滤膜，孔径规格0.45μm、1.2μm、3.0μm，大肠杆菌CMCC(B)[44102]、胆盐乳糖增菌液(BL)、伊红美蓝琼脂(EMB)及大肠杆菌生化反应用培养基均由中国药品生物制品检定所提供。
, 百拇医药
2 方法和结果 供试液先经离心，取上清液依次经过孔径为1.2μm或3.0μm的微孔滤膜和0.45μm的微孔滤膜过滤后取0.45μm的滤膜加入BL中增菌。
2.1 由于呋喃唑酮几乎不溶于水，故选用一次离心法、二次离心法和离心-滤膜法[1，2]以及离心-双重滤膜法进行方法比较，结果表明只有离心-双重滤膜结合法能确保阳性菌的检出。
表1 不同方法阳性菌的检出试验结果 方法
BL增菌48h
EMB平板分离
大肠杆菌
检出结果
一次离心法
, 百拇医药
微混
未长菌落
未检出
二次离心法
澄清
未长菌落
未检出
离心-滤膜法
澄清
未长菌落
未检出
离心-双重滤膜法
混浊、产气
, http://www.100md.com
典型的大肠
杆菌菌落
检出
2.2 人工污染呋喃唑酮片大肠杆菌的检出情况 选用8批样品加入大肠杆菌进行人工污染5d后，采用离心-双重滤膜法进行检验，结果表明8批均能检出。表2 人工污染大肠杆菌的阳性检出情况 药品
批次
BL增菌
48h
EMB
平板分离
大肠杆菌
检出结果
, 百拇医药
检出率
%
8批
8批出现混
浊、产气
8批呈典型菌落
8批检出
100
注：上述EMB平板分离的典型菌落均经生化反应确认检出大肠杆菌
3 讨论
3.1 虽然呋喃唑酮在水中的溶解仅达40mg/L[3]，但由于呋喃唑酮在BL增菌液中的最低抑菌浓度即MIC为0.01mg/L[4]，采用一次离心、二次离心法均未能使BL增菌液中的浓度低于0.01mg/L，采用2次离心-滤膜法，则由于供试液经孔径0.45μm滤膜过滤时残留呋喃唑酮，当加入BL增菌液后，呋喃唑酮的浓度仍高于MIC，因此大肠杆菌仍无法繁殖，而本文采用的离心-双重滤膜法，既能除去水中溶解的微量呋喃唑酮，又能把离心后上清液残留的呋喃唑酮截留在孔径1.2μm或3.0μm的滤膜上，最大程度地降低孔径0.45μm滤膜上的呋喃唑酮，也降低了BL增菌液中的呋喃唑酮浓度，所以大大提高了阳性检出率。
, 百拇医药
3.2 人工污染大肠杆菌5d仍能检出，说明离心-双重滤膜法检验过程中不影响大肠杆菌在BL增菌液中的繁殖，能有效地保证样品的阳性检出率。
3.3 离心-双重滤膜法能在很大程度上解决难溶于水的抗菌剂在BL增菌液中的浓度，故对今后开展口服抗生素控制菌的检验具有较高的参考意义。
3.4 因埃希氏杆菌属的菌体，直径为0.4～0.7μm，长度为1.0～3.0μm，笔者认为采用3.0μm孔径的滤膜比1.2μm的滤膜可使实际检验效果更佳。同时，笔者也认为选择何种规格的滤膜可因样品而异，这方面还有待进一步深入探讨。
参考文献
1.郑钧镛等：《药品微生物学及检验技术》，北京人民出版社， 1989；
2.药品卫生检验方法 1990；
3.Centennial Edition 《The Merck Index》 eleventh edition
4.滕宝霞等：痢特灵片大肠杆菌检验方法的探索 药物分析杂志 199 6；16(1)∶48～49, http://www.100md.com
单位：厦门市药品检验所
关键词：
海峡药学990393 呋喃唑酮(痢特灵)片是硝基呋喃类的抗菌药，主要用于痢疾杆菌、大肠杆菌所引起的菌痢和肠炎，对大肠杆菌有很强的杀菌和抑菌能力，采用卫生学检查中几种处理样品的方法均无法检出呋喃唑酮片中的大肠杆菌，长期以来给检验工作造成困难。本文采用特殊的处理方法，即离心-双重滤膜结合法，在检验中尽最大限度降低呋喃唑酮在BL增菌液中的含量，以提高大肠杆菌的检出率，得到了满意结果。
1 材料 呋喃唑酮片(地产及市售，规格0.10g/片)，混合纤维素酯微孔滤膜，孔径规格0.45μm、1.2μm、3.0μm，大肠杆菌CMCC(B)[44102]、胆盐乳糖增菌液(BL)、伊红美蓝琼脂(EMB)及大肠杆菌生化反应用培养基均由中国药品生物制品检定所提供。
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2 方法和结果 供试液先经离心，取上清液依次经过孔径为1.2μm或3.0μm的微孔滤膜和0.45μm的微孔滤膜过滤后取0.45μm的滤膜加入BL中增菌。
2.1 由于呋喃唑酮几乎不溶于水，故选用一次离心法、二次离心法和离心-滤膜法[1，2]以及离心-双重滤膜法进行方法比较，结果表明只有离心-双重滤膜结合法能确保阳性菌的检出。
表1 不同方法阳性菌的检出试验结果 方法
BL增菌48h
EMB平板分离
大肠杆菌
检出结果
一次离心法
, 百拇医药
微混
未长菌落
未检出
二次离心法
澄清
未长菌落
未检出
离心-滤膜法
澄清
未长菌落
未检出
离心-双重滤膜法
混浊、产气
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典型的大肠
杆菌菌落
检出
2.2 人工污染呋喃唑酮片大肠杆菌的检出情况 选用8批样品加入大肠杆菌进行人工污染5d后，采用离心-双重滤膜法进行检验，结果表明8批均能检出。表2 人工污染大肠杆菌的阳性检出情况 药品
批次
BL增菌
48h
EMB
平板分离
大肠杆菌
检出结果
, 百拇医药
检出率
%
8批
8批出现混
浊、产气
8批呈典型菌落
8批检出
100
注：上述EMB平板分离的典型菌落均经生化反应确认检出大肠杆菌
3 讨论
3.1 虽然呋喃唑酮在水中的溶解仅达40mg/L[3]，但由于呋喃唑酮在BL增菌液中的最低抑菌浓度即MIC为0.01mg/L[4]，采用一次离心、二次离心法均未能使BL增菌液中的浓度低于0.01mg/L，采用2次离心-滤膜法，则由于供试液经孔径0.45μm滤膜过滤时残留呋喃唑酮，当加入BL增菌液后，呋喃唑酮的浓度仍高于MIC，因此大肠杆菌仍无法繁殖，而本文采用的离心-双重滤膜法，既能除去水中溶解的微量呋喃唑酮，又能把离心后上清液残留的呋喃唑酮截留在孔径1.2μm或3.0μm的滤膜上，最大程度地降低孔径0.45μm滤膜上的呋喃唑酮，也降低了BL增菌液中的呋喃唑酮浓度，所以大大提高了阳性检出率。
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3.2 人工污染大肠杆菌5d仍能检出，说明离心-双重滤膜法检验过程中不影响大肠杆菌在BL增菌液中的繁殖，能有效地保证样品的阳性检出率。
3.3 离心-双重滤膜法能在很大程度上解决难溶于水的抗菌剂在BL增菌液中的浓度，故对今后开展口服抗生素控制菌的检验具有较高的参考意义。
3.4 因埃希氏杆菌属的菌体，直径为0.4～0.7μm，长度为1.0～3.0μm，笔者认为采用3.0μm孔径的滤膜比1.2μm的滤膜可使实际检验效果更佳。同时，笔者也认为选择何种规格的滤膜可因样品而异，这方面还有待进一步深入探讨。
参考文献
1.郑钧镛等：《药品微生物学及检验技术》，北京人民出版社， 1989；
2.药品卫生检验方法 1990；
3.Centennial Edition 《The Merck Index》 eleventh edition
4.滕宝霞等：痢特灵片大肠杆菌检验方法的探索 药物分析杂志 199 6；16(1)∶48～49, http://www.100md.com