牙本质龋中有机酸含量的比较研究
http://www.100md.com
山东医科大学学报 2000年第1期第38卷 论著
作者：王 铎 汪竹平 王 可 丁伟山 刘传华 刘师莲
单位：山东医科大学 1口腔系 2分子生物学实验室
关键词：牙本质；龋齿；酸类
山东医科大学000131摘 要：通过对牙本质龋中有机酸含量的测定，探讨牙本质龋形成原因。方法：32名病人(17～72岁)的40颗牙本质龋患牙标本以2.5%偏磷酸溶解，低温离心，上清液作气相色谱分析。 结果：所有牙本质龋患牙中均检测到乳酸、甲酸、乙酸、丙酸和丁酸，各有机酸含量由高到低依次为乳酸(32.78土2.72)g/L,甲酸(23.65±1.53)g/L，乙酸(5.37土1.26)g/L，丙酸(3.05土0.79)g/L，丁酸(0.71土0.66)g/L。结论：牙本质龋中的有机酸以乳酸含量最高，乳酸、甲酸、乙酸和丙酸占所有有机酸的98%以上。
分类号：R781.1 文献标识码：A
, 百拇医药
文章编号：1000-0496(2000)01-0092-02
COMPARATIVE STUDY OF THE ORGANIC ACIDS IN DENTIN CARLES
WANG Duo,WANG Zhu-ping,WANG Ke
(Dept. of Stomatolgy, Shandong Medical University)
Abstract：To explore the causes of dentin caries by assay of the content of organic acids in carious dentin. Methods:Carious dentin from forty human permanent teeth were analyzed by gas chromatography(GC). All the softened carious dentin were collected before clinical treatment by using a spoon excavator after the dental plaque and debris were carefully removed. The samples of carious dentin were homogenized in 2.5% metaphosphoric acid solution for five hours and then centrifuged at 10000r/min for ten minutes at 4℃. The supematant was assayed for organic acids by GC. Results: Lactate, formate,acetate, propionate and butyrate were detected in all samples. The mean concentration of each organic acid in the samples was as follows:lactate (32.78±2.72)ug/L, formate (23.65±1.53)g/L,acetate (5.37±1.26)g/L, propionate (3.05±0.79)g/L and butyrate (0.71±0.66)g/L. Conclusion: Lactate acid formate acid, acetate acid, propionate acid and butyrate acid constituted above 98% of all organic acids in carious dentin, with the content of lactate acid being the highest.
, http://www.100md.com
Keywords：Dentin;Dental caries; Acids 牙本质龋中的微生物代谢所产生的有机酸在无机质的脱矿、促进细菌的侵入和有机质的蛋白水解中均具有重要作用[1,2]。为探讨牙本质龋的成因，我们对牙本质龋中有机酸的组成及其含量作了定性和定量研究。1材料和方法1.1标本32名病人(17～72岁)牙本质龋患牙40颗。就诊前2h均未进食。标本收集方法：①患牙治疗前收集。患牙区阻滞或浸润麻醉，干棉球隔离患牙，去除表面菌斑及污物以后，用挖匙挖取所有的软化牙本质；②从拔除的牙齿上收集。拔除后立即用刮匙去除患牙表面菌斑，用挖匙收集所有龋洞内的软化牙本质。对照采用正常根面牙本质标本。取已萌出的无龋阻生第三磨牙10颗，将牙本质块用金钢砂车针磨成碎片，在研钵中研碎。标本收集后立即称重，放置于具盖密封的试管中-20℃贮存备测。l.2测定方法1.2.1仪器与试剂岛津GC-15A型气相色谱仪，配CR4A型数据处理机；不锈钢螺旋柱2mm*3mm，填充GDX101(80-100目)。标准乳酸、甲酸、乙酸、丙酸、丁酸和戊酸均为分析纯，临用时以2.5%偏磷酸稀释至0.25mol/L。偏磷酸(AR)，高碘酸(AR)，水为双蒸水。1.2.2色谱条件气体流速：载气：N250ml/min,H245ml/min，空气500ml/min，温度；测乳酸时柱温140℃，进样器150℃，氢焰检测器160℃;测其它有机酸时柱温190℃，进样器220℃，氢焰检测器220℃。1.2.3有机酸测定将标本以2.5%偏磷酸配制成150g/L的混悬液，匀化5h后，10000r/min、4℃离心10min。取5ul上清液加5ul10%高碘酸混合后进样1ul，在上述色谱条件下作样品乳酸分析。其它有机酸直接进洋1ul上清液分析。利用保留时间一致和峰加高法定性测定。用外标法进行定量测定，以单点校正法，用峰面积计算各有机酸的含量。2结果2.1标准有机酸及牙本质龋标本中的有机酸色谱图见图1、2。图1标准乳酸(A)和牙本质龋标本中乳酸(B)色谱图1.未知峰2.乳酸Fig.1Chromatographicfiguresofstandardlactate(A)andlactateincariousdentin(B)1.unknownpeak2.lactate图24种标准有机酸(A)和牙本质龋标本中的有机酸(B)色谱图1.甲酸2.乙酸3.丙酸4.丁酸Fig.2Chromatographicfiguresof4standardacids(A)andacidsincariousdentin(B)1.formate2.acetate3.propionate4.butyrate2.2精密度与回收率测定以一已知含量样品作标准，牙本质龋齿患牙有机酸测定均行回收试验，并重复测定5次。结果见表1。表1牙本质龋患牙有机酸测定精密度及回收率(%,n＝5)2.3牙本质龋患牙有机酸含量见表2。40颗牙本质龋标本中均检测到乳酸、甲酸、乙酸、丙酸和丁酸，保留时间分别为2.11min，1.29min，2.38min，4.35min.9.04min。不同标本中各有机酸含量存在差异，其中乳酸、甲酸、乙酸和丙酸占有机酸总量的98%以上，而对照牙本质标本中仅检测到极少量乙酸。表2牙本质龋患牙有机酸平均含量(P/g·L-1,x±s)3讨论近来，Hahn等人[3]报道了两种牙本质龋类型，其中一种含有大量的产乳酸菌，如链球菌、乳酸杆菌、放线菌等；另一种乳酸杆菌的含量很少。在碳水化合物存在的情况下，这些细菌能将其分解而产生大量乳酸。本实验的结果也表明部分标本中乳酸的含量达80%以上，这与牙菌斑中酸的组成相似，但在牙菌斑中，以乳酸为主的现象在l小时内即可发生变化，变成以乙酸为主，pH也逐渐趋向中性[4]，由于本实验所采标本为患者在2小时内未进食的患牙，因此牙本质龋以乳酸为主的现象至少持续2小时，因此我们认为，牙本质龋中酸的外扩散较牙菌斑中慢，被唾液中和的程度超过牙菌斑。本实验结果表明，牙本质龋中的有机酸以乳酸含量最高，其次依次为甲酸、乙酸、丙酸和丁酸，它们占有机酸总量的98%以上。分析有机酸的来源，一是外源性碳水化合物降解产生的有机酸扩散至牙本质龋中，因据报道[5]，软化的牙本质染料极易渗入，故当有菌斑覆盖活动性牙本质龋时，菌斑中产生的大量有机酸可扩散到龋损中并在此积聚。另一方面，牙本质龋中生存的微生物也可利用外源性碳水化合物产生有机酸。
, http://www.100md.com
基金项目：山东省自然抖学青年科学基金资助课题
参考文献：
[1]Michelich VJ，Schuster GS，Pashley DH.Bacterial penetration of human dentin in vitro[J].J Dent Res，1980,59:1398
[2]Goldberg M，Keil B.Action of a bacterial achromobacter collagenase on the soft carious dentine：an in vitro study with the scanning electron microscope[J].J Biol Buccale,1989,17:269
[3]Hahn CR，Falkler WA，Minah GE.Microbiological studies of carious dentine from human teeth with irreversible pulpitis[J].Arch Oral Biol，1991,36:147
[4]Margolis HC，Moreno EC.Composition of pooled p]aque fluid from caries-free and Caries positive individuals following sucrose exposure[J].J Dent Res，1992,71:1776
[5]Miller WA，Massler M.Permeability and staining of active and arrested lesions in dentine[J].Br Dent J.l962,112:187
收稿日期：1999-12-10, 百拇医药
单位：山东医科大学 1口腔系 2分子生物学实验室
关键词：牙本质；龋齿；酸类
山东医科大学000131摘 要：通过对牙本质龋中有机酸含量的测定，探讨牙本质龋形成原因。方法：32名病人(17～72岁)的40颗牙本质龋患牙标本以2.5%偏磷酸溶解，低温离心，上清液作气相色谱分析。 结果：所有牙本质龋患牙中均检测到乳酸、甲酸、乙酸、丙酸和丁酸，各有机酸含量由高到低依次为乳酸(32.78土2.72)g/L,甲酸(23.65±1.53)g/L，乙酸(5.37土1.26)g/L，丙酸(3.05土0.79)g/L，丁酸(0.71土0.66)g/L。结论：牙本质龋中的有机酸以乳酸含量最高，乳酸、甲酸、乙酸和丙酸占所有有机酸的98%以上。
分类号：R781.1 文献标识码：A
, 百拇医药
文章编号：1000-0496(2000)01-0092-02
COMPARATIVE STUDY OF THE ORGANIC ACIDS IN DENTIN CARLES
WANG Duo,WANG Zhu-ping,WANG Ke
(Dept. of Stomatolgy, Shandong Medical University)
Abstract：To explore the causes of dentin caries by assay of the content of organic acids in carious dentin. Methods:Carious dentin from forty human permanent teeth were analyzed by gas chromatography(GC). All the softened carious dentin were collected before clinical treatment by using a spoon excavator after the dental plaque and debris were carefully removed. The samples of carious dentin were homogenized in 2.5% metaphosphoric acid solution for five hours and then centrifuged at 10000r/min for ten minutes at 4℃. The supematant was assayed for organic acids by GC. Results: Lactate, formate,acetate, propionate and butyrate were detected in all samples. The mean concentration of each organic acid in the samples was as follows:lactate (32.78±2.72)ug/L, formate (23.65±1.53)g/L,acetate (5.37±1.26)g/L, propionate (3.05±0.79)g/L and butyrate (0.71±0.66)g/L. Conclusion: Lactate acid formate acid, acetate acid, propionate acid and butyrate acid constituted above 98% of all organic acids in carious dentin, with the content of lactate acid being the highest.
, http://www.100md.com
Keywords：Dentin;Dental caries; Acids 牙本质龋中的微生物代谢所产生的有机酸在无机质的脱矿、促进细菌的侵入和有机质的蛋白水解中均具有重要作用[1,2]。为探讨牙本质龋的成因，我们对牙本质龋中有机酸的组成及其含量作了定性和定量研究。1材料和方法1.1标本32名病人(17～72岁)牙本质龋患牙40颗。就诊前2h均未进食。标本收集方法：①患牙治疗前收集。患牙区阻滞或浸润麻醉，干棉球隔离患牙，去除表面菌斑及污物以后，用挖匙挖取所有的软化牙本质；②从拔除的牙齿上收集。拔除后立即用刮匙去除患牙表面菌斑，用挖匙收集所有龋洞内的软化牙本质。对照采用正常根面牙本质标本。取已萌出的无龋阻生第三磨牙10颗，将牙本质块用金钢砂车针磨成碎片，在研钵中研碎。标本收集后立即称重，放置于具盖密封的试管中-20℃贮存备测。l.2测定方法1.2.1仪器与试剂岛津GC-15A型气相色谱仪，配CR4A型数据处理机；不锈钢螺旋柱2mm*3mm，填充GDX101(80-100目)。标准乳酸、甲酸、乙酸、丙酸、丁酸和戊酸均为分析纯，临用时以2.5%偏磷酸稀释至0.25mol/L。偏磷酸(AR)，高碘酸(AR)，水为双蒸水。1.2.2色谱条件气体流速：载气：N250ml/min,H245ml/min，空气500ml/min，温度；测乳酸时柱温140℃，进样器150℃，氢焰检测器160℃;测其它有机酸时柱温190℃，进样器220℃，氢焰检测器220℃。1.2.3有机酸测定将标本以2.5%偏磷酸配制成150g/L的混悬液，匀化5h后，10000r/min、4℃离心10min。取5ul上清液加5ul10%高碘酸混合后进样1ul，在上述色谱条件下作样品乳酸分析。其它有机酸直接进洋1ul上清液分析。利用保留时间一致和峰加高法定性测定。用外标法进行定量测定，以单点校正法，用峰面积计算各有机酸的含量。2结果2.1标准有机酸及牙本质龋标本中的有机酸色谱图见图1、2。图1标准乳酸(A)和牙本质龋标本中乳酸(B)色谱图1.未知峰2.乳酸Fig.1Chromatographicfiguresofstandardlactate(A)andlactateincariousdentin(B)1.unknownpeak2.lactate图24种标准有机酸(A)和牙本质龋标本中的有机酸(B)色谱图1.甲酸2.乙酸3.丙酸4.丁酸Fig.2Chromatographicfiguresof4standardacids(A)andacidsincariousdentin(B)1.formate2.acetate3.propionate4.butyrate2.2精密度与回收率测定以一已知含量样品作标准，牙本质龋齿患牙有机酸测定均行回收试验，并重复测定5次。结果见表1。表1牙本质龋患牙有机酸测定精密度及回收率(%,n＝5)2.3牙本质龋患牙有机酸含量见表2。40颗牙本质龋标本中均检测到乳酸、甲酸、乙酸、丙酸和丁酸，保留时间分别为2.11min，1.29min，2.38min，4.35min.9.04min。不同标本中各有机酸含量存在差异，其中乳酸、甲酸、乙酸和丙酸占有机酸总量的98%以上，而对照牙本质标本中仅检测到极少量乙酸。表2牙本质龋患牙有机酸平均含量(P/g·L-1,x±s)3讨论近来，Hahn等人[3]报道了两种牙本质龋类型，其中一种含有大量的产乳酸菌，如链球菌、乳酸杆菌、放线菌等；另一种乳酸杆菌的含量很少。在碳水化合物存在的情况下，这些细菌能将其分解而产生大量乳酸。本实验的结果也表明部分标本中乳酸的含量达80%以上，这与牙菌斑中酸的组成相似，但在牙菌斑中，以乳酸为主的现象在l小时内即可发生变化，变成以乙酸为主，pH也逐渐趋向中性[4]，由于本实验所采标本为患者在2小时内未进食的患牙，因此牙本质龋以乳酸为主的现象至少持续2小时，因此我们认为，牙本质龋中酸的外扩散较牙菌斑中慢，被唾液中和的程度超过牙菌斑。本实验结果表明，牙本质龋中的有机酸以乳酸含量最高，其次依次为甲酸、乙酸、丙酸和丁酸，它们占有机酸总量的98%以上。分析有机酸的来源，一是外源性碳水化合物降解产生的有机酸扩散至牙本质龋中，因据报道[5]，软化的牙本质染料极易渗入，故当有菌斑覆盖活动性牙本质龋时，菌斑中产生的大量有机酸可扩散到龋损中并在此积聚。另一方面，牙本质龋中生存的微生物也可利用外源性碳水化合物产生有机酸。
, http://www.100md.com
基金项目：山东省自然抖学青年科学基金资助课题
参考文献：
[1]Michelich VJ，Schuster GS，Pashley DH.Bacterial penetration of human dentin in vitro[J].J Dent Res，1980,59:1398
[2]Goldberg M，Keil B.Action of a bacterial achromobacter collagenase on the soft carious dentine：an in vitro study with the scanning electron microscope[J].J Biol Buccale,1989,17:269
[3]Hahn CR，Falkler WA，Minah GE.Microbiological studies of carious dentine from human teeth with irreversible pulpitis[J].Arch Oral Biol，1991,36:147
[4]Margolis HC，Moreno EC.Composition of pooled p]aque fluid from caries-free and Caries positive individuals following sucrose exposure[J].J Dent Res，1992,71:1776
[5]Miller WA，Massler M.Permeability and staining of active and arrested lesions in dentine[J].Br Dent J.l962,112:187
收稿日期：1999-12-10, 百拇医药