卡尔曼滤波光度法同时测定槐米中芦丁和槲皮素
作者：王丽琴 党高潮 顾莹
单位：王丽琴 党高潮(西北大学分析测试研究中心)；顾莹(陕西省中医药研究院 西安 710013)
关键词：
药物分析杂志000125 芦丁是槲皮素3位上的羟基与芸香糖脱水形成的苷，二者均属黄酮类化合物[1]。由于二者的吸收光谱严重重叠，它们的定量分析方法，均需分离后进行测定，繁琐费时，误差较大。卡尔曼滤波对重叠的谱峰有较强的分辨功能[2～4]，本文采用卡尔曼滤波分光光度法不经分离，对混合物(模拟样品、槐米提取物和市售梗塞净药物)中的芦丁和槲皮素进行同时测定。方法简便快速，精密度和准确度亦令人满意。
1 仪器与试剂
730型和751 G紫外可见分光光度计(上海第三分析仪器厂和上海分析仪器厂)，386微机。
, 百拇医药
芦丁、槲皮素标准品(中国药品生物制品检定所)，甲醇、氢氧化钠、醋酸钠均为国产分析纯，水为2次蒸馏水。
2 实验方法
2.1 标准溶液配制 分别准确称取2.0 mg左右的芦丁、槲皮素，用甲醇溶解，分别移入25 mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度。分别吸取一定体积的标准溶液于25 mL容量瓶中，以甲醇-水(1∶4)稀释至刻度，配制2个系列(每个系列3～5个)溶液。
2.2 吸光系数确定 取上述系列标准溶液，在230～300 nm范围内，每间隔2 nm测其吸光度，数据进行线性回归处理，求出各自的吸光系数。
2.3 样品测定 模拟样品：分别移取不同体积的芦丁和槲皮素标准溶液于同一容量瓶中，以甲醇-水(1∶4)稀释至刻度，在同样的波长范围测吸光度，上机滤波处理，求出其含量；对于实际样品：只需准确称取一定量样品，甲醇溶解后，以上述相同的方法测定其芦丁和槲皮素的含量。
, 百拇医药
3 结果与讨论
3.1 溶剂的选择 主要从样品的溶解度和稳定性考虑。选稀碱(醋酸钠、氢氧化钠)水溶液、甲醇、不同比例的甲醇-水进行试验。结果表明，样品不溶于醋酸钠溶液；而稀氢氧化钠溶液对待测物质的稳定性影响较大，很短时间就使芦丁、槲皮素2种溶液由亮黄色变为棕黄色；芦丁在1∶4的甲醇水溶液中稳定性最好(放置4 h吸光度变化小于0.5%)，槲皮素在纯甲醇中能较长时间存在(放置3 h吸光度变化亦小于0.5%)，且其在1∶4的甲醇-水溶剂中能稳定1 h，符合测定要求。所以本文在配制标准溶液、测定样品均取甲醇-水(1∶4)为溶剂。
3.2 吸收曲线 图1是芦丁、槲皮素及其混合溶液的吸收光谱。从图1可知，芦丁、槲皮素的λmax相差很小，用普通光度法无法进行同时测定；但它们混合溶液的吸光度符合加和性原则，可满足卡尔曼滤波分光光度法同时测定多组分的条件。
, http://www.100md.com
图1 吸收曲线
1. 槲皮素(3.84 μg.mL-1) 2. 芦丁(16.0 μg.mL-1)
3. 混合溶液(浓度同上)
3.3 确定系数矩阵 根据吸收光谱，芦丁、槲皮素在230～400 nm范围，波形和加和性均较好，因而首先在该波段，间隔5 nm求系数矩阵，2物质的吸光度与浓度之间的线性关系还可以(相关系数在0.99左右)，但滤波后芦丁的回收率偏低，只有90%。在300～370 nm，间隔2 nm，测得吸光度与浓度间线性关系不好，引起吸光系数变化异常。在230～300 nm，间隔2 nm测定，计算发现：芦丁、槲皮素加和性良好，线性相关系数一般在0.999以上，样品中2者的回收率亦达97%。其原因可能是该波段均位于2个待测物质的最大吸收峰附近，光度测量的灵敏度和准确度均较高所致。因此选该区间为测量范围，吸光系数矩阵为H36×2。
, http://www.100md.com
3.4 精密度和回收率实验 取芦丁、槲皮素浓度一定的模拟样品分别测定5次，计算RSD分别为2.54%和1.54%。取已知含量的模拟样品6个，加入芦丁、槲皮素适量，测定其含量，结果方法的平均回收率分别为：芦丁99.1%(n=6,RSD=1.58%)，槲皮素99.2%(n=6,RSD=1.98%)。
3.5 样品测定 槐米提取物中主要含有芦丁，但也有部分芦丁水解失去芸香糖生成的槲皮素。采用本文提出的方法与药典方法[5]测定了待测物质的含量，结果列于表1。与药典方法相比，卡尔曼滤波分光光度法(KFUV)简便快速，克服了乙醚、甲醇2次回流提取的冗长繁琐操作，方法的准确度和精密度也较高。
表1 槐米提取物中芦丁和槲皮素的测定(n=3) 组 分
含量±RSD/%
本 法
, 百拇医药
药典法
芦 丁
82.32±0.45
81.98±1.9
槲皮素
9.59±1.2
■
参考文献：
[1]南京药学院.药物化学.北京：人民卫生出版社，1978.529
[2]Poulisse H N J.Multicomponent-analysis computations based on Kalman filtering.Anal Chim Acta,1979,112:361
[3]李志良，刘一鸣，俞汝勤.卡尔曼滤波分光光度法用于复方雷琐涂剂中苯酚与间苯二酚的测定.高等学校化学学报，1989，10：575
[4]蒋万银，李国峰，李志明等.卡尔曼滤波分光光度法测定复方双氯灭痛注射液的含量.中国药学杂志，1994，29：159
[5]中国药典.1995.一部：311
收稿日期：1999-03-09, http://www.100md.com
单位：王丽琴 党高潮(西北大学分析测试研究中心)；顾莹(陕西省中医药研究院 西安 710013)
关键词：
药物分析杂志000125 芦丁是槲皮素3位上的羟基与芸香糖脱水形成的苷，二者均属黄酮类化合物[1]。由于二者的吸收光谱严重重叠，它们的定量分析方法，均需分离后进行测定，繁琐费时，误差较大。卡尔曼滤波对重叠的谱峰有较强的分辨功能[2～4]，本文采用卡尔曼滤波分光光度法不经分离，对混合物(模拟样品、槐米提取物和市售梗塞净药物)中的芦丁和槲皮素进行同时测定。方法简便快速，精密度和准确度亦令人满意。
1 仪器与试剂
730型和751 G紫外可见分光光度计(上海第三分析仪器厂和上海分析仪器厂)，386微机。
, 百拇医药
芦丁、槲皮素标准品(中国药品生物制品检定所)，甲醇、氢氧化钠、醋酸钠均为国产分析纯，水为2次蒸馏水。
2 实验方法
2.1 标准溶液配制 分别准确称取2.0 mg左右的芦丁、槲皮素，用甲醇溶解，分别移入25 mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度。分别吸取一定体积的标准溶液于25 mL容量瓶中，以甲醇-水(1∶4)稀释至刻度，配制2个系列(每个系列3～5个)溶液。
2.2 吸光系数确定 取上述系列标准溶液，在230～300 nm范围内，每间隔2 nm测其吸光度，数据进行线性回归处理，求出各自的吸光系数。
2.3 样品测定 模拟样品：分别移取不同体积的芦丁和槲皮素标准溶液于同一容量瓶中，以甲醇-水(1∶4)稀释至刻度，在同样的波长范围测吸光度，上机滤波处理，求出其含量；对于实际样品：只需准确称取一定量样品，甲醇溶解后，以上述相同的方法测定其芦丁和槲皮素的含量。
, 百拇医药
3 结果与讨论
3.1 溶剂的选择 主要从样品的溶解度和稳定性考虑。选稀碱(醋酸钠、氢氧化钠)水溶液、甲醇、不同比例的甲醇-水进行试验。结果表明，样品不溶于醋酸钠溶液；而稀氢氧化钠溶液对待测物质的稳定性影响较大，很短时间就使芦丁、槲皮素2种溶液由亮黄色变为棕黄色；芦丁在1∶4的甲醇水溶液中稳定性最好(放置4 h吸光度变化小于0.5%)，槲皮素在纯甲醇中能较长时间存在(放置3 h吸光度变化亦小于0.5%)，且其在1∶4的甲醇-水溶剂中能稳定1 h，符合测定要求。所以本文在配制标准溶液、测定样品均取甲醇-水(1∶4)为溶剂。
3.2 吸收曲线 图1是芦丁、槲皮素及其混合溶液的吸收光谱。从图1可知，芦丁、槲皮素的λmax相差很小，用普通光度法无法进行同时测定；但它们混合溶液的吸光度符合加和性原则，可满足卡尔曼滤波分光光度法同时测定多组分的条件。
, http://www.100md.com
图1 吸收曲线
1. 槲皮素(3.84 μg.mL-1) 2. 芦丁(16.0 μg.mL-1)
3. 混合溶液(浓度同上)
3.3 确定系数矩阵 根据吸收光谱，芦丁、槲皮素在230～400 nm范围，波形和加和性均较好，因而首先在该波段，间隔5 nm求系数矩阵，2物质的吸光度与浓度之间的线性关系还可以(相关系数在0.99左右)，但滤波后芦丁的回收率偏低，只有90%。在300～370 nm，间隔2 nm，测得吸光度与浓度间线性关系不好，引起吸光系数变化异常。在230～300 nm，间隔2 nm测定，计算发现：芦丁、槲皮素加和性良好，线性相关系数一般在0.999以上，样品中2者的回收率亦达97%。其原因可能是该波段均位于2个待测物质的最大吸收峰附近，光度测量的灵敏度和准确度均较高所致。因此选该区间为测量范围，吸光系数矩阵为H36×2。
, http://www.100md.com
3.4 精密度和回收率实验 取芦丁、槲皮素浓度一定的模拟样品分别测定5次，计算RSD分别为2.54%和1.54%。取已知含量的模拟样品6个，加入芦丁、槲皮素适量，测定其含量，结果方法的平均回收率分别为：芦丁99.1%(n=6,RSD=1.58%)，槲皮素99.2%(n=6,RSD=1.98%)。
3.5 样品测定 槐米提取物中主要含有芦丁，但也有部分芦丁水解失去芸香糖生成的槲皮素。采用本文提出的方法与药典方法[5]测定了待测物质的含量，结果列于表1。与药典方法相比，卡尔曼滤波分光光度法(KFUV)简便快速，克服了乙醚、甲醇2次回流提取的冗长繁琐操作，方法的准确度和精密度也较高。
表1 槐米提取物中芦丁和槲皮素的测定(n=3) 组 分
含量±RSD/%
本 法
, 百拇医药
药典法
芦 丁
82.32±0.45
81.98±1.9
槲皮素
9.59±1.2
■
参考文献：
[1]南京药学院.药物化学.北京：人民卫生出版社，1978.529
[2]Poulisse H N J.Multicomponent-analysis computations based on Kalman filtering.Anal Chim Acta,1979,112:361
[3]李志良，刘一鸣，俞汝勤.卡尔曼滤波分光光度法用于复方雷琐涂剂中苯酚与间苯二酚的测定.高等学校化学学报，1989，10：575
[4]蒋万银，李国峰，李志明等.卡尔曼滤波分光光度法测定复方双氯灭痛注射液的含量.中国药学杂志，1994，29：159
[5]中国药典.1995.一部：311
收稿日期：1999-03-09, http://www.100md.com