HPLC法测定金鹃咳喘停口服液中槲皮素的含量
作者：张良
单位：张良(成都市药品检验所 610061)
关键词：
药物分析杂志000127 金鹃咳喘停口服液是由凉山杜鹃(Rhododendrron liangshanium L.S.Chen et W.P.Fang mss.)一味药制成的液体制剂，收载于四川省药品标准(中药成方制剂)1993年版，主要用于慢性支气管炎[1]。原标准采用比色法测定总黄酮含量，但样品空白干扰较大。凉山杜鹃含黄酮类成分，水解后主要黄酮苷元成分为槲皮素[2]，其含量情况尚未见报道。本文采用HPLC法对金鹃咳喘停口服液经水解后其中所含槲皮素进行含量测定，操作简便、快速、重现性好。
1 仪器、试药
Hewlett-Packard高效液相色谱仪，DAD检测器，HP ChemStation化学工作站。
, 百拇医药
槲皮素对照品购自中国药品生物制品检定所；甲醇(色谱纯)，磷酸、盐酸(分析纯)，重蒸馏水。
金鹃咳喘停口服液由四川省西昌杨天制药有限公司提供，规格：每支10 mL。
2 实验方法
2.1 色谱条件 Shim-pack CLC-ODS分析柱(150 mm×6.0 mm,5 μm)；流动相：甲醇-0.5%磷酸(50∶50)；流速1.0 mL.min-1；柱温：35 ℃；检测波长：370 nm；进样量：10 μL；在本色谱条件下，对照品及样品色谱图见图1。
图1 HPLC图
A.对照品 B.样品
, 百拇医药
1.槲皮素
2.2 线性范围 准确配制每1 mL含槲皮素对照品0.02 mg的甲醇溶液，精密吸取4.0，8.0，12.0，16.0，20.0 μL依次进样，按上述色谱条件测定峰面积，以峰面积积分值Y对进样量X(μg)进行线性回归，回归方程为：
Y=4306.53X-10.73 r=0.999 9
槲皮素线性范围为0.08～0.4 μg。
2.3 精密度试验 精密吸取浓度为0.01968 mg.mL-1的对照品溶液10 μL进样，重复5次，测定峰面积，RSD为0.45%。
2.4 稳定性试验 按照含量测定条件，取对照品溶液于0，1，2，4，8，24，32 h进样10 μL，测定槲皮素峰面积，RSD为0.22%(n=6)。
, 百拇医药
2.5 重复性试验 按照样品测定方法，对同一批样品进行测定，计算槲皮素含量为1.294 7 mg.mL-1(n=5)，RSD为0.7%。
2.6 加样回收率试验 精密吸取已测含量的样品5.0 mL，置锥形瓶中，分别精密加入对照品0.246，0.492，0.984 mg，按照样品测定方法操作，测定，计算，平均回收率为98.53% (n=6)，RSD为1.5%。
3 样品测定
精密吸取样品5.0 mL，置锥形瓶中，加甲醇-25%盐酸(4∶1) 20 mL，水浴加热回流30 min，放冷，置50 mL量瓶中，用甲醇适量分数次洗涤容器，洗液合并至同一量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，精密吸取10 mL置50 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液10 μL进样，以外标法计算样品中槲皮素的含量，结果批号为970701，970707，970802，970807，970901，970903，970906，971003，990401，990402的样品含量分别为1.301，1.308，1.276，1.303，1.303，1.337，1.376，1.295，2.491，2.204 mg.mL-1，n=2。
, 百拇医药
4 讨论
实验对原标准[1]含量测定方法(以芦丁为对照采用比色法测定总黄酮的含量)进行了考察，样品空白干扰较大；选用不同显色剂进行含量测定，均未获得成功，作者认为是样品成分的干扰。
实验对加热回流时间进行了考察，结果表明加热回流30 min即可水解完全。■
参考文献：
[1]四川省药品标准(中药成方制剂).1993.172
[2]国家医药管理局中草药情报中心站编.植物药有效成分手册.北京：人民卫生出版社，1986.876
收稿日期：1999-04-01, http://www.100md.com
单位：张良(成都市药品检验所 610061)
关键词：
药物分析杂志000127 金鹃咳喘停口服液是由凉山杜鹃(Rhododendrron liangshanium L.S.Chen et W.P.Fang mss.)一味药制成的液体制剂，收载于四川省药品标准(中药成方制剂)1993年版，主要用于慢性支气管炎[1]。原标准采用比色法测定总黄酮含量，但样品空白干扰较大。凉山杜鹃含黄酮类成分，水解后主要黄酮苷元成分为槲皮素[2]，其含量情况尚未见报道。本文采用HPLC法对金鹃咳喘停口服液经水解后其中所含槲皮素进行含量测定，操作简便、快速、重现性好。
1 仪器、试药
Hewlett-Packard高效液相色谱仪，DAD检测器，HP ChemStation化学工作站。
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槲皮素对照品购自中国药品生物制品检定所；甲醇(色谱纯)，磷酸、盐酸(分析纯)，重蒸馏水。
金鹃咳喘停口服液由四川省西昌杨天制药有限公司提供，规格：每支10 mL。
2 实验方法
2.1 色谱条件 Shim-pack CLC-ODS分析柱(150 mm×6.0 mm,5 μm)；流动相：甲醇-0.5%磷酸(50∶50)；流速1.0 mL.min-1；柱温：35 ℃；检测波长：370 nm；进样量：10 μL；在本色谱条件下，对照品及样品色谱图见图1。
图1 HPLC图
A.对照品 B.样品
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1.槲皮素
2.2 线性范围 准确配制每1 mL含槲皮素对照品0.02 mg的甲醇溶液，精密吸取4.0，8.0，12.0，16.0，20.0 μL依次进样，按上述色谱条件测定峰面积，以峰面积积分值Y对进样量X(μg)进行线性回归，回归方程为：
Y=4306.53X-10.73 r=0.999 9
槲皮素线性范围为0.08～0.4 μg。
2.3 精密度试验 精密吸取浓度为0.01968 mg.mL-1的对照品溶液10 μL进样，重复5次，测定峰面积，RSD为0.45%。
2.4 稳定性试验 按照含量测定条件，取对照品溶液于0，1，2，4，8，24，32 h进样10 μL，测定槲皮素峰面积，RSD为0.22%(n=6)。
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2.5 重复性试验 按照样品测定方法，对同一批样品进行测定，计算槲皮素含量为1.294 7 mg.mL-1(n=5)，RSD为0.7%。
2.6 加样回收率试验 精密吸取已测含量的样品5.0 mL，置锥形瓶中，分别精密加入对照品0.246，0.492，0.984 mg，按照样品测定方法操作，测定，计算，平均回收率为98.53% (n=6)，RSD为1.5%。
3 样品测定
精密吸取样品5.0 mL，置锥形瓶中，加甲醇-25%盐酸(4∶1) 20 mL，水浴加热回流30 min，放冷，置50 mL量瓶中，用甲醇适量分数次洗涤容器，洗液合并至同一量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，精密吸取10 mL置50 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液10 μL进样，以外标法计算样品中槲皮素的含量，结果批号为970701，970707，970802，970807，970901，970903，970906，971003，990401，990402的样品含量分别为1.301，1.308，1.276，1.303，1.303，1.337，1.376，1.295，2.491，2.204 mg.mL-1，n=2。
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4 讨论
实验对原标准[1]含量测定方法(以芦丁为对照采用比色法测定总黄酮的含量)进行了考察，样品空白干扰较大；选用不同显色剂进行含量测定，均未获得成功，作者认为是样品成分的干扰。
实验对加热回流时间进行了考察，结果表明加热回流30 min即可水解完全。■
参考文献：
[1]四川省药品标准(中药成方制剂).1993.172
[2]国家医药管理局中草药情报中心站编.植物药有效成分手册.北京：人民卫生出版社，1986.876
收稿日期：1999-04-01, http://www.100md.com