甲胎蛋白阴性肝癌病人DNA结合蛋白检测的临床意义
作者：吕新法 郭磊 胡中荣 潘小平 赵忠良 郁金声
单位：310006 杭州，浙江医科大学第一附属医院传染病研究所(吕新法、郭磊、胡中荣、潘小平、赵忠良)；核医学教研室(郁金声)
关键词：
中华医学杂志/981023 迄今为止，高甲胎蛋白(AFP)值是罹患肝癌的可靠标志，但尚有30%的原发性肝癌患者其血清AFP值为阴性[1]。作者在成功分离正常人的DNA结合蛋白(DBP)基础上[2]，又从肝癌病人血清中分离出肝癌特异的DNA结合蛋白[3]。为此，作者以该DNA结合蛋白免疫山羊后得多批抗血清，用环状免疫扩散法对127例AFP阴性肝癌病人血清DBP进行了测定。
一、对象与方法
1.对象：为1989年10月～1995年1月收治疑似肝癌而AFP阴性的病人700例。其中住院治疗并资料完整肝肿瘤病人仅127例，男103例，女24例；年龄20～75岁，平均52.3岁。此127例中，经病理学检查确诊为肝癌的57例，经B超、CT、ECT确诊的44例，余26例为非恶性肿瘤患者。
, http://www.100md.com
2.方法：(1) 肝癌特异DBP及其抗血清制备：αDBP抗原及其抗体的制备、从400 ml正常人血清中提取免疫电泳纯糖蛋白(MW59 000) 7.8 mg[2]。用此免疫公山羊得双扩散滴度为1∶16的抗αDBP。用抗αDBP作固相柱[3]，从肝癌患者血清中分离出新的αDBP，用此免疫多头健康去势的山羊，利用动物个体间差异及时萃取全与无肝癌特异的两种抗血清，偶联成正、负亲和层析柱，分出吸收高峰在270 nm处的肝癌特异的DBP。再免疫山羊得肝癌特异的DBP抗体(双扩滴度为1∶64～1∶128)。
(2) 琼脂糖平板的制备：取降温至45 ℃ 1.2%琼脂糖(Forma)液50 ml，加肝癌特异的DBP抗血清10 ml，轻轻混匀，浇灌在20 cm×16 cm×0.4 cm的洁净水平玻璃板上，凝固后置4 ℃冰箱中备用。
(3) 用环状免疫单扩散法[2]，将上述127例疑似肝癌患者的血清点样于抗血清终浓度分别为1∶8和1∶16的已打过孔的两块琼脂糖凝胶版，置25 ℃扩散24小时，在有黑纸衬托的X光灯下判读结果。阴性反应者由内、中、外三环带组成，其环带既丰满又匀称而恒定。阳性反应者其内、中环带已被粗细不定的4～6条异常带所取代，异常带既瘦小又不均匀，可随病情变化而变更。
, 百拇医药
二、结果
本组127例疑似肝癌患者的血清，用环状免疫单扩散法测定，有肝癌特异的DBP异常环带阳性者100例(附图)，经病理及其他确诊为肝癌97例，非肝癌3例；阴性者27例；经病理检查，特殊影像诊断等确证患肝癌101例，非肝癌27例。经与病理学等检查对照，肝癌病人的符合率为96%，非肝癌病人符合率为88.5%，经诊断评价四格表判别，其阳性似然比为8.3，阴性似然比为0.045
附图 肝癌病人血清与DBP抗体的
环状免疫扩散图
三、讨论
我们利用环状免疫单扩散法，完成了2万多人份癌症病人血清标本的测定。本研究结果与作者先前[2]对AFP>400 ng/ml和<400 ng/ml的104例肝癌病人的DBP测定结果(阳性率为94.1%)比较，可以说明以肝癌特异的DBP作为肝癌的血清标志物，能够提高AFP阴性肝癌患者的检出率，可以弥补AFP标志的不足。但肝癌特异DBP测定仍然存在一定的假阴性和假阳性。可见对本法测定还宜紧密结合临床和其他的检测手段，以提高对假阴性和假阳性的判别。
, 百拇医药
DNA结合蛋白是永存功能基因的产物，能由多种癌基因生成，也能在多种致癌病毒(如HSV、Epstain-Bass Virus、腺病毒等)感染宿主之初就能合成。由于癌变细胞克隆 扩增之前已经发生癌基因突变。因此，诊断应在临床征兆、肉眼可见的实体瘤显像之前进行。我们认为，对AFP阴性的疑似肝癌病人作肝癌特异DBP测定，不仅可弥补AFP测定方法的不足，而且可以大大提高癌症病人的检出率和早期诊断。此外，对肝 癌病人经外科手术、放疗、化疗或中西药物治疗后的疗效评价，该项测定亦可提供有价值的信息。
本课题为国家自然科学基金资助项目
参考文献
1 Tsukuma H, Hiyama T, Tanaka S, et al. Risk factors for hepatocellular carcinoma among patients with chronic liver disease Engl J Med, 1993, 328：1797-1801.
2 吕新法，胡中荣，赵忠良，等.DNA结合蛋白在正常健康个体与癌症病人之间的不同表现.中华肿瘤杂志，1994，16：21.
3 吕新法.肝癌特异的DNA结合蛋白分离与单克隆抗体的研制.中国学术期刊文摘，1995，1：83., 百拇医药
单位：310006 杭州，浙江医科大学第一附属医院传染病研究所(吕新法、郭磊、胡中荣、潘小平、赵忠良)；核医学教研室(郁金声)
关键词：
中华医学杂志/981023 迄今为止，高甲胎蛋白(AFP)值是罹患肝癌的可靠标志，但尚有30%的原发性肝癌患者其血清AFP值为阴性[1]。作者在成功分离正常人的DNA结合蛋白(DBP)基础上[2]，又从肝癌病人血清中分离出肝癌特异的DNA结合蛋白[3]。为此，作者以该DNA结合蛋白免疫山羊后得多批抗血清，用环状免疫扩散法对127例AFP阴性肝癌病人血清DBP进行了测定。
一、对象与方法
1.对象：为1989年10月～1995年1月收治疑似肝癌而AFP阴性的病人700例。其中住院治疗并资料完整肝肿瘤病人仅127例，男103例，女24例；年龄20～75岁，平均52.3岁。此127例中，经病理学检查确诊为肝癌的57例，经B超、CT、ECT确诊的44例，余26例为非恶性肿瘤患者。
, http://www.100md.com
2.方法：(1) 肝癌特异DBP及其抗血清制备：αDBP抗原及其抗体的制备、从400 ml正常人血清中提取免疫电泳纯糖蛋白(MW59 000) 7.8 mg[2]。用此免疫公山羊得双扩散滴度为1∶16的抗αDBP。用抗αDBP作固相柱[3]，从肝癌患者血清中分离出新的αDBP，用此免疫多头健康去势的山羊，利用动物个体间差异及时萃取全与无肝癌特异的两种抗血清，偶联成正、负亲和层析柱，分出吸收高峰在270 nm处的肝癌特异的DBP。再免疫山羊得肝癌特异的DBP抗体(双扩滴度为1∶64～1∶128)。
(2) 琼脂糖平板的制备：取降温至45 ℃ 1.2%琼脂糖(Forma)液50 ml，加肝癌特异的DBP抗血清10 ml，轻轻混匀，浇灌在20 cm×16 cm×0.4 cm的洁净水平玻璃板上，凝固后置4 ℃冰箱中备用。
(3) 用环状免疫单扩散法[2]，将上述127例疑似肝癌患者的血清点样于抗血清终浓度分别为1∶8和1∶16的已打过孔的两块琼脂糖凝胶版，置25 ℃扩散24小时，在有黑纸衬托的X光灯下判读结果。阴性反应者由内、中、外三环带组成，其环带既丰满又匀称而恒定。阳性反应者其内、中环带已被粗细不定的4～6条异常带所取代，异常带既瘦小又不均匀，可随病情变化而变更。
, 百拇医药
二、结果
本组127例疑似肝癌患者的血清，用环状免疫单扩散法测定，有肝癌特异的DBP异常环带阳性者100例(附图)，经病理及其他确诊为肝癌97例，非肝癌3例；阴性者27例；经病理检查，特殊影像诊断等确证患肝癌101例，非肝癌27例。经与病理学等检查对照，肝癌病人的符合率为96%，非肝癌病人符合率为88.5%，经诊断评价四格表判别，其阳性似然比为8.3，阴性似然比为0.045
附图 肝癌病人血清与DBP抗体的
环状免疫扩散图
三、讨论
我们利用环状免疫单扩散法，完成了2万多人份癌症病人血清标本的测定。本研究结果与作者先前[2]对AFP>400 ng/ml和<400 ng/ml的104例肝癌病人的DBP测定结果(阳性率为94.1%)比较，可以说明以肝癌特异的DBP作为肝癌的血清标志物，能够提高AFP阴性肝癌患者的检出率，可以弥补AFP标志的不足。但肝癌特异DBP测定仍然存在一定的假阴性和假阳性。可见对本法测定还宜紧密结合临床和其他的检测手段，以提高对假阴性和假阳性的判别。
, 百拇医药
DNA结合蛋白是永存功能基因的产物，能由多种癌基因生成，也能在多种致癌病毒(如HSV、Epstain-Bass Virus、腺病毒等)感染宿主之初就能合成。由于癌变细胞克隆 扩增之前已经发生癌基因突变。因此，诊断应在临床征兆、肉眼可见的实体瘤显像之前进行。我们认为，对AFP阴性的疑似肝癌病人作肝癌特异DBP测定，不仅可弥补AFP测定方法的不足，而且可以大大提高癌症病人的检出率和早期诊断。此外，对肝 癌病人经外科手术、放疗、化疗或中西药物治疗后的疗效评价，该项测定亦可提供有价值的信息。
本课题为国家自然科学基金资助项目
参考文献
1 Tsukuma H, Hiyama T, Tanaka S, et al. Risk factors for hepatocellular carcinoma among patients with chronic liver disease Engl J Med, 1993, 328：1797-1801.
2 吕新法，胡中荣，赵忠良，等.DNA结合蛋白在正常健康个体与癌症病人之间的不同表现.中华肿瘤杂志，1994，16：21.
3 吕新法.肝癌特异的DNA结合蛋白分离与单克隆抗体的研制.中国学术期刊文摘，1995，1：83., 百拇医药