nrhTNF 对Beagle犬长期毒性的试验
作者：李景峰 王海芳 刘莉 梅其炳 赵德化
单位：第四军医大学临床药理临床药学研究中心， 陕西 西安 710033
关键词：肿瘤坏死因子；长期毒性；Beagle犬
第四军医大学学报001049 中图号:R965.2 文献标识码：E
文章编号：1000-2790(2000)10-1191-01
0 引言 随着分子生物学技术的发展，人肿瘤坏死因子(Human Tumor Necrosis Factor,hTNF)的氨基酸序列已搞清，并克隆出其编码的cDNA，可大量制备TNF用于癌症治疗. 天然TNF(基因重组人TNF, rhTNF)可产生较多的副作用如肝脏损伤，肠道组织坏死性改变和发热等[1]，妨碍了其临床应用.对天然TNF的基因改造后获得新型基因重组人TNF(nrhTNF)[2]. 本实验观察了nrhTNF长期连续给药对Beagle犬的蓄积毒性反应及严重程度,靶器官和损害的可逆性，以确定无毒反应剂量，为拟定人用安全剂量提供依据.
, 百拇医药
1 材料和方法
1.1 材料 nrhTNF冻干白色粉末，由第四军医大学生物技术中心提供. 6～8 mo健康Beagle犬16只，雌，雄各半,随机分为4组.
1.2 方法 分别皮下注射 nrhTNF 200，100，5万U*kg-1和等量生理盐水，每日1次,连续30 d[3]. 观察：①一般情况. ②Ⅱ导联心电图：2 wk检查1次. ③血液:血液生化指标每2 wk检测1次. ④系统尸检和病理组织学检查：末次给药后
24 h检测各项指标后每组活杀一半动物进行系统尸体解剖观察，取内脏称重并计算脏体比；病理组织学检查包括上述器官及胰腺，胃，十二指肠，回肠，结肠，垂体，脊髓，胸骨(骨髓)，淋巴结，膀胱，视神经. ⑤恢复期观察：末次给药后24 h，留下部分继续观察14 d,以期了解毒性反应的可逆程度和可能出现的延迟毒性反应. 恢复期观察结束，活杀所有动物，进行上述检查.
, 百拇医药
2 结果 连续给药期间，实验动物自主活动与行为活动无明显改变；进食正常，未见恶心，呕吐及流涎现象，尿，便基本正常,给药期间体质量增加.Ⅱ导联心电图持续正常.其血液学，血液生化，尿常规检查结果与生理盐水对照组相比较, 均无显著性差别.给药结束后系统尸检，各器官的重量及脏体比未见异常.全脏器病理组织学检查发现，nrhTNF大剂量组和小剂量组各有2只动物肾脏可见上皮浊肿及肉芽肿样炎性改变；恢复期观察结束，系统尸检未见明显异常，肾脏病理组织学检查无异常发现.其余未发现病理改变.
3 讨论 天然TNF可能引起实验动物多种不良反应. 而本实验皮下注射给药nrhTNF 5～200万U*kg-1 30 d，动物一般情况好,但部分动物发生了间质性肾炎，此病理改变无明显剂量依赖关系，呈可逆性,可能与免疫反应有关. 故认为nrhTNF与天然TNF相比副作用减少，然而临床用药时应注意对肾脏的影响，用药时间不宜过长.
作者简介：李景峰(1956-)，男(汉族)，陕西省武功县人. 中级实验师. Tel.(029)3374555(O);3282351(H)
参考文献:
[1] 周廷冲. 多肽生长因子(基础与临床)[M]. 安徽:中国科技出版社,1992:509.
[2] 杨 辉,张英起,李芳梅et al. 大肠杆菌表达人新型肿瘤坏死因子的纯化[J]. 第四军医大学学报,1997;18(3):221-224.
[3] 徐叔云. 药理实验方法学[M]. 第2版. 北京: 人民卫生出版社,1992:150.
收稿日期:1999-12-08; 修回日期: 2000-02-10, http://www.100md.com
单位：第四军医大学临床药理临床药学研究中心， 陕西 西安 710033
关键词：肿瘤坏死因子；长期毒性；Beagle犬
第四军医大学学报001049 中图号:R965.2 文献标识码：E
文章编号：1000-2790(2000)10-1191-01
0 引言 随着分子生物学技术的发展，人肿瘤坏死因子(Human Tumor Necrosis Factor,hTNF)的氨基酸序列已搞清，并克隆出其编码的cDNA，可大量制备TNF用于癌症治疗. 天然TNF(基因重组人TNF, rhTNF)可产生较多的副作用如肝脏损伤，肠道组织坏死性改变和发热等[1]，妨碍了其临床应用.对天然TNF的基因改造后获得新型基因重组人TNF(nrhTNF)[2]. 本实验观察了nrhTNF长期连续给药对Beagle犬的蓄积毒性反应及严重程度,靶器官和损害的可逆性，以确定无毒反应剂量，为拟定人用安全剂量提供依据.
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1 材料和方法
1.1 材料 nrhTNF冻干白色粉末，由第四军医大学生物技术中心提供. 6～8 mo健康Beagle犬16只，雌，雄各半,随机分为4组.
1.2 方法 分别皮下注射 nrhTNF 200，100，5万U*kg-1和等量生理盐水，每日1次,连续30 d[3]. 观察：①一般情况. ②Ⅱ导联心电图：2 wk检查1次. ③血液:血液生化指标每2 wk检测1次. ④系统尸检和病理组织学检查：末次给药后
24 h检测各项指标后每组活杀一半动物进行系统尸体解剖观察，取内脏称重并计算脏体比；病理组织学检查包括上述器官及胰腺，胃，十二指肠，回肠，结肠，垂体，脊髓，胸骨(骨髓)，淋巴结，膀胱，视神经. ⑤恢复期观察：末次给药后24 h，留下部分继续观察14 d,以期了解毒性反应的可逆程度和可能出现的延迟毒性反应. 恢复期观察结束，活杀所有动物，进行上述检查.
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2 结果 连续给药期间，实验动物自主活动与行为活动无明显改变；进食正常，未见恶心，呕吐及流涎现象，尿，便基本正常,给药期间体质量增加.Ⅱ导联心电图持续正常.其血液学，血液生化，尿常规检查结果与生理盐水对照组相比较, 均无显著性差别.给药结束后系统尸检，各器官的重量及脏体比未见异常.全脏器病理组织学检查发现，nrhTNF大剂量组和小剂量组各有2只动物肾脏可见上皮浊肿及肉芽肿样炎性改变；恢复期观察结束，系统尸检未见明显异常，肾脏病理组织学检查无异常发现.其余未发现病理改变.
3 讨论 天然TNF可能引起实验动物多种不良反应. 而本实验皮下注射给药nrhTNF 5～200万U*kg-1 30 d，动物一般情况好,但部分动物发生了间质性肾炎，此病理改变无明显剂量依赖关系，呈可逆性,可能与免疫反应有关. 故认为nrhTNF与天然TNF相比副作用减少，然而临床用药时应注意对肾脏的影响，用药时间不宜过长.
作者简介：李景峰(1956-)，男(汉族)，陕西省武功县人. 中级实验师. Tel.(029)3374555(O);3282351(H)
参考文献:
[1] 周廷冲. 多肽生长因子(基础与临床)[M]. 安徽:中国科技出版社,1992:509.
[2] 杨 辉,张英起,李芳梅et al. 大肠杆菌表达人新型肿瘤坏死因子的纯化[J]. 第四军医大学学报,1997;18(3):221-224.
[3] 徐叔云. 药理实验方法学[M]. 第2版. 北京: 人民卫生出版社,1992:150.
收稿日期:1999-12-08; 修回日期: 2000-02-10, http://www.100md.com