病毒性心肌炎NK和LAK细胞活性与心肌损伤的关系
作者：方 凤 沈 茜△ 汪隽瑛 蒋汉明 姜 波▲
单位：第二军医大学长海医院理疗科，上海，200433；△第四军医大学西京医院理疗科；▲第二军医大学长海医院实验诊断科
关键词：病毒性心肌炎；自然杀伤细胞；淋巴因子激活的杀伤细胞；心肌损伤
第二军医大学学报980225 摘要 目的：系统地观察病毒性心肌炎，尤其是柯萨奇B组病毒(CVB)心肌炎患儿自然杀伤细胞(NK)和淋巴因子激活的杀伤细胞(LAK)活性，并分析两者的内在关系，以及与心肌损伤的关系。方法：56例病毒性心肌炎患儿，年龄3～12岁，男26例，女30例；另设对照组30例，年龄3～12岁，男16例，女14例。采集静脉血，应用3H-TdR标记法测定NK和LAK细胞活性。结果：(1)心肌炎时NK和LAK细胞活性均明显下降；(2)心肌炎时NK和LAK细胞活性间存在明显的正相关(r=0.72，P<0.01)；(3)CVB心肌炎患儿的NK和LAK细胞活性下降更显著，且心脏增大和心电图明显异常者发生率亦高于非CVB心肌炎者。结论：病毒性心肌炎，尤其是CVB心肌炎对NK及LAK细胞活性有明显影响。在病毒性心肌炎诊疗中应同时检测NK和LAK细胞活性。
, 百拇医药
中国图书资料分类法分类号 R 542.21
A relationship between NK and LAK cell activities and myocardial injury in viral myocarditis
Fang Feng, Shen Qian, Wang Junying, Jiang Hanming, Jang Bo (Department of Pediatrics, Changhai Hospital, Second Military Medical University, Shanghai, 200433)
Abstract Objective: In a systemic study of NK and LAK cell activities in viral myocarditis, especially in Coxsackievirus B (CVB) myocarditis, we analysed the relationship between NK and LAK cell activities and between NK and LAK cell activities and myocardial injury. Methods: 56 cases were studied, aged 3～12 years (26 males, 30 females), and 30 of controls(16 males, 14 females), aged 3～12 years. We tested blood NK and LAK cell activities using 3H-TdR. Results: (1)Both NK and LAK cell activities decreased in viral myocarditis; (2) There was a good relation between NK and LAK cell activity(r=0.72,P<0.01);(3) NK and LAK cell activities decreased more markedly, and there were high incidences of cardiac enlargement and abnormal electrocardiogram in CVB myocarditis. Conclusion: Viral myocarditis, especially in CVB myocarditis has a significant influence on NK and LAK cell activities. NK and LAK cell activities should be detected simultaneously in the diagnosis and treatment.
, 百拇医药
Key words viral myocarditis; NK cell; LAK cell; myocardial injury
病毒性心肌炎是较常见的心血管系统疾病，由于各种病毒，如柯萨奇B组病毒(CVB)、麻疹病毒、腮腺炎病毒等感染机体后，心肌产生弥漫性或局限性病变，导致临床一系列表现。近年来较重视细胞免疫在其发病过程中的作用，但临床研究较多的是T细胞免疫，有关自然杀伤细胞(NK)和淋巴因子激活的杀伤细胞(LAK)在病毒性心肌炎发病过程中作用的报道较少。本研究较系统地观察病毒性心肌炎，尤其是CVB心肌炎时NK和LAK细胞活性，并分析两者的内在关系，以及与心肌损伤的关系。
1 材料和方法
1.1 临床资料 根据病毒性心肌炎诊断标准[1]，选择病毒性心肌炎和疑似病毒性心肌炎的患儿(心肌炎组)56例，男26例，女30例，年龄3～12岁。另设对照组30例，男16例，女14例，年龄3～12岁。
, http://www.100md.com
1.2 细胞活性测定 采用3H-TdR标记法。(1)NK细胞活性测定:靶细胞为K562细胞,将患儿外周血单个核细胞和靶细胞混匀,培育16 h,加标记物进行放射免疫测定。(2)LAK细胞活性测定: raja细胞为靶细胞，将患儿外周血单个核细胞和靶细胞混匀,培养20 h,加标记物进行放射免疫测定。计算两种细胞活性。
细胞活性(%)=1-[放射计数率(效+靶)-放射计数率(效)]/[放射计数率(靶)-放射计数率(本底)]×100%
1.3 CVB抗原和IgM抗体测定 采用ELISA法测定CVB抗原和IgM抗体。将CVB抗原和(或)IgM抗体均阳性者称CVB阳性组，无CVB抗原和IgM抗体阴性者称CVB阴性组。
1.4 统计学处理 不成对资料的t检验，χ2检验和相关分析。
2 结 果
, 百拇医药
2.1 NK和LAK细胞活性变化 (1)心肌炎时NK和LAK细胞活性均明显下降，与对照组相比差异非常显著,两者间存在明显的正相关(r=0.72，P<0.01)。(2)CVB阳性组较CVB阴性组的NK活性和LAK活性下降更显著(P<0.01，表1)。
表1 心肌炎时NK和LAK细胞活性变化
Tab 1 Changes of NK and LAK cell activities
in myocarditis(
±s,%) Group
n
NK
LAK
, 百拇医药
Myocarditis
56
35.653±7.524**
23.544±5.145**
CVB positive
25
28.143±9.241△△
16.775±8.522△△
CVB negative
31
, http://www.100md.com 39.006±7.990
27.383±5.114
Control
30
51.340±4.620
35.881±3.292
**P<0.01 vs control group;△△ P<0.01 vs CVB negative
2.2 心脏体积和心电图改变的发生率 CVB阳性组心脏增大发生率为44.00%，高于CVB阴性组的 12.90%(P<0.05)；心电图明显异常(多源性或多形性早搏，或联律早搏，或Ⅲ度房室传导阻滞，或ST-T降低超过3 d)者发生率48.00%，亦高于CVB阴性组的19.36%(P<0.05)。
, http://www.100md.com
3 讨 论
NK细胞是一群多活性多功能的免疫细胞，其免疫功能与一般T淋巴细胞作用不同，与特异性免疫应答无关，属于天然细胞毒活性的淋巴细胞，NK细胞对肿瘤细胞和感染细胞(尤其是病毒感染细胞)都有识别作用[2]。动物实验资料显示，在CVB感染小鼠后，NK细胞首先反应，如果小鼠NK细胞消失，则小鼠死亡率及心肌损伤程度明显增高；中和抗体的产生与心肌中病毒的清除密切相关，但病毒清除后，心肌损伤仍然持续，T细胞亚群和NK细胞数量和活性均异常[3，4]。
LAK细胞受IL-2的调节。Kishimoto等[5]发现IL-2在柯萨奇B3病毒性心肌炎急性病毒血症期以增加NK活性来限制心肌炎的发展，减轻心肌病理改变。本研究观察的结果显示心肌炎时NK和LAK细胞活性均明显下降，且NK和LAK细胞活性间存在明显的正相关。CVB心肌炎时NK和LAK细胞活性下降更显著，心脏增大和心电图明显异常者发生率亦高于非CVB心肌炎，提示CVB感染对NK和LAK细胞活性影响更明显。在临床病毒性心肌炎诊疗中，同时检测NK活性和LAK活性有呼应和互补意义。
, http://www.100md.com
李雪平，女，1965年4月生，硕士，医师
参 考 文 献
1 吴瑞萍，胡亚美，江载芳 主编.实用儿科学.北京:人民卫生出版社，1996.1494～1496
2 毕爱华，龚菲力 主编.医用免疫学.北京:人民军医出版社，1995.16～20
3 沈 茜，汪美先，章同华.实验性小鼠柯萨奇B3病毒性心肌炎自然杀伤细胞活性和干扰素测定.第二军医大学学报, 1993,14(4)：344
4 沈 茜，汪美先,章同华.鼠柯萨奇B3病毒性心肌炎淋巴细胞亚群及NK 细胞的免疫组织化学研究. 中华微生物和免疫学杂志,1992,12(5)：329
5 Kishimoto C, Kuroki Y, Hiraoka Y，et al. Cytokine and murine coxsackievirus B3 myocarditis . Interleukin-2 suppressed myocarditis in the acute stage but enhanced the condition in the subsequent stage. Circulation, 1994,89(6):2836
(1997-08-25收稿，1997-12-02修回), http://www.100md.com
单位：第二军医大学长海医院理疗科，上海，200433；△第四军医大学西京医院理疗科；▲第二军医大学长海医院实验诊断科
关键词：病毒性心肌炎；自然杀伤细胞；淋巴因子激活的杀伤细胞；心肌损伤
第二军医大学学报980225 摘要 目的：系统地观察病毒性心肌炎，尤其是柯萨奇B组病毒(CVB)心肌炎患儿自然杀伤细胞(NK)和淋巴因子激活的杀伤细胞(LAK)活性，并分析两者的内在关系，以及与心肌损伤的关系。方法：56例病毒性心肌炎患儿，年龄3～12岁，男26例，女30例；另设对照组30例，年龄3～12岁，男16例，女14例。采集静脉血，应用3H-TdR标记法测定NK和LAK细胞活性。结果：(1)心肌炎时NK和LAK细胞活性均明显下降；(2)心肌炎时NK和LAK细胞活性间存在明显的正相关(r=0.72，P<0.01)；(3)CVB心肌炎患儿的NK和LAK细胞活性下降更显著，且心脏增大和心电图明显异常者发生率亦高于非CVB心肌炎者。结论：病毒性心肌炎，尤其是CVB心肌炎对NK及LAK细胞活性有明显影响。在病毒性心肌炎诊疗中应同时检测NK和LAK细胞活性。
, 百拇医药
中国图书资料分类法分类号 R 542.21
A relationship between NK and LAK cell activities and myocardial injury in viral myocarditis
Fang Feng, Shen Qian, Wang Junying, Jiang Hanming, Jang Bo (Department of Pediatrics, Changhai Hospital, Second Military Medical University, Shanghai, 200433)
Abstract Objective: In a systemic study of NK and LAK cell activities in viral myocarditis, especially in Coxsackievirus B (CVB) myocarditis, we analysed the relationship between NK and LAK cell activities and between NK and LAK cell activities and myocardial injury. Methods: 56 cases were studied, aged 3～12 years (26 males, 30 females), and 30 of controls(16 males, 14 females), aged 3～12 years. We tested blood NK and LAK cell activities using 3H-TdR. Results: (1)Both NK and LAK cell activities decreased in viral myocarditis; (2) There was a good relation between NK and LAK cell activity(r=0.72,P<0.01);(3) NK and LAK cell activities decreased more markedly, and there were high incidences of cardiac enlargement and abnormal electrocardiogram in CVB myocarditis. Conclusion: Viral myocarditis, especially in CVB myocarditis has a significant influence on NK and LAK cell activities. NK and LAK cell activities should be detected simultaneously in the diagnosis and treatment.
, 百拇医药
Key words viral myocarditis; NK cell; LAK cell; myocardial injury
病毒性心肌炎是较常见的心血管系统疾病，由于各种病毒，如柯萨奇B组病毒(CVB)、麻疹病毒、腮腺炎病毒等感染机体后，心肌产生弥漫性或局限性病变，导致临床一系列表现。近年来较重视细胞免疫在其发病过程中的作用，但临床研究较多的是T细胞免疫，有关自然杀伤细胞(NK)和淋巴因子激活的杀伤细胞(LAK)在病毒性心肌炎发病过程中作用的报道较少。本研究较系统地观察病毒性心肌炎，尤其是CVB心肌炎时NK和LAK细胞活性，并分析两者的内在关系，以及与心肌损伤的关系。
1 材料和方法
1.1 临床资料 根据病毒性心肌炎诊断标准[1]，选择病毒性心肌炎和疑似病毒性心肌炎的患儿(心肌炎组)56例，男26例，女30例，年龄3～12岁。另设对照组30例，男16例，女14例，年龄3～12岁。
, http://www.100md.com
1.2 细胞活性测定 采用3H-TdR标记法。(1)NK细胞活性测定:靶细胞为K562细胞,将患儿外周血单个核细胞和靶细胞混匀,培育16 h,加标记物进行放射免疫测定。(2)LAK细胞活性测定: raja细胞为靶细胞，将患儿外周血单个核细胞和靶细胞混匀,培养20 h,加标记物进行放射免疫测定。计算两种细胞活性。
细胞活性(%)=1-[放射计数率(效+靶)-放射计数率(效)]/[放射计数率(靶)-放射计数率(本底)]×100%
1.3 CVB抗原和IgM抗体测定 采用ELISA法测定CVB抗原和IgM抗体。将CVB抗原和(或)IgM抗体均阳性者称CVB阳性组，无CVB抗原和IgM抗体阴性者称CVB阴性组。
1.4 统计学处理 不成对资料的t检验，χ2检验和相关分析。
2 结 果
, 百拇医药
2.1 NK和LAK细胞活性变化 (1)心肌炎时NK和LAK细胞活性均明显下降，与对照组相比差异非常显著,两者间存在明显的正相关(r=0.72，P<0.01)。(2)CVB阳性组较CVB阴性组的NK活性和LAK活性下降更显著(P<0.01，表1)。
表1 心肌炎时NK和LAK细胞活性变化
Tab 1 Changes of NK and LAK cell activities
in myocarditis(
±s,%) Groupn
NK
LAK
, 百拇医药
Myocarditis
56
35.653±7.524**
23.544±5.145**
CVB positive
25
28.143±9.241△△
16.775±8.522△△
CVB negative
31
, http://www.100md.com 39.006±7.990
27.383±5.114
Control
30
51.340±4.620
35.881±3.292
**P<0.01 vs control group;△△ P<0.01 vs CVB negative
2.2 心脏体积和心电图改变的发生率 CVB阳性组心脏增大发生率为44.00%，高于CVB阴性组的 12.90%(P<0.05)；心电图明显异常(多源性或多形性早搏，或联律早搏，或Ⅲ度房室传导阻滞，或ST-T降低超过3 d)者发生率48.00%，亦高于CVB阴性组的19.36%(P<0.05)。
, http://www.100md.com
3 讨 论
NK细胞是一群多活性多功能的免疫细胞，其免疫功能与一般T淋巴细胞作用不同，与特异性免疫应答无关，属于天然细胞毒活性的淋巴细胞，NK细胞对肿瘤细胞和感染细胞(尤其是病毒感染细胞)都有识别作用[2]。动物实验资料显示，在CVB感染小鼠后，NK细胞首先反应，如果小鼠NK细胞消失，则小鼠死亡率及心肌损伤程度明显增高；中和抗体的产生与心肌中病毒的清除密切相关，但病毒清除后，心肌损伤仍然持续，T细胞亚群和NK细胞数量和活性均异常[3，4]。
LAK细胞受IL-2的调节。Kishimoto等[5]发现IL-2在柯萨奇B3病毒性心肌炎急性病毒血症期以增加NK活性来限制心肌炎的发展，减轻心肌病理改变。本研究观察的结果显示心肌炎时NK和LAK细胞活性均明显下降，且NK和LAK细胞活性间存在明显的正相关。CVB心肌炎时NK和LAK细胞活性下降更显著，心脏增大和心电图明显异常者发生率亦高于非CVB心肌炎，提示CVB感染对NK和LAK细胞活性影响更明显。在临床病毒性心肌炎诊疗中，同时检测NK活性和LAK活性有呼应和互补意义。
, http://www.100md.com
李雪平，女，1965年4月生，硕士，医师
参 考 文 献
1 吴瑞萍，胡亚美，江载芳 主编.实用儿科学.北京:人民卫生出版社，1996.1494～1496
2 毕爱华，龚菲力 主编.医用免疫学.北京:人民军医出版社，1995.16～20
3 沈 茜，汪美先，章同华.实验性小鼠柯萨奇B3病毒性心肌炎自然杀伤细胞活性和干扰素测定.第二军医大学学报, 1993,14(4)：344
4 沈 茜，汪美先,章同华.鼠柯萨奇B3病毒性心肌炎淋巴细胞亚群及NK 细胞的免疫组织化学研究. 中华微生物和免疫学杂志,1992,12(5)：329
5 Kishimoto C, Kuroki Y, Hiraoka Y，et al. Cytokine and murine coxsackievirus B3 myocarditis . Interleukin-2 suppressed myocarditis in the acute stage but enhanced the condition in the subsequent stage. Circulation, 1994,89(6):2836
(1997-08-25收稿，1997-12-02修回), http://www.100md.com