百白破-乙型肝炎四联疫苗中乙型肝炎疫苗免疫性
作者：谢东生 张俊香 巩志立 刘宝奎 唐巧英 阚毓云 窦永寿 赵景杰
单位：谢东生 张俊香 巩志立 刘宝奎 唐巧英 阚毓云 窦永寿 赵景杰 (100024 卫生部北京生物制品研究所)
关键词：白喉-破伤风-百日咳疫苗；肝炎疫苗；乙型；免疫性
中华预防医学杂志990309 摘要 目的 了解全细胞百白破-重组酵母乙型肝炎四联疫苗(DTPw-YHB)中重组酵母乙型肝炎疫苗的免疫原性。方法 进行DTPw-YHB四联疫苗中重组酵母乙型肝炎疫苗与单价的重组酵母乙型肝炎疫苗免疫原性比较，DTPw-YHB四联疫苗中不同含量的重组酵母乙型肝炎疫苗免疫原性比较，以及比较DTPw-YHB四联疫苗放置2～8 ℃保存18个月后，重组酵母乙型肝炎疫苗的免疫效力和稳定性。结果 经检测DTPw-YHB四联疫苗中重组酵母乙型肝炎疫苗对小鼠的免疫效果较单价重组酵母乙型肝炎疫苗免疫原性明显增强，小鼠ED50平均比值1∶2.0～1∶3.1; DTPw-YHB四联疫苗中不同含量的重组酵母乙型肝炎疫苗免疫效力无明显区别; DTPw-YHB四联疫苗经2～8 ℃保存18个月后，重组酵母乙型肝炎疫苗的稳定性良好。结论 DTPw-YHB四联疫苗中重组酵母乙型肝炎疫苗的免疫原性高于单价的重组酵母乙型肝炎疫苗。未见DTPw对重组酵母乙型肝炎疫苗的免疫原性有干扰抑制现象，表明DTPw与重组酵母乙型肝炎疫苗相容性好。
, 百拇医药
Component in Diphtheria-Pertussis-Tetanus-Hepatitis B Vaccine
XIE Dongsheng, ZHANG Junxiang, GONG Zhili, et al.
National Vaccine and Serum Institute, Beijing 100024
Abstract Objective To study immunogenecity of yeast-derived recombinant hepatitis B (YHB) component in diphtheria-pertussis-tetanus-YHB vaccine (DPTw-YHB). Methods Immunogenecity of tetra-valent DTPw-YHB vaccine and mono-valent recombinant YHB vaccine， and that of the tetra-valent vaccine with varied YHB component were compared.The efficiency and stability of recombinant YHB in the tetra-valent vaccine stored at 2～8℃ for 18 months were determined. Results The efficiency of recombinant YHB in the tetra-valent vaccine enhanced significantly in mice，as compared with that of mono-valent recombinant YHB vaccine, with an average mouse ED50 of 1∶2.0～1∶3.1.There was no significant difference in efficiency of the tetra-valent vaccine with varied recombinant YHB component.Recombinant YHBin the DPTw-YHB tetra-valent vaccine still kept good stability stored at 2～8℃ for 18 months. Conclusion Recombinant YHB in the tetra-valent vaccine was more immunogenic than the mono-valent YHB vaccine.No interference and inhibition of DPTw to recombinant YHB was found，indicating good compatibility between DPTw and YHB.
, 百拇医药
Key words Diphtheria-tetanus-pertussis vaccine Hepatitis B vaccines Immunity
为了控制乙型肝炎感染，阻断母婴传播，我国于1992年将乙型肝炎疫苗(乙肝疫苗)纳入扩大免疫规划，并提出具体管理目标：2000年新生儿乙肝疫苗城市接种率达90%，农村达60%。把百白破和乙肝疫苗制成联合疫苗将极大地促进这个目标的实现。为此我们对重组酵母乙肝疫苗(YHB)在百白破-重组酵母乙肝四联疫苗(DTPw-YHB)中的免疫原性进行了研究，报告如下。
材料与方法
1. YHB稀释前半成品(铝吸附产品) 、全细胞百日咳菌苗、精制白喉类毒素原液、精制破伤风类毒素原液均为本所生产。
2. DTPw-YHB四联疫苗中YHB与单价YHB的免疫原性比较：用不同批号的YHB稀释前半成品，与全细胞百日咳菌苗、精制白喉类毒素、精制破伤风类毒素配制3批 DTPw-YHB四联疫苗，并设立相应对照组。
, 百拇医药
每毫升DTPw-YHB四联疫苗中含YHB 10 μg、精制白喉类毒素20 Lf、精制破伤风类毒素 5 Lf、全细胞百日咳菌苗 60亿、氢氧化铝1.3 mg。
3. DTPw-YHB四联疫苗中不同含量YHB免疫原性比较：用不同批号的YHB稀释前半成品 、全细胞百日咳菌苗、精制白喉类毒素、精制破伤风类毒素，配制3批含10 μg YHB的DTPw-YHB四联疫苗及3批含5 μg YHB的DTPw-YHB四联疫苗，全细胞百日咳菌苗、精制白喉类毒素、精制破伤风类毒素含量均相同。
4. DTPw-YHB四联疫苗的稳定性试验：将DTPw-YHB四联疫苗2～8℃保存18个月，观察YHB的稳定性。
5. YHB效力试验按重组酵母乙型肝炎疫苗制造及检定暂行规程进行，小鼠半数有效量(ED50)≤1.5 μg为合格。
, 百拇医药 结果
1. DTPw-YHB四联疫苗中YHB与单价YHB的效力：用3批DTPw-YHB四联疫苗免疫NIH小鼠，并设立同批单价YHB作效价对照。DTPw-YHB四联疫苗中YHB的小鼠ED50效价(0.67，0.43，0.52)明显好于单价YHB(1.36，1.17，1.35)，平均比值为1∶2.0，1∶3.1，1∶2.3。
2. DTPw-YHB四联疫苗中不同含量YHB的效力：由于 DTPw-YHB四联疫苗对YHB的免疫原性有显著增强作用，将DTPw-YHB四联疫苗中YHB的含量减半 (5 μg/ml)，结果见表1。
表1 DTPw-YHB四联疫苗中不同
含量YHB的效力检测结果 批
小鼠ED50
, 百拇医药
YHB 10 μg/ml
YHB 5 μg/ml
1
1.38
1.30
2
1.06
1.11
3
0.52
1.42
3. DTPw-YHB四联疫苗中YHB的稳定性：小鼠ED50(μg)分别为1.50、1.48、0.40。同时用这3项试验检测四联疫苗中全细胞百日咳菌苗、精制白喉类毒素、精制破伤风类毒素的效力，结果均在规程合格范围内。
, 百拇医药
讨论
儿童疫苗计划(childrn's vaccine initiative) 倡导的联合疫苗中，百白破-乙肝制备的联合疫苗是国内外学者首选的目标。国外在DTPw-HB及无细胞百白破-乙肝两组四联疫苗的临床观察中取得了比较好的结果[1-3]。但有的临床观察却显示，联合疫苗中HB的免疫原性与单价HB的免疫原性相比呈现下降。虽然HB疫苗对热稳定，但HBsAg蛋白对酶的一些降解或引起水解及二硫键断裂的还原因子敏感。在制备联合疫苗，特别是DTPw疫苗时，成分上的差异和制备DTPw疫苗时使用化学物质都可能影响DTPw-HB联合疫苗中HB疫苗的效力、稳定性，最终影响HB疫苗的功能。
从本研究结果看, DTPw-YHB四联疫苗中YHB的免疫效果较单剂YHB免疫明显增强，平均比值1∶2.0～1∶3.1，这可能由于DTPw-YHB四联疫苗中全细胞白日咳菌苗对YHB有佐剂作用。用DTPw- YHB四联疫苗中YHB 5 μg/ml与10 μg/ml 的含量免疫小鼠效力无明显区别。当然，如能采用5 μg /ml YHB，可降低成本，具有巨大的社会效益和巨大的经济效益。但接种人体后是否具有同样的保护效果还有待于大量的临床观察。稳定性试验表明，DTPw- YHB四联疫苗于2～8℃保存18个月后YHB的效力仍比较稳定，表明YHB与DTPw疫苗之间相容性好。
, http://www.100md.com
参考文献
1 Papaevangelou G, Karvelis E, Alexiou D,et al. Evaluation of a combined tetravalent diphtheria,tetanus,whole-cell pertussis and hepatitis B candidate vaccine administered to healthy infants according to a three-dose vaccination schedule.Vaccine ,1995 , 13:175-178.
2 Usonis V, Bakasenas V, Willems P,et al. Feasibility study of a combined diphtheria-tetanus-acellular pertussis-hepatitis B(DTPa-HBV) vaccine,and comparison of clinical reactions and immune responses with diphtheria-tetanus-acellular pertussis(DTPa) and hepatitis B vaccines applied as mixed or injected into separate limbs. Vaccine, 1997, 15 :1680-1686.
3 Giammanco G, Moiraghi A, Zotti C,et al. Safety and immunogenicity of a combined diphtheria-tetanus-acellular petussis-hepatitis B vaccine administered according to two different primary vaccination schedules. Vaccine,1998,16 :722-726.
收稿日期：1998-09-23 修回日期：1999-03-08, 百拇医药
单位：谢东生 张俊香 巩志立 刘宝奎 唐巧英 阚毓云 窦永寿 赵景杰 (100024 卫生部北京生物制品研究所)
关键词：白喉-破伤风-百日咳疫苗；肝炎疫苗；乙型；免疫性
中华预防医学杂志990309 摘要 目的 了解全细胞百白破-重组酵母乙型肝炎四联疫苗(DTPw-YHB)中重组酵母乙型肝炎疫苗的免疫原性。方法 进行DTPw-YHB四联疫苗中重组酵母乙型肝炎疫苗与单价的重组酵母乙型肝炎疫苗免疫原性比较，DTPw-YHB四联疫苗中不同含量的重组酵母乙型肝炎疫苗免疫原性比较，以及比较DTPw-YHB四联疫苗放置2～8 ℃保存18个月后，重组酵母乙型肝炎疫苗的免疫效力和稳定性。结果 经检测DTPw-YHB四联疫苗中重组酵母乙型肝炎疫苗对小鼠的免疫效果较单价重组酵母乙型肝炎疫苗免疫原性明显增强，小鼠ED50平均比值1∶2.0～1∶3.1; DTPw-YHB四联疫苗中不同含量的重组酵母乙型肝炎疫苗免疫效力无明显区别; DTPw-YHB四联疫苗经2～8 ℃保存18个月后，重组酵母乙型肝炎疫苗的稳定性良好。结论 DTPw-YHB四联疫苗中重组酵母乙型肝炎疫苗的免疫原性高于单价的重组酵母乙型肝炎疫苗。未见DTPw对重组酵母乙型肝炎疫苗的免疫原性有干扰抑制现象，表明DTPw与重组酵母乙型肝炎疫苗相容性好。
, 百拇医药
Component in Diphtheria-Pertussis-Tetanus-Hepatitis B Vaccine
XIE Dongsheng, ZHANG Junxiang, GONG Zhili, et al.
National Vaccine and Serum Institute, Beijing 100024
Abstract Objective To study immunogenecity of yeast-derived recombinant hepatitis B (YHB) component in diphtheria-pertussis-tetanus-YHB vaccine (DPTw-YHB). Methods Immunogenecity of tetra-valent DTPw-YHB vaccine and mono-valent recombinant YHB vaccine， and that of the tetra-valent vaccine with varied YHB component were compared.The efficiency and stability of recombinant YHB in the tetra-valent vaccine stored at 2～8℃ for 18 months were determined. Results The efficiency of recombinant YHB in the tetra-valent vaccine enhanced significantly in mice，as compared with that of mono-valent recombinant YHB vaccine, with an average mouse ED50 of 1∶2.0～1∶3.1.There was no significant difference in efficiency of the tetra-valent vaccine with varied recombinant YHB component.Recombinant YHBin the DPTw-YHB tetra-valent vaccine still kept good stability stored at 2～8℃ for 18 months. Conclusion Recombinant YHB in the tetra-valent vaccine was more immunogenic than the mono-valent YHB vaccine.No interference and inhibition of DPTw to recombinant YHB was found，indicating good compatibility between DPTw and YHB.
, 百拇医药
Key words Diphtheria-tetanus-pertussis vaccine Hepatitis B vaccines Immunity
为了控制乙型肝炎感染，阻断母婴传播，我国于1992年将乙型肝炎疫苗(乙肝疫苗)纳入扩大免疫规划，并提出具体管理目标：2000年新生儿乙肝疫苗城市接种率达90%，农村达60%。把百白破和乙肝疫苗制成联合疫苗将极大地促进这个目标的实现。为此我们对重组酵母乙肝疫苗(YHB)在百白破-重组酵母乙肝四联疫苗(DTPw-YHB)中的免疫原性进行了研究，报告如下。
材料与方法
1. YHB稀释前半成品(铝吸附产品) 、全细胞百日咳菌苗、精制白喉类毒素原液、精制破伤风类毒素原液均为本所生产。
2. DTPw-YHB四联疫苗中YHB与单价YHB的免疫原性比较：用不同批号的YHB稀释前半成品，与全细胞百日咳菌苗、精制白喉类毒素、精制破伤风类毒素配制3批 DTPw-YHB四联疫苗，并设立相应对照组。
, 百拇医药
每毫升DTPw-YHB四联疫苗中含YHB 10 μg、精制白喉类毒素20 Lf、精制破伤风类毒素 5 Lf、全细胞百日咳菌苗 60亿、氢氧化铝1.3 mg。
3. DTPw-YHB四联疫苗中不同含量YHB免疫原性比较：用不同批号的YHB稀释前半成品 、全细胞百日咳菌苗、精制白喉类毒素、精制破伤风类毒素，配制3批含10 μg YHB的DTPw-YHB四联疫苗及3批含5 μg YHB的DTPw-YHB四联疫苗，全细胞百日咳菌苗、精制白喉类毒素、精制破伤风类毒素含量均相同。
4. DTPw-YHB四联疫苗的稳定性试验：将DTPw-YHB四联疫苗2～8℃保存18个月，观察YHB的稳定性。
5. YHB效力试验按重组酵母乙型肝炎疫苗制造及检定暂行规程进行，小鼠半数有效量(ED50)≤1.5 μg为合格。
, 百拇医药 结果
1. DTPw-YHB四联疫苗中YHB与单价YHB的效力：用3批DTPw-YHB四联疫苗免疫NIH小鼠，并设立同批单价YHB作效价对照。DTPw-YHB四联疫苗中YHB的小鼠ED50效价(0.67，0.43，0.52)明显好于单价YHB(1.36，1.17，1.35)，平均比值为1∶2.0，1∶3.1，1∶2.3。
2. DTPw-YHB四联疫苗中不同含量YHB的效力：由于 DTPw-YHB四联疫苗对YHB的免疫原性有显著增强作用，将DTPw-YHB四联疫苗中YHB的含量减半 (5 μg/ml)，结果见表1。
表1 DTPw-YHB四联疫苗中不同
含量YHB的效力检测结果 批
小鼠ED50
, 百拇医药
YHB 10 μg/ml
YHB 5 μg/ml
1
1.38
1.30
2
1.06
1.11
3
0.52
1.42
3. DTPw-YHB四联疫苗中YHB的稳定性：小鼠ED50(μg)分别为1.50、1.48、0.40。同时用这3项试验检测四联疫苗中全细胞百日咳菌苗、精制白喉类毒素、精制破伤风类毒素的效力，结果均在规程合格范围内。
, 百拇医药
讨论
儿童疫苗计划(childrn's vaccine initiative) 倡导的联合疫苗中，百白破-乙肝制备的联合疫苗是国内外学者首选的目标。国外在DTPw-HB及无细胞百白破-乙肝两组四联疫苗的临床观察中取得了比较好的结果[1-3]。但有的临床观察却显示，联合疫苗中HB的免疫原性与单价HB的免疫原性相比呈现下降。虽然HB疫苗对热稳定，但HBsAg蛋白对酶的一些降解或引起水解及二硫键断裂的还原因子敏感。在制备联合疫苗，特别是DTPw疫苗时，成分上的差异和制备DTPw疫苗时使用化学物质都可能影响DTPw-HB联合疫苗中HB疫苗的效力、稳定性，最终影响HB疫苗的功能。
从本研究结果看, DTPw-YHB四联疫苗中YHB的免疫效果较单剂YHB免疫明显增强，平均比值1∶2.0～1∶3.1，这可能由于DTPw-YHB四联疫苗中全细胞白日咳菌苗对YHB有佐剂作用。用DTPw- YHB四联疫苗中YHB 5 μg/ml与10 μg/ml 的含量免疫小鼠效力无明显区别。当然，如能采用5 μg /ml YHB，可降低成本，具有巨大的社会效益和巨大的经济效益。但接种人体后是否具有同样的保护效果还有待于大量的临床观察。稳定性试验表明，DTPw- YHB四联疫苗于2～8℃保存18个月后YHB的效力仍比较稳定，表明YHB与DTPw疫苗之间相容性好。
, http://www.100md.com
参考文献
1 Papaevangelou G, Karvelis E, Alexiou D,et al. Evaluation of a combined tetravalent diphtheria,tetanus,whole-cell pertussis and hepatitis B candidate vaccine administered to healthy infants according to a three-dose vaccination schedule.Vaccine ,1995 , 13:175-178.
2 Usonis V, Bakasenas V, Willems P,et al. Feasibility study of a combined diphtheria-tetanus-acellular pertussis-hepatitis B(DTPa-HBV) vaccine,and comparison of clinical reactions and immune responses with diphtheria-tetanus-acellular pertussis(DTPa) and hepatitis B vaccines applied as mixed or injected into separate limbs. Vaccine, 1997, 15 :1680-1686.
3 Giammanco G, Moiraghi A, Zotti C,et al. Safety and immunogenicity of a combined diphtheria-tetanus-acellular petussis-hepatitis B vaccine administered according to two different primary vaccination schedules. Vaccine,1998,16 :722-726.
收稿日期：1998-09-23 修回日期：1999-03-08, 百拇医药