红花黄色素对血小板活化因子介导的中性粒细胞功能的影响
作者：王玉芹 杨树东 李家实 赵大光 吴伟 金鸣 李金荣
单位：王玉芹 李家实(北京中医药大学中药鉴定室 北京100029)；杨树东 吴伟 金鸣 李金荣(北京市心肺血管疾病研究所生化研究室 北京100029)；赵大光(黑龙江省望奎人民医院 黑龙江152104)
关键词：红花黄色素；中性粒细胞；血小板活化因子
北京中医药大学学报000410
摘要：为了探讨中药红花中的红花黄色素(Safflor Yellow)对血小板活化因子(Platelet-Activating-Factor，PAF)介导的人中性粒细胞功能的影响。通过细胞学的方法，在细胞松弛素B存在下，人的中性粒细胞(PMN)悬液先与不同浓度的红花黄色素温育，然后以PAF刺激，以PMN悬液为空白对照。结果显示：红花黄色素对PAF介导的人中性粒细胞聚集、粘附及超氧化物产生有明显的抑制作用，并且在2～20 g/L浓度范围内，其抑制作用与药物浓度有一定的剂量依赖关系，推测红花黄色素对抗PAF的作用，可能是其活血化瘀的重要机制之一。
, 百拇医药
中图分类号：R285.5
Inhibitory Effects of Safflor Yellow on the Human Neutrophil
Activation Induced by Platelet-Activating Factor
Wang Yuqin Yang Shudong Li Jiashi et al.
(Beijing University of Traditional Chinese Medicine, Beijing 100029)
ABSTRACT：To probe into the effect of Safflor yellow on the human neutrophil activation induced by platelet-activating factor. Methods: human neutrophil was pre-incubated with Safflor yellow of different concentration, then was stimulated by platelet-activating factor with the existence of cytochalasin B. Result: Safflor yellow showed obvious inhibition effects on human neutrophil aggregation, adherence and superoxide generation , the inhibition effects of Safflor yellow were dose-dependent on its concentration in the range of 2～20g.L-1. We deduced that the effects against platelet-activating factor may be one of the important mechanisms of Safflor yellow to activate blood and eliminate blood stasis.
, 百拇医药
KEY WORDS: Safflor yellow; Neutrophil; Platelet-activating; Factor (PAF) Safflor yellow; Neutrophil; Platelet-activating; Factor (PAF)
血小板活化因子(PAF)是一种内源性的磷脂介质。现已阐明体内多种细胞在一定刺激下均能产生并释放PAF。PAF不仅作用于血小板，还可作用于白细胞、内皮细胞、淋巴细胞、巨噬细胞等多种细胞及一些组织和器官，参与过敏性哮喘、内毒素休克、急性炎症等疾病的病理生理过程，在缺血性心脑血管疾病中也起重要作用[1]。红花为常用活血化瘀中药之一，具有抗血栓、抗心肌缺血、改善微循环，抗炎等作用。其主要成分为红花黄色素，属查尔酮类成分。最近，我们发现红花黄色素具有明显的抑制PAF介导的人中性粒细胞(PMN)聚集、超氧化物产生和粘附的作用，现报道如下。
1 材料和方法
, 百拇医药
1.1 药品和试剂
红花黄色素自制。PAF、玫瑰红和细胞松弛素B购自Sigma公司；牛血清白蛋白(BSA)为上海丽珠东风生物技术有限公司产品；细胞色素C为BDH公司产品；淋巴细胞分离液来源于中国科学院血液研究所，为葡萄糖-泛影酸葡甲胺液；Hepes为中国科学院上海生化物理研究所产品；银杏内酯(Ginkolide)由南京药科大学娄凤昌教授提供。其余试剂均为国产分析纯。
1.2 仪器
Chronolog型血小板聚集仪；UV755B分光光度计(上海分析仪器总厂)。
1.3 PMN分离
按文献[2]方法分离PMN(以淋巴细胞分离液代替Ficoll)。分离PMN后用含有0.25%BSA的Hanks平衡盐溶液(HBSS)洗2次，悬浮于HBSS中，调整细胞数为6×109L-1。经台盼蓝染色，拒染率达95%以上。
, http://www.100md.com
1.4 PMN聚集性测定[3]
实验分为生理盐水管、银杏内酯管及不同浓度红花黄色素管。实验前于PMN悬液中加入细胞松弛素B，使其终浓度为10 μg/mL，37 ℃放置2 min。取上述PMN悬液200 μL分别加入生理盐水、银杏内酯或红花黄色素各20 μL，加入1×10-5mol/L PAF-0.25%BSA-生理盐水液40 μL，37 ℃下描记聚集曲线，计算中性粒细胞聚集率及药物对中性粒细胞聚集的抑制率，以观察红花黄色素对PAF介导的中性粒细胞聚集的抑制作用。
1.5 PMN粘附实验[4]
在细胞培养板的孔中，各加入PMN 500 μL，加入细胞松弛素B使终浓度为10 μg/mL，在空白组加入0.25%BSA-生理盐水液50 μL，PAF作用组加入40 μL 1.0×10-5mol/L-1PAF-0.25%BSA-生理盐水液，以0.25%BSA-生理盐水液补足体积；药物作用组在加入PAF前2 min加入银杏内酯或红花黄色素各10 μL，将此细胞培养板置37 ℃恒温水浴中放置30 min，以PBS轻洗各孔2次，各加入0.25%玫瑰红/PBS溶液500 μL，37 ℃恒温水浴中放置5 min，再以PBS各洗3次，加入PBS：无水乙醇(1∶1)700 μL，37 ℃恒温水浴中放置30 min，570 nm处测定光密度(OD)。
, 百拇医药
1.6 PMN超氧化物释放反应[3]
各实验管加入PMN悬液433 μL， 细胞松弛素B(10 mg/L)，37 ℃温育5 min，再加入细胞色素C，使其终浓度为1.96×10-7mol/L,药物作用管在加入PAF前2 min加入药物各10 μL，空白管加入0.25%BSA-生理盐水液，各管以0.25%BSA-生理盐水液补足体积。将各管置37 ℃恒温水浴中放置5 min，3 000 g离心30 s，取上清，550 nm处测定OD值。
2 结果
2.1 红花黄色素对PAF介导PMN聚集的作用
红花黄色素终浓度为1.54×10-1～1.23 g/L时，其抑制率分别为29.32%、51.00%、61.45%和78.31%，呈剂量依赖关系。PAF受体拮抗剂银杏内酯浓度为3.08×10-2 g/L时，抑制率为64.66%，红花黄色素与其作用相似，但没有其作用强。结果见表1。
, http://www.100md.com
表1 红花黄色素对PAF介导的人中性粒细胞聚集的影响
(
±s;n=3) 分 组
剂量
(g/L)
中性粒细胞聚集
(%)
抑制率
(%)
生理盐水
51.88±1.65
—
, http://www.100md.com
银杏内酯
3.08×10-2
18.33±9.81**
64.66
红花黄色素
1.54×10-1
36.67±5.09*
29.32
红花黄色素
3.08×10-1
25.42±5.01*
, http://www.100md.com
51.00
红花黄色素
6.15×10-1
20.00±3.31*
61.45
红花黄色素
1.23
11.25±2.25***
78.31
注：与空白对照比较*P<0.05 **P<0.01 ***P<0.0012.2 红花黄色素对PAF介导的PMN粘附的影响
, 百拇医药
PAF浓度为7.14×10-7mol/L时，吸收值为0.641，红花黄色素浓度为3.57×10-2、7.14×10-2、1.43×10-1、2.86×10-1g/L时，OD值分别为0.617、0.597、0.550和0.522，空白组的OD值为0.490，红花黄色素剂量依赖的抑制了PAF介导的PMN粘附，其作用与PAF受体拮抗剂银杏内酯相似(浓度为7.14×10-3 g/L时，OD值为0.557)。结果见表2。
表2 红花黄色素对PAF介导的人中性粒细胞粘附的影响
(±s;n=3) 分 组
剂量
, http://www.100md.com (g/L)
光密度
(OD)
抑制率
(%)
生理盐水
0.490±0.027
—
PAF(mol/L)
7.14×10-7
0.641±0.012***
—
, http://www.100md.com
银杏内酯
7.14×10-3
0.557±0.880△△
13.10
红花黄色素
3.57×10-2
0.617±0.049
3.74
红花黄色素
7.14×10-2
0.597±0.057
, 百拇医药
6.86
红花黄色素
1.43×10-1
0.550±0.023△△
14.19
红花黄色素
2.86×10-1
0.522±0.045△△△
18.56
注： 与空白对照比较 ***P<0.001；与PAF模型对照比较 △△P<0.01 △△△P<0.0012.3 红花黄色素对PAF介导的PMN释放超氧化物的影响
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PAF浓度为4.49×10-6mol/L时，OD值为0.257，与空白管的0.356相比，减少了近0.1，其超氧化物释放率为27.81%，红花黄色素浓度从3.92×10-2～3.14×10-1 g/L，其抑制率分别为40.42%、53.54%、87.88%和95.97%，银杏内酯5.88×10-2 g/L的抑制率为89.89%。结果见表3。
表3 红花黄色素对PAF介导的人中性粒细胞
超氧化物产生的影响 (±s;n=3) 分 组
剂量
(g/L)
光密度
, 百拇医药
(OD)
抑制率
(%)
生理盐水
0.356±0.030
—
PAF(mol/L)
4.49×10-6
0.257±0.036*
—
银杏内酯
5.88×10-2
, 百拇医药
0.346±0.057△
89.89
红花黄色素
3.92×10-2
0.297±0.043
40.42
红花黄色素
7.84×10-2
0.310±0.031
53.54
红花黄色素
, 百拇医药
1.57×10-1
0.344±0.046
87.88
红花黄色素
3.14×10-1
0.352±0.029△
95.97
注： 与空白对照比较*P<0.05； 与PAF模型比较△P<0.053 讨论
红花为常用的活血化瘀药，用于治疗心脑血管疾病已有数千年的历史。红花黄色素为红花主要水溶性成分, 具抗血栓, 抑制ADP等诱发的血小板聚集,改善微循环等作用[5]。我们发现，红花水溶性成分具有明显的抑制PAF诱发的家兔血小板聚集和小鼠毛细血管通透性增加的作用[6，7],并认为该作用的机理可能为红花黄色素的PAF受体拮抗作用。PAF为一重要的炎症介质,它可介导中性粒细胞的聚集、粘附和释放反应，本实验结果表明：红花总黄色素抑制PAF介导的PMN聚集、粘附和超氧化物释放均具一定的量效关系，这进一步提示其可能具拮抗PAF的作用。
, http://www.100md.com
红花黄色素属黄酮类成分,据报道槲皮素等多种黄酮类成分具明显的抗PAF作用[8]，提示它们可能有共同的机制，该作用及本文报道红花总黄色素抑制PAF介导的PMN聚集、粘附和超氧化物释放的作用均可能为PAF受体拮抗作用的机理，但红花黄色素的这种机理还有待受体结合实验的证实。
在动脉粥样硬化、心肌缺血等血液循环障碍的病理过程中,PAF起了重要的介导作用[1], 红花用于治疗此类疾病以水煎液入药, 提示红花黄色素抗PAF的作用可能是其活血化瘀作用的重要机制之一，并有可能成为抗炎药物。
国家自然科学基金资助项目(No.39670884),北京市重点实验室课题资助项目,北京市跨世纪人才工程基金资助项目.
王玉芹,女,27岁,在读医学博士生.
参 考 文 献
, 百拇医药
1，韩雅玲. 血小板激活因子与冠心病. 国外医学*心血管疾病分册, 1993, 20(4):195～198
2，Vercellotti G.M, Yin H.Q, Gustafson K.S, et al. Platelet-Activating Factor Primes Neutrophil Responses to Agonists: Role in Promoting Neutrophil-Mediated Endothelial Damage. Blood，1988，171(4): 1100～1107
3，Prmod M. Lad , Charles V. Olson， Iqbal S. Grewal. Platelet-Activating Factor Mediated Effects on Human Neutrophil Function are Inhibited by PERTUSSIS TOXIN. Biochemical and Biophysical Research Communications， 1985，129(3): 632～638
, 百拇医药
4，Jennifer R， Gamble and Mathew. A new assay for the measurement of the attachment of neutrophils and other cell types to endothelial cells. Journal of Immunological Methods，1988，(109): 175～184
5，阴 健, 郭力弓. 中药现代研究与临床应用.北京:学苑出版社,1993.330～336
6，杨树东, 李金荣, 蔡亚欣, 等. 红花水溶性成分的分离及其对血小板激活因子的拮抗作用. 心肺血管病杂志， 1996，15(4):198
7，吴 伟, 金 鸣，杨树东，等. 红花黄色素抑制血小板激活因子所致毛细血管通透性增加的研究. 心肺血管病杂志，1999，18(4): 281～283
8，Shu-Huey Tzeng, Wun-Chang Ko, Feng-Nien, et al. Inhibintion of platelet aggregation by flavonoids . Thrombosis Research， 1991，64: 91～100
(收稿日期：2000-01-14), http://www.100md.com
单位：王玉芹 李家实(北京中医药大学中药鉴定室 北京100029)；杨树东 吴伟 金鸣 李金荣(北京市心肺血管疾病研究所生化研究室 北京100029)；赵大光(黑龙江省望奎人民医院 黑龙江152104)
关键词：红花黄色素；中性粒细胞；血小板活化因子
北京中医药大学学报000410
摘要：为了探讨中药红花中的红花黄色素(Safflor Yellow)对血小板活化因子(Platelet-Activating-Factor，PAF)介导的人中性粒细胞功能的影响。通过细胞学的方法，在细胞松弛素B存在下，人的中性粒细胞(PMN)悬液先与不同浓度的红花黄色素温育，然后以PAF刺激，以PMN悬液为空白对照。结果显示：红花黄色素对PAF介导的人中性粒细胞聚集、粘附及超氧化物产生有明显的抑制作用，并且在2～20 g/L浓度范围内，其抑制作用与药物浓度有一定的剂量依赖关系，推测红花黄色素对抗PAF的作用，可能是其活血化瘀的重要机制之一。
, 百拇医药
中图分类号：R285.5
Inhibitory Effects of Safflor Yellow on the Human Neutrophil
Activation Induced by Platelet-Activating Factor
Wang Yuqin Yang Shudong Li Jiashi et al.
(Beijing University of Traditional Chinese Medicine, Beijing 100029)
ABSTRACT：To probe into the effect of Safflor yellow on the human neutrophil activation induced by platelet-activating factor. Methods: human neutrophil was pre-incubated with Safflor yellow of different concentration, then was stimulated by platelet-activating factor with the existence of cytochalasin B. Result: Safflor yellow showed obvious inhibition effects on human neutrophil aggregation, adherence and superoxide generation , the inhibition effects of Safflor yellow were dose-dependent on its concentration in the range of 2～20g.L-1. We deduced that the effects against platelet-activating factor may be one of the important mechanisms of Safflor yellow to activate blood and eliminate blood stasis.
, 百拇医药
KEY WORDS: Safflor yellow; Neutrophil; Platelet-activating; Factor (PAF) Safflor yellow; Neutrophil; Platelet-activating; Factor (PAF)
血小板活化因子(PAF)是一种内源性的磷脂介质。现已阐明体内多种细胞在一定刺激下均能产生并释放PAF。PAF不仅作用于血小板，还可作用于白细胞、内皮细胞、淋巴细胞、巨噬细胞等多种细胞及一些组织和器官，参与过敏性哮喘、内毒素休克、急性炎症等疾病的病理生理过程，在缺血性心脑血管疾病中也起重要作用[1]。红花为常用活血化瘀中药之一，具有抗血栓、抗心肌缺血、改善微循环，抗炎等作用。其主要成分为红花黄色素，属查尔酮类成分。最近，我们发现红花黄色素具有明显的抑制PAF介导的人中性粒细胞(PMN)聚集、超氧化物产生和粘附的作用，现报道如下。
1 材料和方法
, 百拇医药
1.1 药品和试剂
红花黄色素自制。PAF、玫瑰红和细胞松弛素B购自Sigma公司；牛血清白蛋白(BSA)为上海丽珠东风生物技术有限公司产品；细胞色素C为BDH公司产品；淋巴细胞分离液来源于中国科学院血液研究所，为葡萄糖-泛影酸葡甲胺液；Hepes为中国科学院上海生化物理研究所产品；银杏内酯(Ginkolide)由南京药科大学娄凤昌教授提供。其余试剂均为国产分析纯。
1.2 仪器
Chronolog型血小板聚集仪；UV755B分光光度计(上海分析仪器总厂)。
1.3 PMN分离
按文献[2]方法分离PMN(以淋巴细胞分离液代替Ficoll)。分离PMN后用含有0.25%BSA的Hanks平衡盐溶液(HBSS)洗2次，悬浮于HBSS中，调整细胞数为6×109L-1。经台盼蓝染色，拒染率达95%以上。
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1.4 PMN聚集性测定[3]
实验分为生理盐水管、银杏内酯管及不同浓度红花黄色素管。实验前于PMN悬液中加入细胞松弛素B，使其终浓度为10 μg/mL，37 ℃放置2 min。取上述PMN悬液200 μL分别加入生理盐水、银杏内酯或红花黄色素各20 μL，加入1×10-5mol/L PAF-0.25%BSA-生理盐水液40 μL，37 ℃下描记聚集曲线，计算中性粒细胞聚集率及药物对中性粒细胞聚集的抑制率，以观察红花黄色素对PAF介导的中性粒细胞聚集的抑制作用。
1.5 PMN粘附实验[4]
在细胞培养板的孔中，各加入PMN 500 μL，加入细胞松弛素B使终浓度为10 μg/mL，在空白组加入0.25%BSA-生理盐水液50 μL，PAF作用组加入40 μL 1.0×10-5mol/L-1PAF-0.25%BSA-生理盐水液，以0.25%BSA-生理盐水液补足体积；药物作用组在加入PAF前2 min加入银杏内酯或红花黄色素各10 μL，将此细胞培养板置37 ℃恒温水浴中放置30 min，以PBS轻洗各孔2次，各加入0.25%玫瑰红/PBS溶液500 μL，37 ℃恒温水浴中放置5 min，再以PBS各洗3次，加入PBS：无水乙醇(1∶1)700 μL，37 ℃恒温水浴中放置30 min，570 nm处测定光密度(OD)。
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1.6 PMN超氧化物释放反应[3]
各实验管加入PMN悬液433 μL， 细胞松弛素B(10 mg/L)，37 ℃温育5 min，再加入细胞色素C，使其终浓度为1.96×10-7mol/L,药物作用管在加入PAF前2 min加入药物各10 μL，空白管加入0.25%BSA-生理盐水液，各管以0.25%BSA-生理盐水液补足体积。将各管置37 ℃恒温水浴中放置5 min，3 000 g离心30 s，取上清，550 nm处测定OD值。
2 结果
2.1 红花黄色素对PAF介导PMN聚集的作用
红花黄色素终浓度为1.54×10-1～1.23 g/L时，其抑制率分别为29.32%、51.00%、61.45%和78.31%，呈剂量依赖关系。PAF受体拮抗剂银杏内酯浓度为3.08×10-2 g/L时，抑制率为64.66%，红花黄色素与其作用相似，但没有其作用强。结果见表1。
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表1 红花黄色素对PAF介导的人中性粒细胞聚集的影响
(
±s;n=3) 分 组剂量
(g/L)
中性粒细胞聚集
(%)
抑制率
(%)
生理盐水
51.88±1.65
—
, http://www.100md.com
银杏内酯
3.08×10-2
18.33±9.81**
64.66
红花黄色素
1.54×10-1
36.67±5.09*
29.32
红花黄色素
3.08×10-1
25.42±5.01*
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51.00
红花黄色素
6.15×10-1
20.00±3.31*
61.45
红花黄色素
1.23
11.25±2.25***
78.31
注：与空白对照比较*P<0.05 **P<0.01 ***P<0.0012.2 红花黄色素对PAF介导的PMN粘附的影响
, 百拇医药
PAF浓度为7.14×10-7mol/L时，吸收值为0.641，红花黄色素浓度为3.57×10-2、7.14×10-2、1.43×10-1、2.86×10-1g/L时，OD值分别为0.617、0.597、0.550和0.522，空白组的OD值为0.490，红花黄色素剂量依赖的抑制了PAF介导的PMN粘附，其作用与PAF受体拮抗剂银杏内酯相似(浓度为7.14×10-3 g/L时，OD值为0.557)。结果见表2。
表2 红花黄色素对PAF介导的人中性粒细胞粘附的影响
(
±s;n=3) 分 组剂量
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光密度
(OD)
抑制率
(%)
生理盐水
0.490±0.027
—
PAF(mol/L)
7.14×10-7
0.641±0.012***
—
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银杏内酯
7.14×10-3
0.557±0.880△△
13.10
红花黄色素
3.57×10-2
0.617±0.049
3.74
红花黄色素
7.14×10-2
0.597±0.057
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6.86
红花黄色素
1.43×10-1
0.550±0.023△△
14.19
红花黄色素
2.86×10-1
0.522±0.045△△△
18.56
注： 与空白对照比较 ***P<0.001；与PAF模型对照比较 △△P<0.01 △△△P<0.0012.3 红花黄色素对PAF介导的PMN释放超氧化物的影响
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PAF浓度为4.49×10-6mol/L时，OD值为0.257，与空白管的0.356相比，减少了近0.1，其超氧化物释放率为27.81%，红花黄色素浓度从3.92×10-2～3.14×10-1 g/L，其抑制率分别为40.42%、53.54%、87.88%和95.97%，银杏内酯5.88×10-2 g/L的抑制率为89.89%。结果见表3。
表3 红花黄色素对PAF介导的人中性粒细胞
超氧化物产生的影响 (
±s;n=3) 分 组剂量
(g/L)
光密度
, 百拇医药
(OD)
抑制率
(%)
生理盐水
0.356±0.030
—
PAF(mol/L)
4.49×10-6
0.257±0.036*
—
银杏内酯
5.88×10-2
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0.346±0.057△
89.89
红花黄色素
3.92×10-2
0.297±0.043
40.42
红花黄色素
7.84×10-2
0.310±0.031
53.54
红花黄色素
, 百拇医药
1.57×10-1
0.344±0.046
87.88
红花黄色素
3.14×10-1
0.352±0.029△
95.97
注： 与空白对照比较*P<0.05； 与PAF模型比较△P<0.053 讨论
红花为常用的活血化瘀药，用于治疗心脑血管疾病已有数千年的历史。红花黄色素为红花主要水溶性成分, 具抗血栓, 抑制ADP等诱发的血小板聚集,改善微循环等作用[5]。我们发现，红花水溶性成分具有明显的抑制PAF诱发的家兔血小板聚集和小鼠毛细血管通透性增加的作用[6，7],并认为该作用的机理可能为红花黄色素的PAF受体拮抗作用。PAF为一重要的炎症介质,它可介导中性粒细胞的聚集、粘附和释放反应，本实验结果表明：红花总黄色素抑制PAF介导的PMN聚集、粘附和超氧化物释放均具一定的量效关系，这进一步提示其可能具拮抗PAF的作用。
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红花黄色素属黄酮类成分,据报道槲皮素等多种黄酮类成分具明显的抗PAF作用[8]，提示它们可能有共同的机制，该作用及本文报道红花总黄色素抑制PAF介导的PMN聚集、粘附和超氧化物释放的作用均可能为PAF受体拮抗作用的机理，但红花黄色素的这种机理还有待受体结合实验的证实。
在动脉粥样硬化、心肌缺血等血液循环障碍的病理过程中,PAF起了重要的介导作用[1], 红花用于治疗此类疾病以水煎液入药, 提示红花黄色素抗PAF的作用可能是其活血化瘀作用的重要机制之一，并有可能成为抗炎药物。
国家自然科学基金资助项目(No.39670884),北京市重点实验室课题资助项目,北京市跨世纪人才工程基金资助项目.
王玉芹,女,27岁,在读医学博士生.
参 考 文 献
, 百拇医药
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3，Prmod M. Lad , Charles V. Olson， Iqbal S. Grewal. Platelet-Activating Factor Mediated Effects on Human Neutrophil Function are Inhibited by PERTUSSIS TOXIN. Biochemical and Biophysical Research Communications， 1985，129(3): 632～638
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4，Jennifer R， Gamble and Mathew. A new assay for the measurement of the attachment of neutrophils and other cell types to endothelial cells. Journal of Immunological Methods，1988，(109): 175～184
5，阴 健, 郭力弓. 中药现代研究与临床应用.北京:学苑出版社,1993.330～336
6，杨树东, 李金荣, 蔡亚欣, 等. 红花水溶性成分的分离及其对血小板激活因子的拮抗作用. 心肺血管病杂志， 1996，15(4):198
7，吴 伟, 金 鸣，杨树东，等. 红花黄色素抑制血小板激活因子所致毛细血管通透性增加的研究. 心肺血管病杂志，1999，18(4): 281～283
8，Shu-Huey Tzeng, Wun-Chang Ko, Feng-Nien, et al. Inhibintion of platelet aggregation by flavonoids . Thrombosis Research， 1991，64: 91～100
(收稿日期：2000-01-14), http://www.100md.com