氨茶碱对哮喘豚鼠嗜酸细胞、低密度嗜酸细胞及内皮素的影响
作者：周红梅 孔祥英 白家驷
单位：第三军医大学附属西南医院儿科，重庆 400038
关键词：哮喘；氨茶碱；嗜酸性粒细胞；低密度嗜酸性粒细胞；内皮素；豚鼠
第三军医大学学报001243
中图法分类号： R562.25 文献标识码： B
文章编号：1000-5404(2000)12-1220-01
Effect of aminophylline on eosinophils, hypodense eosinophils and endothelin in asthmatic guinea pigs
通过观察氨茶碱对哮喘豚鼠支气管肺泡灌洗液(Bronchalveolar lavage fluid,BALF)中嗜酸细胞(Eosinophils,EOS)、低密度嗜酸细胞(Hypodense eosinophils,HEOS)及血浆内皮素(Endothelin,ET)的影响，探讨茶碱类药物治疗哮喘的部分机制。
, 百拇医药
1 材料与方法
哮喘动物模型的制作：将30只豚鼠随机分为3组，正常组、哮喘组、治疗组。采用王长征[1]法加以改进复制哮喘模型。治疗组从诱喘当日起予以氨茶碱40 mg/kg腹腔注射。
肺组织光镜标本制作：经股动脉放血处死豚鼠后开胸取肺，10%甲醛固定，常规石蜡包埋、切片、HE染色。
BALF中EOS及HEOS的分离计数：用生理盐水行支气管肺泡灌洗，将BALF离心洗涤沉淀细胞，用Percoll液分离EOS计数，密度小于1.085为HEOS。
ET的测定：用放射免疫试剂盒(中国军事医学科学院提供)测定血浆及BALF中ET含量。
统计学分析：组间比较采用t检验；采用直线相关分析因素间的相关性。
, 百拇医药
2 结果
哮喘组可见气道粘膜上皮破坏：粘膜下嗜酸性粒细胞浸润明显，治疗组气道气道粘膜上皮破坏不明显，粘膜下EOS浸润减少。
BALF中EOS数量及HEOS百分率：哮喘组EOS数量[(12.50±1.74)×106/L]及HEOS百分率(54.62%±8.47%)均较正常组[(3.86±1.20)×106/L，19.82%±3.25%]明显升高(P<0.01)，而治疗组[(7.20±1.56)×106/L，32.71%±7.60%]较哮喘组明显降低(P<0.01)，但仍高于正常组。
BALF及血浆ET测定：哮喘组BALF及血浆ET[(21.46±2.25)ng/L，(153.8±18.86)ng/L]较正常组[(17±1.48)ng/L，(130.4±14.03)ng/L]明显升高(P<0.01)，而治疗组[(15.86±1.79)ng/L，(87.1±19.15)ng/L]较哮喘组明显降低(P<0.01)，且治疗组血浆ET较正常组也明显降低(P<0.01)。
, 百拇医药
指标间的相关分析：BALF中EOS计数与BALF中ET浓度存在明显正相关(r=0.633，P<0.01)。
3 讨论
支气管哮喘是一种由EOS等炎细胞参与形成的气道非特异性炎症。EOS通过释放MBP、EPO、EDN等损伤气道上皮，造成气道高反应性。它还可分泌IL-5、IL-3、GM-CSF等增强自身活力，形成恶性循环。我们复制哮喘动物模型肺组织下见粘膜下EOS浸润明显，BALF中EOS数量及HEOS百分率升高，HEOS在结构上呈明显的低颗粒化，具有更明显的细胞毒性、更强的氧代谢，并产生更多的炎性介质，加重气道损害。经由氨茶碱治疗后的豚鼠BALF中EOS数量及HEOS百分率均下降，肺组织切片EOS浸润减少，说明茶碱可减轻吸入过敏原后导致的气道炎症。
ET不但是最强的收缩血管、支气管的物质，在哮喘气道重建中也起着重要作用。我们实验发现，哮喘组豚鼠BALF及血浆ET升高，且BALF中ET水平与EOS数量呈明显正相关，说明哮喘发作时ET起着致炎作用，与EOS浸润关系密切。经氨茶碱治疗后豚鼠BALF及血浆ET明显下降，BALF中EOS也明显减少，提示氨茶碱通过降低ET水平和EOS数量减轻哮喘豚鼠的肺组织炎症。
, 百拇医药
氨茶碱减轻EOS在肺内的浸润与其抑制EOS粘附分子MAC的表达[2]及诱导EOS凋亡[3]有关；它降低ET水平的作用机制尚不清楚，有待进一步研究。
作者简介：周红梅(1973-)，女，重庆市人，硕士研究生，医师，主要从事支气管哮喘方面的研究。电话：(023)68754000-73098
参考文献：
[1] 王长征，郭先健，王顺朝.雷公藤甲素对哮喘动物模型气道反应性的观察[J].中华医学杂志，1996，76(1):68-69.
[2] Sacara H, Kukuda T, Okada T, et al. Theophylline at therapeutic concentration suppress PAF-induced upregulation of MAC-1 on human eosinophils[J]. Clin Exp Allergy，1996，26(S2):16-21.
[3] Adachi T, Motojima S, Hirata A, et al. Eosinophil apoptosis caused by theophylline, glucocorticoids, and macradides after stimulation with IL-5[J]. J Allergy Clin Immunol， 1996，98(2):207-215.
收稿日期：2000-04-13；修回日期：2000-07-26, http://www.100md.com
单位：第三军医大学附属西南医院儿科，重庆 400038
关键词：哮喘；氨茶碱；嗜酸性粒细胞；低密度嗜酸性粒细胞；内皮素；豚鼠
第三军医大学学报001243
中图法分类号： R562.25 文献标识码： B
文章编号：1000-5404(2000)12-1220-01
Effect of aminophylline on eosinophils, hypodense eosinophils and endothelin in asthmatic guinea pigs
通过观察氨茶碱对哮喘豚鼠支气管肺泡灌洗液(Bronchalveolar lavage fluid,BALF)中嗜酸细胞(Eosinophils,EOS)、低密度嗜酸细胞(Hypodense eosinophils,HEOS)及血浆内皮素(Endothelin,ET)的影响，探讨茶碱类药物治疗哮喘的部分机制。
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1 材料与方法
哮喘动物模型的制作：将30只豚鼠随机分为3组，正常组、哮喘组、治疗组。采用王长征[1]法加以改进复制哮喘模型。治疗组从诱喘当日起予以氨茶碱40 mg/kg腹腔注射。
肺组织光镜标本制作：经股动脉放血处死豚鼠后开胸取肺，10%甲醛固定，常规石蜡包埋、切片、HE染色。
BALF中EOS及HEOS的分离计数：用生理盐水行支气管肺泡灌洗，将BALF离心洗涤沉淀细胞，用Percoll液分离EOS计数，密度小于1.085为HEOS。
ET的测定：用放射免疫试剂盒(中国军事医学科学院提供)测定血浆及BALF中ET含量。
统计学分析：组间比较采用t检验；采用直线相关分析因素间的相关性。
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2 结果
哮喘组可见气道粘膜上皮破坏：粘膜下嗜酸性粒细胞浸润明显，治疗组气道气道粘膜上皮破坏不明显，粘膜下EOS浸润减少。
BALF中EOS数量及HEOS百分率：哮喘组EOS数量[(12.50±1.74)×106/L]及HEOS百分率(54.62%±8.47%)均较正常组[(3.86±1.20)×106/L，19.82%±3.25%]明显升高(P<0.01)，而治疗组[(7.20±1.56)×106/L，32.71%±7.60%]较哮喘组明显降低(P<0.01)，但仍高于正常组。
BALF及血浆ET测定：哮喘组BALF及血浆ET[(21.46±2.25)ng/L，(153.8±18.86)ng/L]较正常组[(17±1.48)ng/L，(130.4±14.03)ng/L]明显升高(P<0.01)，而治疗组[(15.86±1.79)ng/L，(87.1±19.15)ng/L]较哮喘组明显降低(P<0.01)，且治疗组血浆ET较正常组也明显降低(P<0.01)。
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指标间的相关分析：BALF中EOS计数与BALF中ET浓度存在明显正相关(r=0.633，P<0.01)。
3 讨论
支气管哮喘是一种由EOS等炎细胞参与形成的气道非特异性炎症。EOS通过释放MBP、EPO、EDN等损伤气道上皮，造成气道高反应性。它还可分泌IL-5、IL-3、GM-CSF等增强自身活力，形成恶性循环。我们复制哮喘动物模型肺组织下见粘膜下EOS浸润明显，BALF中EOS数量及HEOS百分率升高，HEOS在结构上呈明显的低颗粒化，具有更明显的细胞毒性、更强的氧代谢，并产生更多的炎性介质，加重气道损害。经由氨茶碱治疗后的豚鼠BALF中EOS数量及HEOS百分率均下降，肺组织切片EOS浸润减少，说明茶碱可减轻吸入过敏原后导致的气道炎症。
ET不但是最强的收缩血管、支气管的物质，在哮喘气道重建中也起着重要作用。我们实验发现，哮喘组豚鼠BALF及血浆ET升高，且BALF中ET水平与EOS数量呈明显正相关，说明哮喘发作时ET起着致炎作用，与EOS浸润关系密切。经氨茶碱治疗后豚鼠BALF及血浆ET明显下降，BALF中EOS也明显减少，提示氨茶碱通过降低ET水平和EOS数量减轻哮喘豚鼠的肺组织炎症。
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氨茶碱减轻EOS在肺内的浸润与其抑制EOS粘附分子MAC的表达[2]及诱导EOS凋亡[3]有关；它降低ET水平的作用机制尚不清楚，有待进一步研究。
作者简介：周红梅(1973-)，女，重庆市人，硕士研究生，医师，主要从事支气管哮喘方面的研究。电话：(023)68754000-73098
参考文献：
[1] 王长征，郭先健，王顺朝.雷公藤甲素对哮喘动物模型气道反应性的观察[J].中华医学杂志，1996，76(1):68-69.
[2] Sacara H, Kukuda T, Okada T, et al. Theophylline at therapeutic concentration suppress PAF-induced upregulation of MAC-1 on human eosinophils[J]. Clin Exp Allergy，1996，26(S2):16-21.
[3] Adachi T, Motojima S, Hirata A, et al. Eosinophil apoptosis caused by theophylline, glucocorticoids, and macradides after stimulation with IL-5[J]. J Allergy Clin Immunol， 1996，98(2):207-215.
收稿日期：2000-04-13；修回日期：2000-07-26, http://www.100md.com