不稳定性心绞痛患者血浆vWF、GMP-140检测的临床意义
作者：金露
单位：南通医学院附属医院心血管内科，南通 226001
关键词：不稳定性心绞痛；血管性假血友病因子；α颗粒膜蛋白-140
中国老年学杂志000508摘 要 目的 探讨内皮及血小板活化功能在不稳定性心绞痛中的作用。方法 采用ELISA双抗体夹心法测定不稳定性心绞痛17例、稳定性心绞痛25例、正常人22例血浆vWF(von Willebrand因子，血管性假血友病因子)、GMP-140(α颗粒膜蛋白-140)水平。结果 不稳定性心绞痛组急性阶段血浆vWF、GMP-140显著高于稳定性心绞痛组和正常人组(P<0.01)，后两者之间无显著差异。不稳定性心绞痛组病情稳定后，血浆GMP-140、vWF水平较急性阶段显著下降，GMP-140与正常人组无显著差异(P>0.05)，血浆vWF仍高于正常人组(P<0.05)。结论 提示内皮损伤、血小板活化及血栓形成在不稳定性心绞痛的发病中具有重要意义。
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近年来，众多研究认为血栓形成是急性心肌梗死(AMI)的重要发病机制〔1〕，而内皮功能和血小板活化状态在血栓形成过程起关键作用〔2〕。不稳定性心绞痛(UAP)是AMI和心源性猝死的前期发展阶段，这种不稳定的心肌缺血综合征具有重要的临床意义。但目前对UAP和血栓形成的关系有许多不明之处。本研究通过观察UAP患者血浆vWF(von Willebrand因子，血管性假血友病因子、GMP-140(α颗粒膜蛋白-140)水平的变化，旨在探讨内皮及血小板活化功能在UAP中的作用，以期为UAP患者临床合理地改善内皮细胞功能及血小板功能治疗提供有益的资料。
1 材料和方法
1.1 对象 选择UAP17例，男13例，女4例，年龄67±9(62～80)岁，包括初发和恶化劳力型心绞痛10例、混合型心绞痛4例、梗死后心绞痛3例；稳定性心绞痛(SAP)25例，男16例，女9例，年龄61±7(60～83)岁。上述病例均符合WHO(1979)制定的冠心病诊断标准，且所有患者均测定CK-MB，以排除急性心肌梗死。正常对照组22例均为门诊健康体检者，均无冠心病、高血压、高血脂、糖尿病及出凝血疾病，年龄63±8(65～81)岁。各组对象测试前1 w均未使用阿斯匹林、潘生丁等影响血小板功能的药物。
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1.2 检测方法 正常对照组和SAP组患者清晨空腹采血一次，UAP组患者于急性发作的当日及入院后病情稳定后1 w各采血1次(以入院后心绞痛发作次数减少2/3，或疼痛时间显著缩短，基本上不用硝酸甘油片，24 h Holter监测心肌缺血发作次数减少50%以上，或ST段下移减少0.1 mV为病情稳定)。检测对象均于上午8点前空腹采血，采血前稍静息后取肘前静脉血2 ml，其中1 ml与0.13 mol/L枸橼酸钠按9∶1混合作测vWF之用，另1 ml与2%EDTA-Na2按9∶1混合作测GMP-140之用。采血后在30 min内低温离心分离血浆(4℃，4 000 r/min，15 min)，-70℃低温冰箱保存，一次性测定。血浆vWF、GMP-140采用ELISA双抗体夹心法，由福建太阳生物技术公司提供试剂盒，操作按试剂盒上说明进行。
1.3 统计学方法 数据以x±s表示，组间比较分别采用方差分析和q检验，自身比较采用配对t检验。
, http://www.100md.com 2 结 果
UAP组患者急性阶段血浆vWF、GMP-140水平高于SAP组和对照组(P<0.01)，后两者之间无显著差异(P>0.05)。
17例UAP组中有2例发展为急性心肌梗死，其后追踪测其血浆vWF、GMP-140水平均持续明显增高，另15例UAP患者病情稳定后血浆vWF、GMP-140水平较急性阶段明显下降(P<0.05)，GMP-140水平与正常人组相比差异无显著性，血浆vWF仍高于正常人组(P<0.05)(表1)。
表1 三组血浆vWF、GMP-140水平变化 组别
例数
vWF(%)
GMP-140(ng/ml)
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UAP组
急性阶段
17
167.94±29.321)2)
33.26±13.501)2)
病情稳定后
15
138.37±22.073)
20.29±4.84
SAP组
25
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108.42±31.57
17.73±6.58
正常对照组
22
101.87±22.80
15.2±6.5
注：与SAP组和对照组比较：1)P<0.01；与UAP病情稳定时比较：2)P<0.05；与正常对照组比较：3)P<0.05
3 讨 论
vWF是主要由内皮细胞合成一种多聚体糖蛋白，储存在内皮细胞Weibel-Palade小体中。vWF在调节血小板粘附受损血管内皮的过程中起关键作用，促进血小板粘附，血栓形成〔3〕。一般认为，vWF可作为反映血管内皮受损的一个指标，高水平vWF有助于预测血栓性疾病〔4〕，是AMI猝死的一危险因子〔5〕。GMP-140是存在于血小板α颗粒膜上和血管内皮细胞内Weibel-Palade小体中一种膜糖蛋白，以血小板膜GMP-140和血浆GMP-140二种形式存在。当血小板被激活或内皮细胞损伤时，GMP-140含量可升高。最近资料表明，与内皮细胞损伤因素相比，GMP-140血浆浓度更能直接反映血小板活化程度，是一种血小板激活时的特异分子标志物〔6〕。在血栓形成过程中，GMP-140作为粘附分子起始动作用，使血小板、中性粒细胞和内皮细胞相互作用，在动脉粥样硬化、炎症、血栓发生中起核心作用〔7〕。
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本研究表明，UAP患者急性阶段血浆vWF水平显著高于SAP组和正常对照组，说明UAP急性阶段存在内皮功能损害，表明血管内皮损伤在UAP的发生、发展过程中可能具有重要作用；UAP急性阶段时血浆GMP-140亦显著增高，表明UAP急性阶段存在血小板大量激活，使释放至血浆中的GMP-140显著升高，活化的血小板可释放各种代谢产物〔8〕，加重内皮损害。因此，UAP急性阶段在内皮损伤同时又存在血小板活化，两者相互作用，促进血栓形成。有研究报道GMP-140还能上调单核细胞表达组织因子〔9〕，进一步引起止血异常，加重不稳定性心绞痛的病理过程。在随后的进一步观察中发现，UAP组随病情的改善，血浆vWF、GMP-140也显著下降，GMP-140趋于正常，vWF值仍较正常人组为高，在急性阶段存在内皮严重受损，血小板活化功能亢进及止血异常状态，病情改善后，内皮损伤有所减轻，而SAP组患者vWF、GMP-140水平并不升高，提示其体内无严重内皮损伤及血小板大量激活。
总之，UAP患者存在内皮功能损伤及血小板活化功能亢进，促凝因素较一般心绞痛患者强烈，其发病可能是在动脉粥样硬化基础上有血栓因素参与，微血栓形成，导致冠脉不完全闭塞及不稳定的心肌缺血状态。通过血浆vWF、GMP-140测定，为UAP患者积极抗凝及改善内皮细胞功能的治疗，有效改善冠脉循环提供了有力的佐证。 作者简介：金露，女，30岁，主治医师，硕士，从事缺血性心脏病研究
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参考文献
1，Tanaka M,Suzuki A.Hemostatic abnormalities in acute myocardial infarction as detected by specific blood markers.Thromb Res，1994；76：286
2，Cines DB,Pollak ES,Buck CA et al.Endothelial cells in physiology and in the pathophysiology of vascular disorders.Blood，1998；91：3527
3，Mannucci PM.Platelet von Willebrand factor in inhierited and acquired bleeding disorders.Proc Natl Acad Sci USA，1995；92：2428
, 百拇医药
4，Mannucci PM.Von Willebrand Factor:A marker of endothelial damage?Arterioscler Thromb Vasc Biol，1998；18：1359
5，Jansson JH,Nilsson TK,Johnson O.Von Willebrand factor in plasma:A novel risk factor for recurrent myocardial infarction and death.Br Heart J，1991；66：351
6，Blann AD,Lip GYH,Beevers BG et al.Soluble P-selectin in atherosclerosis:A comparison with endothelial cell and platelet markers.Thromb Haemost，1997；77：1077
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7，Furie B,Furie BC.The molecular basis of platelet and endothelial cell interaction with neutrophils and monocytes:Role of P-selection and the P-selectin ligand,PSGL-1.Thromb Haemost，1995；74：224
8，Leo R,Pratico D,Iuliano L et al.Platelet activation by superoxide anion and hydroxyl radicals intrinsically generated by platelets that had undergone anoxia and than reoxygenated.Circulation，1997；95：885
9，Furie B,Furie BC.P-Selectin induction of tissue factor biosynthesis and expression.Haemostasis，1996；26(suppl 1)：60
收稿日期：1999-07-05
修回日期：2000-03-01, http://www.100md.com
单位：南通医学院附属医院心血管内科，南通 226001
关键词：不稳定性心绞痛；血管性假血友病因子；α颗粒膜蛋白-140
中国老年学杂志000508摘 要 目的 探讨内皮及血小板活化功能在不稳定性心绞痛中的作用。方法 采用ELISA双抗体夹心法测定不稳定性心绞痛17例、稳定性心绞痛25例、正常人22例血浆vWF(von Willebrand因子，血管性假血友病因子)、GMP-140(α颗粒膜蛋白-140)水平。结果 不稳定性心绞痛组急性阶段血浆vWF、GMP-140显著高于稳定性心绞痛组和正常人组(P<0.01)，后两者之间无显著差异。不稳定性心绞痛组病情稳定后，血浆GMP-140、vWF水平较急性阶段显著下降，GMP-140与正常人组无显著差异(P>0.05)，血浆vWF仍高于正常人组(P<0.05)。结论 提示内皮损伤、血小板活化及血栓形成在不稳定性心绞痛的发病中具有重要意义。
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近年来，众多研究认为血栓形成是急性心肌梗死(AMI)的重要发病机制〔1〕，而内皮功能和血小板活化状态在血栓形成过程起关键作用〔2〕。不稳定性心绞痛(UAP)是AMI和心源性猝死的前期发展阶段，这种不稳定的心肌缺血综合征具有重要的临床意义。但目前对UAP和血栓形成的关系有许多不明之处。本研究通过观察UAP患者血浆vWF(von Willebrand因子，血管性假血友病因子、GMP-140(α颗粒膜蛋白-140)水平的变化，旨在探讨内皮及血小板活化功能在UAP中的作用，以期为UAP患者临床合理地改善内皮细胞功能及血小板功能治疗提供有益的资料。
1 材料和方法
1.1 对象 选择UAP17例，男13例，女4例，年龄67±9(62～80)岁，包括初发和恶化劳力型心绞痛10例、混合型心绞痛4例、梗死后心绞痛3例；稳定性心绞痛(SAP)25例，男16例，女9例，年龄61±7(60～83)岁。上述病例均符合WHO(1979)制定的冠心病诊断标准，且所有患者均测定CK-MB，以排除急性心肌梗死。正常对照组22例均为门诊健康体检者，均无冠心病、高血压、高血脂、糖尿病及出凝血疾病，年龄63±8(65～81)岁。各组对象测试前1 w均未使用阿斯匹林、潘生丁等影响血小板功能的药物。
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1.2 检测方法 正常对照组和SAP组患者清晨空腹采血一次，UAP组患者于急性发作的当日及入院后病情稳定后1 w各采血1次(以入院后心绞痛发作次数减少2/3，或疼痛时间显著缩短，基本上不用硝酸甘油片，24 h Holter监测心肌缺血发作次数减少50%以上，或ST段下移减少0.1 mV为病情稳定)。检测对象均于上午8点前空腹采血，采血前稍静息后取肘前静脉血2 ml，其中1 ml与0.13 mol/L枸橼酸钠按9∶1混合作测vWF之用，另1 ml与2%EDTA-Na2按9∶1混合作测GMP-140之用。采血后在30 min内低温离心分离血浆(4℃，4 000 r/min，15 min)，-70℃低温冰箱保存，一次性测定。血浆vWF、GMP-140采用ELISA双抗体夹心法，由福建太阳生物技术公司提供试剂盒，操作按试剂盒上说明进行。
1.3 统计学方法 数据以x±s表示，组间比较分别采用方差分析和q检验，自身比较采用配对t检验。
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UAP组患者急性阶段血浆vWF、GMP-140水平高于SAP组和对照组(P<0.01)，后两者之间无显著差异(P>0.05)。
17例UAP组中有2例发展为急性心肌梗死，其后追踪测其血浆vWF、GMP-140水平均持续明显增高，另15例UAP患者病情稳定后血浆vWF、GMP-140水平较急性阶段明显下降(P<0.05)，GMP-140水平与正常人组相比差异无显著性，血浆vWF仍高于正常人组(P<0.05)(表1)。
表1 三组血浆vWF、GMP-140水平变化 组别
例数
vWF(%)
GMP-140(ng/ml)
, 百拇医药
UAP组
急性阶段
17
167.94±29.321)2)
33.26±13.501)2)
病情稳定后
15
138.37±22.073)
20.29±4.84
SAP组
25
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108.42±31.57
17.73±6.58
正常对照组
22
101.87±22.80
15.2±6.5
注：与SAP组和对照组比较：1)P<0.01；与UAP病情稳定时比较：2)P<0.05；与正常对照组比较：3)P<0.05
3 讨 论
vWF是主要由内皮细胞合成一种多聚体糖蛋白，储存在内皮细胞Weibel-Palade小体中。vWF在调节血小板粘附受损血管内皮的过程中起关键作用，促进血小板粘附，血栓形成〔3〕。一般认为，vWF可作为反映血管内皮受损的一个指标，高水平vWF有助于预测血栓性疾病〔4〕，是AMI猝死的一危险因子〔5〕。GMP-140是存在于血小板α颗粒膜上和血管内皮细胞内Weibel-Palade小体中一种膜糖蛋白，以血小板膜GMP-140和血浆GMP-140二种形式存在。当血小板被激活或内皮细胞损伤时，GMP-140含量可升高。最近资料表明，与内皮细胞损伤因素相比，GMP-140血浆浓度更能直接反映血小板活化程度，是一种血小板激活时的特异分子标志物〔6〕。在血栓形成过程中，GMP-140作为粘附分子起始动作用，使血小板、中性粒细胞和内皮细胞相互作用，在动脉粥样硬化、炎症、血栓发生中起核心作用〔7〕。
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本研究表明，UAP患者急性阶段血浆vWF水平显著高于SAP组和正常对照组，说明UAP急性阶段存在内皮功能损害，表明血管内皮损伤在UAP的发生、发展过程中可能具有重要作用；UAP急性阶段时血浆GMP-140亦显著增高，表明UAP急性阶段存在血小板大量激活，使释放至血浆中的GMP-140显著升高，活化的血小板可释放各种代谢产物〔8〕，加重内皮损害。因此，UAP急性阶段在内皮损伤同时又存在血小板活化，两者相互作用，促进血栓形成。有研究报道GMP-140还能上调单核细胞表达组织因子〔9〕，进一步引起止血异常，加重不稳定性心绞痛的病理过程。在随后的进一步观察中发现，UAP组随病情的改善，血浆vWF、GMP-140也显著下降，GMP-140趋于正常，vWF值仍较正常人组为高，在急性阶段存在内皮严重受损，血小板活化功能亢进及止血异常状态，病情改善后，内皮损伤有所减轻，而SAP组患者vWF、GMP-140水平并不升高，提示其体内无严重内皮损伤及血小板大量激活。
总之，UAP患者存在内皮功能损伤及血小板活化功能亢进，促凝因素较一般心绞痛患者强烈，其发病可能是在动脉粥样硬化基础上有血栓因素参与，微血栓形成，导致冠脉不完全闭塞及不稳定的心肌缺血状态。通过血浆vWF、GMP-140测定，为UAP患者积极抗凝及改善内皮细胞功能的治疗，有效改善冠脉循环提供了有力的佐证。 作者简介：金露，女，30岁，主治医师，硕士，从事缺血性心脏病研究
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参考文献
1，Tanaka M,Suzuki A.Hemostatic abnormalities in acute myocardial infarction as detected by specific blood markers.Thromb Res，1994；76：286
2，Cines DB,Pollak ES,Buck CA et al.Endothelial cells in physiology and in the pathophysiology of vascular disorders.Blood，1998；91：3527
3，Mannucci PM.Platelet von Willebrand factor in inhierited and acquired bleeding disorders.Proc Natl Acad Sci USA，1995；92：2428
, 百拇医药
4，Mannucci PM.Von Willebrand Factor:A marker of endothelial damage?Arterioscler Thromb Vasc Biol，1998；18：1359
5，Jansson JH,Nilsson TK,Johnson O.Von Willebrand factor in plasma:A novel risk factor for recurrent myocardial infarction and death.Br Heart J，1991；66：351
6，Blann AD,Lip GYH,Beevers BG et al.Soluble P-selectin in atherosclerosis:A comparison with endothelial cell and platelet markers.Thromb Haemost，1997；77：1077
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7，Furie B,Furie BC.The molecular basis of platelet and endothelial cell interaction with neutrophils and monocytes:Role of P-selection and the P-selectin ligand,PSGL-1.Thromb Haemost，1995；74：224
8，Leo R,Pratico D,Iuliano L et al.Platelet activation by superoxide anion and hydroxyl radicals intrinsically generated by platelets that had undergone anoxia and than reoxygenated.Circulation，1997；95：885
9，Furie B,Furie BC.P-Selectin induction of tissue factor biosynthesis and expression.Haemostasis，1996；26(suppl 1)：60
收稿日期：1999-07-05
修回日期：2000-03-01, http://www.100md.com