多肿瘤抑制基因对卵巢癌细胞周期的影响
作者：刘淑娟 辛晓燕 王德堂
单位：刘淑娟(第四军医大学西京医院妇产科，陕西 西安 710033)；辛晓燕(第四军医大学西京医院妇产科，陕西 西安 710033)；王德堂(第四军医大学西京医院妇产科，陕西 西安 710033)
关键词：卵巢肿瘤；多肿瘤抑制基因；细胞周期；流式细胞术
第四军医大学学报000362 中图号：R737.31 文献标识码：B
文章编号：1000-2790(2000)03-S0036-01
0 引言
多肿瘤抑制基因1(MTS1)是人们发现的第一个直接参与细胞周 期调控的抑癌基因[1,2]，其编码蛋白为p16蛋白，它通过与细胞周期素竞争性结合细胞周期素依赖激酶并使之失活，阻止细胞由G1期进入S期，从而抑制细胞分裂以及向恶变发展. 在以往的研究[3]中我们构建了MTS1的真核表达载体并将其转入卵巢癌细胞. 我们进一步探讨了MTS1基因对卵巢癌细胞周期的影响.
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1 材料和方法
1.1 材料 DMEM培养基购自Gibco公司；胰蛋白酶购自Sigma公司；胎牛血清购自杭州四季青公司；人源性卵巢癌细胞系HO-8910由本实验室保存，经检测无p16蛋白表达；8910-p16细胞为HO-8910经MTS1转染并筛选后所得；8910-pcDNA3细胞为HO-8910经pcDNA3空载体转染并筛选后所得.
1.2 方法 取对数生长期的8910-p16细胞并制备单细胞悬液，1000 r.m in-1离心10 min， 0.01 mmol.L-1 PBS洗2次后加入-20℃预冷的700 mL.L-1乙醇固定 ，混匀，4℃过夜. 次日再次以0.01 mmol.L-1 PBS洗涤，并调整细胞数在5×108.L-1 ～1×109.L-1之间，之后取1 mL并加入PI(碘化丙啶) 300 μL染色30 min，350筛目过滤除去成团细胞，在ELITE-ESP型流式细胞仪上测定细胞周期，同时设HO-8910为空白对照和8910-pcDNA3为空载体对照.
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2 结果
经流式细胞仪检测显示， HO-8910中处于G1期和S期的细胞分别为69.8%和24.7%， 8910-pcDNA3细胞分别为72.1%和22.4%， 而8910-p16细胞则分别为75.8%和18.4%，说明经MTS1转染后受阻于G1期的细胞增多，同时S期的细胞相应减少(图1).
图1 卵巢癌细胞的细胞周期分析
A：HO-8910； B： 8910-pcDNA3； C： 8910-p16.
3 讨论
肿瘤的发生是一个多基因多步骤的过程，近年来有关肿瘤的发生发展及调控机制的研究表明，细胞恶变是细胞增殖负向调控因子的缺失和正向调控因子的活性异常增强所致. 多肿瘤抑制基因1由于其编码的p16蛋白可以通过参与细胞周期的调控而抑制细胞分裂以及向恶变发展，因此目前认为它在肿瘤的基因治疗方面可能存在着广泛的应用前景[4]. 我们在实验中比较了转染MTS1基因的卵巢癌细胞8910-p16与HO-8910,8910-pcDNA3细胞的细胞周期，发现经MTS1转染后细胞由G1期进入S期受到抑制，G1期细胞增多，而S期细胞比例相应减少，这与目前研究发现的MTS1的作用机制相符，也进一步证实将MTS1基因用于肿瘤基因治疗的可能性与可行性，为将来进行更深一步的研究打下了
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作者简介：刘淑娟(1973-)， 女(汉族)， 河北省石家庄市人. 医师， 硕士. Tel.(029)3375391基础.
参考文献：
[1] Kamb A, Gruis NA, Weaver-Feldhaus J et al. A cell cycle r egulator potentially involved in genesis of many tumor types [J]. Science, 1994; 264(5157): 436 -440.
[2] Nobori T, Miura K, Wu DJ et al. Deletions of the cyclin-depende nt kinase-4 inhibitor gene in multiple human cancers [J]. Nature, 1994; 368(6473): 753 -756.
[3] 刘淑娟,辛晓燕,胡大海et al. 抑癌基因MTS1真核表达载体的构建及其在 卵巢癌细胞系HO-8910中的表达[J]. 第四军医大学学报, 1999; 20(4): 348-353.
[4] Hunter T, Pines J. Cyclins and cancer II: Cyclin D and CDK inhibitor s come of age [J]. Cell, 1994; 79(4): 573-582.
收稿日期：1999-12-01
修回日期：2000-01-11, 百拇医药
单位：刘淑娟(第四军医大学西京医院妇产科，陕西 西安 710033)；辛晓燕(第四军医大学西京医院妇产科，陕西 西安 710033)；王德堂(第四军医大学西京医院妇产科，陕西 西安 710033)
关键词：卵巢肿瘤；多肿瘤抑制基因；细胞周期；流式细胞术
第四军医大学学报000362 中图号：R737.31 文献标识码：B
文章编号：1000-2790(2000)03-S0036-01
0 引言
多肿瘤抑制基因1(MTS1)是人们发现的第一个直接参与细胞周 期调控的抑癌基因[1,2]，其编码蛋白为p16蛋白，它通过与细胞周期素竞争性结合细胞周期素依赖激酶并使之失活，阻止细胞由G1期进入S期，从而抑制细胞分裂以及向恶变发展. 在以往的研究[3]中我们构建了MTS1的真核表达载体并将其转入卵巢癌细胞. 我们进一步探讨了MTS1基因对卵巢癌细胞周期的影响.
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1 材料和方法
1.1 材料 DMEM培养基购自Gibco公司；胰蛋白酶购自Sigma公司；胎牛血清购自杭州四季青公司；人源性卵巢癌细胞系HO-8910由本实验室保存，经检测无p16蛋白表达；8910-p16细胞为HO-8910经MTS1转染并筛选后所得；8910-pcDNA3细胞为HO-8910经pcDNA3空载体转染并筛选后所得.
1.2 方法 取对数生长期的8910-p16细胞并制备单细胞悬液，1000 r.m in-1离心10 min， 0.01 mmol.L-1 PBS洗2次后加入-20℃预冷的700 mL.L-1乙醇固定 ，混匀，4℃过夜. 次日再次以0.01 mmol.L-1 PBS洗涤，并调整细胞数在5×108.L-1 ～1×109.L-1之间，之后取1 mL并加入PI(碘化丙啶) 300 μL染色30 min，350筛目过滤除去成团细胞，在ELITE-ESP型流式细胞仪上测定细胞周期，同时设HO-8910为空白对照和8910-pcDNA3为空载体对照.
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2 结果
经流式细胞仪检测显示， HO-8910中处于G1期和S期的细胞分别为69.8%和24.7%， 8910-pcDNA3细胞分别为72.1%和22.4%， 而8910-p16细胞则分别为75.8%和18.4%，说明经MTS1转染后受阻于G1期的细胞增多，同时S期的细胞相应减少(图1).
图1 卵巢癌细胞的细胞周期分析
A：HO-8910； B： 8910-pcDNA3； C： 8910-p16.
3 讨论
肿瘤的发生是一个多基因多步骤的过程，近年来有关肿瘤的发生发展及调控机制的研究表明，细胞恶变是细胞增殖负向调控因子的缺失和正向调控因子的活性异常增强所致. 多肿瘤抑制基因1由于其编码的p16蛋白可以通过参与细胞周期的调控而抑制细胞分裂以及向恶变发展，因此目前认为它在肿瘤的基因治疗方面可能存在着广泛的应用前景[4]. 我们在实验中比较了转染MTS1基因的卵巢癌细胞8910-p16与HO-8910,8910-pcDNA3细胞的细胞周期，发现经MTS1转染后细胞由G1期进入S期受到抑制，G1期细胞增多，而S期细胞比例相应减少，这与目前研究发现的MTS1的作用机制相符，也进一步证实将MTS1基因用于肿瘤基因治疗的可能性与可行性，为将来进行更深一步的研究打下了
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作者简介：刘淑娟(1973-)， 女(汉族)， 河北省石家庄市人. 医师， 硕士. Tel.(029)3375391基础.
参考文献：
[1] Kamb A, Gruis NA, Weaver-Feldhaus J et al. A cell cycle r egulator potentially involved in genesis of many tumor types [J]. Science, 1994; 264(5157): 436 -440.
[2] Nobori T, Miura K, Wu DJ et al. Deletions of the cyclin-depende nt kinase-4 inhibitor gene in multiple human cancers [J]. Nature, 1994; 368(6473): 753 -756.
[3] 刘淑娟,辛晓燕,胡大海et al. 抑癌基因MTS1真核表达载体的构建及其在 卵巢癌细胞系HO-8910中的表达[J]. 第四军医大学学报, 1999; 20(4): 348-353.
[4] Hunter T, Pines J. Cyclins and cancer II: Cyclin D and CDK inhibitor s come of age [J]. Cell, 1994; 79(4): 573-582.
收稿日期：1999-12-01
修回日期：2000-01-11, 百拇医药