Vero细胞狂犬病疫苗的免疫原性研究
作者：陶小润 苏军英 王显军 郑大明 冯开军 黄捷通
单位：山东省卫生防疫站(济南，250014)
关键词：狂犬病；纯化Vero疫苗；中和抗体测定
中国人兽共患病杂志990103 摘 要 目的 研究Vero细胞狂犬病疫苗的安全性和免疫原性。方法 对11例暴露狂犬病病人进行常规5针注射Vero细胞狂犬病疫苗(PVRV)，在注射后的不同时间抽取静脉血，用小鼠中和试验(MNT)等方法检测病人体内的中和抗体水平。结果 显示3种不同的方法在第0、7天时的体内中和抗体均未达到保护水平(<0.5IU/ml)；14天时病人的中和抗体全部阳转，GMT为7.32IU/ml；28天时中和抗体达到最高值，GMT为14.58IU/ml；90天和180天的GMT分别为8.43和3.38IU/ml，阳性率仍为100%，抗体仍保持在较高水平。整个观察过程中无1例发性过敏反应。结论 PVRV具有良好的安全性和免疫原性。
, 百拇医药
STUDIES ON IMMUNOGENICITY OF PVRV
Tao Xiaorun Su Junying Wang Xianjun Zheng Daming Feng Kaijun Huang Jietong
(Shandong Provincial Health and Anti-epidemic Station,Jinan,50014)
ABSTRACT Aim To study the safety and the immunogenicity of PVRV.Methods 11 patients post-exposure to rabies were immunized by routine 5-dose PVRV.On different days after immunization,blood samples were collected and detected by means of MNT,RFFIT and ELISA for the neutralizing antibodies.Results It showed that on day 0 and 7,the antibody by the three methods did not reach the protective level(0.5IU/ml);on day 14,all the patients became positive to the neutralizing antibody,GMT was 7.32IU/ml;on day 90 and 180 the GMT was 8.43IU/ml and 3.38IU/ml respectively,and none of the blood samples changed to be negative.No allergic reaction was noticed during the observation.Conclusion It suggested that PVRV has high safety and immunogenicity which was generally acknowledged.
, 百拇医药
KEY WORDS Rabies PVRV MNT Antibody level
狂犬病是人类迄今尚未能征服的疾病之一，其病死率为100%。目前降低暴露病人发病率最关键有效的方法就是实施疫苗免疫。自80年代以来，我国一直生产、使用原代地鼠肾细胞狂犬疫苗(PHKCV)，此疫苗免疫后副反应大，时有免疫失败的病例报道〔1～3〕。WHO于1987年颁发Vero细胞生产人用纯化灭活疫苗规程，并推荐用Vero细胞大量生产狂犬疫苗〔4〕。此苗免疫效果好、安全稳定，随着经济技术的发展，它将取代PHKCV〔1，5〕。目前PVRV在我国尚处于研究阶段，不能生产，需要进口。本试验目的就是要系统了解PVRV的免疫原性、安全性及免疫持久性。结果报告如下。
1 材料与方法
1.1 对象选择和标本收集 收集门诊重度咬伤病例(WHOⅢ度)，按5针常规免疫程序，在病人上臂三角肌区注射PVRV(法国巴斯德公司生产，批号：Lot Lo890,0.5ml/l针剂)，在有效期内使用。分别于第0、7、14、28天注射疫苗前和90、180天时抽取病人静脉血，收集血清冷冻备用。同时观察病人的过敏反应。
, http://www.100md.com
1.2 试验方法
1.2.1 小鼠中和试验(MNT) 选用CVS株9代毒种。免前血清1∶5稀释，免后血清1∶20、1∶60、1∶180、1∶540稀释。标准品冻干“9602标”由武汉生物所基因室提供，6.7IU/支，冻干“90RS”由北京检定所提供26.31IU/支，标准品1∶5稀释，与等量病毒混合成1∶180、1∶240、1∶720、1∶2160后置37℃水浴箱中和1h。选用10～12g健康小鼠，每只脑腔接种0.03ml中和物，每稀释度接种4只，病毒滴定，将中和病毒依次稀释成1/10、1/100、1/1000注射小鼠，中和毒在32～316LD50时，试验成立。每天观察小鼠发病及死亡情况，3天前死亡为非特异性死亡。最后计算血清效价，以国际单位(IU/ml)表示〔6〕。
1.2.2 快速荧光灶抑制试验(RFFIT) 制备和滴定攻击病毒(CVS株)，将固定量的病毒与系列稀释待测血清一起温育，包括已知滴度的参考血清。然后加入敏感细胞悬液，经24h温育，细胞单层用丙酮固定，用荧光标记的NP抗体染色，以检测未被中和的病毒的存在(荧光灶)。
, 百拇医药
1.2.3 酶联免疫吸附试验(ELISA) ELISA试剂盒由武汉生研所提供，批号19970424，效期内使用，包被抗原为CVS株，按说明书操作。
2 结 果
2.1 病人观察 共收集有效病例11例，整个试验观察过程中无1例发生过敏反应或死亡，共收集病人静脉血66份。
2.2 试验结果 用3种不同的方法测得病人免前0天中和抗体，水平均极低，几乎为0；免后7天病人只有1例中和抗体达到保护水平(WHO规定抗体最低保护水平为0.5IU/ml)；14天MNT和REFIT(由于试剂不足，部分样本的RFFIT最高滴度仅做到1.5IU/ml，未继续稀释)结果均达到保护水平，ELISA阳性率为81.8%；28天病人中和抗体均达到高值，GMT为14.58 IU/ml；90和180天病人的中和抗体阳性率仍为100%，并保持在较高水平(见表1及图1)。
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表1三种不同实验方法测定免疫后不同时间的病人血清保护性抗体水平
Table 1Protective level of Patients after immunization with three methods in different days 序号
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图1 11例病人免后不同时间的中和抗体水平(GMT)
Fig.1 Neutralizing antibody level of 11 patients after immunization
3 讨论与分析
, 百拇医药
自1885年Passteur最早研制出狂犬病毒神经组织疫苗以来，狂犬疫苗在预防人、畜狂犬病中发挥了巨大的作用，同时其生产技术也得到了迅速的发展。PHKCV以其成本低、技术条件要求不高，免疫效果较好等特点，被我国广泛使用，取得了一定的效果，尤其是近两年改为浓缩疫苗以来，免疫效价明显提高，但同时也带来了许多严重问题，由于未经纯化，注射剂量仍为2ml,接种后副反应也明显增强〔3〕。有人曾做观察，浓缩疫苗疼痛占1.5%，发热占1%，荨麻疹1%，全身症状6%〔7〕。有报道总的副反应率可达30%。另外，PHKCV的稳定性、中和抗体产生的时间和滴度都不是太理想，即疫苗的效期短，其抗体产生晚，消失早，阳转率低。曾有报道：免后第15天阳转率为51.9%，180天的阴转率为30%〔8〕；也有人报道，1.3IU疫苗的阳转率为50%～60%，2.5IU疫苗的阳转率为88%～97%〔2〕。并时有全程免疫失败的病例报告〔2，7〕。基于以上原因，加速开发研制一种更加有效，纯度更高，安全、稳定的狂犬疫苗已成为当务之急，有关专家提出选择使用疫苗的标准应是：用量小，反应轻，接种次数少、接种后能快速(一般7～10天)产生中和抗体(有效的中和抗体水平应为>0.51IU/ml，而不是用ELISA方法测出的抗体)，并持续时间较长〔3〕。WHO推荐用Vero细胞大量生产狂犬疫苗，它是用适应WI-38细胞的狂犬病固定毒PM株感染在载体上培养的Vero细胞、丙内酯灭活，进一步纯化制备而成，它比原代细胞制备上更有利于发展微载体大罐培养，更适宜大规模的批量生产。PVRV具有良好的耐受性、很强的免疫原性及安全性，其效期长，过敏反应极少，中和抗体在14天(接种过3针)时全部达0.51IU以上〔5，9〕。这些报道和我们的试验结果一致。从本试验结果中可见，免前中和抗体均极低，说明病人在此之前均未接种过狂犬疫苗，14天病人血清中和抗体均达到保护水平，90天和180天病人的中和抗体阳性率仍为100%。由于免疫反应的个体差异，同一时间每个病人所产生的中和抗体水平差异很大。
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目前国内对PVRV的免疫效果、安全性等进行全面系统研究的报道还很少，大多数是通过ELISA法对其和PHKCV的抗体水平做比较，一般得出的结论是两者效果无明显差异，有的甚至是PHKCV明显优于PVRV，作者认为仅仅通过ELISA测定抗体就做出这样的结论是不够妥当的，因为ELISA等方法所测得的抗体不是保护性的中和抗体，而是伴随抗体，其结果受很多因素的影响，尤其是不同的病毒株包被抗原，我们曾做过试验，用CVS株(国际标准攻毒株)和aG株(国内疫苗株)分别进行包被，对免疫不同的疫苗所检测的ELISA结果差异非常显著。目前WHO推荐用经典的MNT和RFFIT结果来评价狂犬疫苗的保护效果。国内专家也曾提出“有效的中和抗体，而不是用ELISA方法测出的抗体”，所不同的是MNT是动物体内中和试验，而RFFIT则是体外中和试验。
PVRV在我国正处于研究阶段，不能批量生产，尚需进口，加上各种税费，其价格昂贵。可喜的是，我国有关部门及专家已把浓缩纯化Vero细胞疫苗的研制列入95攻关和卫生部重点课题中〔3〕。我们本次试验的目的，就是在于系统了解暴露狂犬病后，接种PVRV的免疫原性、安全性及免疫持久性，为PVRV在我国进一步研制、使用提供科学依据。但由于经费不足等原因，试验中检测样本的数量偏少，尚需进一步深入研究。
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4 参考文献
1.朱家鸿.狂犬病毒疫苗的现状与发展.全国狂犬病监测与控制研讨会资料，烟台：1997.
2.陈阳，等.提高狂犬病疫苗免疫效果的关键.中国人兽共患病杂志，1995，11(3)：56.
3.俞永新.人和动物狂犬病防制研究进展.全国狂犬病监测与控制研讨会资料，1997.
4.高鸿瑞，等.狂犬病病毒Vero细胞适应株的建立及其应用于疫苗生产的可行性探讨.微生物学免疫学进展，1995，23(3)：129.
5.俞永新.第七届美洲狂犬病控制和研究进展国际会议简介.中国生物制品学杂志，1997，10(2)：65.
6.卫生部生物制品标准化委员会.中国生物制品规程.1995，201.
7.李军，等.人用浓缩狂犬病疫苗人体反应观察.中国人兽共患病杂志，1997，13(4)：67.
8.陈爱贞，等.不同剂量免疫后血清学效果观察.中华流行病学杂志，1996，17(3)139.
9.Nicholson KG,et al.Laboratory techniques in rabies.WHO,Geneva,1996,271.
1998年2月28日收稿 1998年8月13日修回, 百拇医药
单位：山东省卫生防疫站(济南，250014)
关键词：狂犬病；纯化Vero疫苗；中和抗体测定
中国人兽共患病杂志990103 摘 要 目的 研究Vero细胞狂犬病疫苗的安全性和免疫原性。方法 对11例暴露狂犬病病人进行常规5针注射Vero细胞狂犬病疫苗(PVRV)，在注射后的不同时间抽取静脉血，用小鼠中和试验(MNT)等方法检测病人体内的中和抗体水平。结果 显示3种不同的方法在第0、7天时的体内中和抗体均未达到保护水平(<0.5IU/ml)；14天时病人的中和抗体全部阳转，GMT为7.32IU/ml；28天时中和抗体达到最高值，GMT为14.58IU/ml；90天和180天的GMT分别为8.43和3.38IU/ml，阳性率仍为100%，抗体仍保持在较高水平。整个观察过程中无1例发性过敏反应。结论 PVRV具有良好的安全性和免疫原性。
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STUDIES ON IMMUNOGENICITY OF PVRV
Tao Xiaorun Su Junying Wang Xianjun Zheng Daming Feng Kaijun Huang Jietong
(Shandong Provincial Health and Anti-epidemic Station,Jinan,50014)
ABSTRACT Aim To study the safety and the immunogenicity of PVRV.Methods 11 patients post-exposure to rabies were immunized by routine 5-dose PVRV.On different days after immunization,blood samples were collected and detected by means of MNT,RFFIT and ELISA for the neutralizing antibodies.Results It showed that on day 0 and 7,the antibody by the three methods did not reach the protective level(0.5IU/ml);on day 14,all the patients became positive to the neutralizing antibody,GMT was 7.32IU/ml;on day 90 and 180 the GMT was 8.43IU/ml and 3.38IU/ml respectively,and none of the blood samples changed to be negative.No allergic reaction was noticed during the observation.Conclusion It suggested that PVRV has high safety and immunogenicity which was generally acknowledged.
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KEY WORDS Rabies PVRV MNT Antibody level
狂犬病是人类迄今尚未能征服的疾病之一，其病死率为100%。目前降低暴露病人发病率最关键有效的方法就是实施疫苗免疫。自80年代以来，我国一直生产、使用原代地鼠肾细胞狂犬疫苗(PHKCV)，此疫苗免疫后副反应大，时有免疫失败的病例报道〔1～3〕。WHO于1987年颁发Vero细胞生产人用纯化灭活疫苗规程，并推荐用Vero细胞大量生产狂犬疫苗〔4〕。此苗免疫效果好、安全稳定，随着经济技术的发展，它将取代PHKCV〔1，5〕。目前PVRV在我国尚处于研究阶段，不能生产，需要进口。本试验目的就是要系统了解PVRV的免疫原性、安全性及免疫持久性。结果报告如下。
1 材料与方法
1.1 对象选择和标本收集 收集门诊重度咬伤病例(WHOⅢ度)，按5针常规免疫程序，在病人上臂三角肌区注射PVRV(法国巴斯德公司生产，批号：Lot Lo890,0.5ml/l针剂)，在有效期内使用。分别于第0、7、14、28天注射疫苗前和90、180天时抽取病人静脉血，收集血清冷冻备用。同时观察病人的过敏反应。
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1.2 试验方法
1.2.1 小鼠中和试验(MNT) 选用CVS株9代毒种。免前血清1∶5稀释，免后血清1∶20、1∶60、1∶180、1∶540稀释。标准品冻干“9602标”由武汉生物所基因室提供，6.7IU/支，冻干“90RS”由北京检定所提供26.31IU/支，标准品1∶5稀释，与等量病毒混合成1∶180、1∶240、1∶720、1∶2160后置37℃水浴箱中和1h。选用10～12g健康小鼠，每只脑腔接种0.03ml中和物，每稀释度接种4只，病毒滴定，将中和病毒依次稀释成1/10、1/100、1/1000注射小鼠，中和毒在32～316LD50时，试验成立。每天观察小鼠发病及死亡情况，3天前死亡为非特异性死亡。最后计算血清效价，以国际单位(IU/ml)表示〔6〕。
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2 结 果
2.1 病人观察 共收集有效病例11例，整个试验观察过程中无1例发生过敏反应或死亡，共收集病人静脉血66份。
2.2 试验结果 用3种不同的方法测得病人免前0天中和抗体，水平均极低，几乎为0；免后7天病人只有1例中和抗体达到保护水平(WHO规定抗体最低保护水平为0.5IU/ml)；14天MNT和REFIT(由于试剂不足，部分样本的RFFIT最高滴度仅做到1.5IU/ml，未继续稀释)结果均达到保护水平，ELISA阳性率为81.8%；28天病人中和抗体均达到高值，GMT为14.58 IU/ml；90和180天病人的中和抗体阳性率仍为100%，并保持在较高水平(见表1及图1)。
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表1三种不同实验方法测定免疫后不同时间的病人血清保护性抗体水平
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图1 11例病人免后不同时间的中和抗体水平(GMT)
Fig.1 Neutralizing antibody level of 11 patients after immunization
3 讨论与分析
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自1885年Passteur最早研制出狂犬病毒神经组织疫苗以来，狂犬疫苗在预防人、畜狂犬病中发挥了巨大的作用，同时其生产技术也得到了迅速的发展。PHKCV以其成本低、技术条件要求不高，免疫效果较好等特点，被我国广泛使用，取得了一定的效果，尤其是近两年改为浓缩疫苗以来，免疫效价明显提高，但同时也带来了许多严重问题，由于未经纯化，注射剂量仍为2ml,接种后副反应也明显增强〔3〕。有人曾做观察，浓缩疫苗疼痛占1.5%，发热占1%，荨麻疹1%，全身症状6%〔7〕。有报道总的副反应率可达30%。另外，PHKCV的稳定性、中和抗体产生的时间和滴度都不是太理想，即疫苗的效期短，其抗体产生晚，消失早，阳转率低。曾有报道：免后第15天阳转率为51.9%，180天的阴转率为30%〔8〕；也有人报道，1.3IU疫苗的阳转率为50%～60%，2.5IU疫苗的阳转率为88%～97%〔2〕。并时有全程免疫失败的病例报告〔2，7〕。基于以上原因，加速开发研制一种更加有效，纯度更高，安全、稳定的狂犬疫苗已成为当务之急，有关专家提出选择使用疫苗的标准应是：用量小，反应轻，接种次数少、接种后能快速(一般7～10天)产生中和抗体(有效的中和抗体水平应为>0.51IU/ml，而不是用ELISA方法测出的抗体)，并持续时间较长〔3〕。WHO推荐用Vero细胞大量生产狂犬疫苗，它是用适应WI-38细胞的狂犬病固定毒PM株感染在载体上培养的Vero细胞、丙内酯灭活，进一步纯化制备而成，它比原代细胞制备上更有利于发展微载体大罐培养，更适宜大规模的批量生产。PVRV具有良好的耐受性、很强的免疫原性及安全性，其效期长，过敏反应极少，中和抗体在14天(接种过3针)时全部达0.51IU以上〔5，9〕。这些报道和我们的试验结果一致。从本试验结果中可见，免前中和抗体均极低，说明病人在此之前均未接种过狂犬疫苗，14天病人血清中和抗体均达到保护水平，90天和180天病人的中和抗体阳性率仍为100%。由于免疫反应的个体差异，同一时间每个病人所产生的中和抗体水平差异很大。
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目前国内对PVRV的免疫效果、安全性等进行全面系统研究的报道还很少，大多数是通过ELISA法对其和PHKCV的抗体水平做比较，一般得出的结论是两者效果无明显差异，有的甚至是PHKCV明显优于PVRV，作者认为仅仅通过ELISA测定抗体就做出这样的结论是不够妥当的，因为ELISA等方法所测得的抗体不是保护性的中和抗体，而是伴随抗体，其结果受很多因素的影响，尤其是不同的病毒株包被抗原，我们曾做过试验，用CVS株(国际标准攻毒株)和aG株(国内疫苗株)分别进行包被，对免疫不同的疫苗所检测的ELISA结果差异非常显著。目前WHO推荐用经典的MNT和RFFIT结果来评价狂犬疫苗的保护效果。国内专家也曾提出“有效的中和抗体，而不是用ELISA方法测出的抗体”，所不同的是MNT是动物体内中和试验，而RFFIT则是体外中和试验。
PVRV在我国正处于研究阶段，不能批量生产，尚需进口，加上各种税费，其价格昂贵。可喜的是，我国有关部门及专家已把浓缩纯化Vero细胞疫苗的研制列入95攻关和卫生部重点课题中〔3〕。我们本次试验的目的，就是在于系统了解暴露狂犬病后，接种PVRV的免疫原性、安全性及免疫持久性，为PVRV在我国进一步研制、使用提供科学依据。但由于经费不足等原因，试验中检测样本的数量偏少，尚需进一步深入研究。
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4 参考文献
1.朱家鸿.狂犬病毒疫苗的现状与发展.全国狂犬病监测与控制研讨会资料，烟台：1997.
2.陈阳，等.提高狂犬病疫苗免疫效果的关键.中国人兽共患病杂志，1995，11(3)：56.
3.俞永新.人和动物狂犬病防制研究进展.全国狂犬病监测与控制研讨会资料，1997.
4.高鸿瑞，等.狂犬病病毒Vero细胞适应株的建立及其应用于疫苗生产的可行性探讨.微生物学免疫学进展，1995，23(3)：129.
5.俞永新.第七届美洲狂犬病控制和研究进展国际会议简介.中国生物制品学杂志，1997，10(2)：65.
6.卫生部生物制品标准化委员会.中国生物制品规程.1995，201.
7.李军，等.人用浓缩狂犬病疫苗人体反应观察.中国人兽共患病杂志，1997，13(4)：67.
8.陈爱贞，等.不同剂量免疫后血清学效果观察.中华流行病学杂志，1996，17(3)139.
9.Nicholson KG,et al.Laboratory techniques in rabies.WHO,Geneva,1996,271.
1998年2月28日收稿 1998年8月13日修回, 百拇医药