应用PCR对散发性脑炎进行病毒学检查的临床价值
作者：赵忠信
单位：赵忠信(中国航空工业中心医院)
关键词：
北京医学000238 多年来对于散发性脑炎的发病原因一直不甚明了，国内外有关这方面的报道也很少，为了探讨其发病原因，我们对34例散脑患者的脑脊液进行了病毒学分析，采用PCR方法扩增HSV、EBV和CMV三种病毒的DNA保守序列，现报告如下。
材料与方法
1.研究对象：在临床上拟诊为散发性脑炎的患者共34例，所有病例均为我院、山东省立医院及山东医科大学附属医院的住院病人。其中男21例，女13例，年龄为15～41岁，根据临床发病特征确诊。
2.实验方法：①DNA提取：取患者脑脊液10μ1，加入15μ1DNA提取液后混匀，置56℃水浴20分钟，再次混匀后置100℃状态下10分钟，最后冷至室温后离心，取上清液待检。②PCR扩增：PCR反应体系共20μ1，其中DNA扩增液15μ1，待检DNA样本5μ1，混匀后置98℃预处理5分钟，然后加Taq DNA聚合酶1U，再加20μ1消毒液体石蜡覆盖，最后进行PCR扩增。其中92℃30秒、55℃30秒、72℃60秒，共35周期，最后72℃保温5分钟。③琼脂糖凝胶电泳：取扩增产物10～20μ1置2%琼脂糖电泳20分钟(100V)，经溴乙锭染色10分钟，在紫外灯下观察结果。
, 百拇医药
结 果
本组34例通过PCR扩增，发现有3例HSV阳性、8例EBV阳性、11例CMV阳性，其特异性扩增产物分别为453bp、154bp、300bp。另有1例为EBV和CMV双重病毒的感染。这34例病人的治疗效果大多数很好，经降颅压及积极的对症、支持处理后，除1例HSV感染及1例EBV和CMV双重病毒感染的病人死亡外，均治愈出院。
讨 论
1.关于散发性脑炎的病因学分析：对于散发性脑炎的发病原因，目前仍不十分清楚，近年来国内外也未见有关这方面的报道，因其临床特点并不具有特异性，所以在临床上散发性脑炎又称为散发性病毒性脑炎、非特异性脑炎、非典型性脑炎等。1996年济南地区短期暴发散发性脑炎，我们采用PCR方法对34例患者进行了HSV、EBV和CMV三种病毒的检测，发现病毒感染的阳性率为67.6%，并且有1例HSV阳性及1例EBV和CMV双阳性的患者死亡，说明HSV和双重病毒感染是散发性脑炎的主要致死原因。我们认为，对临床拟诊为散发性脑炎的患者应进行相关病毒学的检查，这将对散脑的病因学分析及确定诊断有重要意义。
, 百拇医药
2.应用PCR方法对散发性脑炎进行早期诊断的临床价值：因为散发性脑炎在早期临床并无特异性，所以早期诊断并不容易。以往的方法是血清抗体的检测，但抗体升高一般要在病毒感染后第3～4周，且感染病毒不仅可在神经系统长期潜伏，也能在淋巴细胞内持续存在，许多因素均可使抗体激活，导致血清抗体滴度升高，因此抗体检测不一定能证明脑内病毒感染。反之，血中无抗体反应也不能轻易否定脑内病毒感染。血清抗体只是病毒感染的间接反应，而不是直接的证据。脑活检虽是病因诊断的可靠方法，但往往也只能做到追溯诊断，因此更达不到早期诊断的目的。
PCR是体外酶促合成特异性DNA片断的方法，特异性比较强，并且有着快速、简便、准确率高等优点，现已广泛应用于临床。目前已有许多应用该方法检测病毒感染的报道。我们认为对于散发性脑炎的患者，采用PCR方法进行相关病毒学的检查，不仅可以做到早期诊断，而且也为治疗提供了客观的依据。
(收稿：1998-06-15 修回：1998-11-09), http://www.100md.com
单位：赵忠信(中国航空工业中心医院)
关键词：
北京医学000238 多年来对于散发性脑炎的发病原因一直不甚明了，国内外有关这方面的报道也很少，为了探讨其发病原因，我们对34例散脑患者的脑脊液进行了病毒学分析，采用PCR方法扩增HSV、EBV和CMV三种病毒的DNA保守序列，现报告如下。
材料与方法
1.研究对象：在临床上拟诊为散发性脑炎的患者共34例，所有病例均为我院、山东省立医院及山东医科大学附属医院的住院病人。其中男21例，女13例，年龄为15～41岁，根据临床发病特征确诊。
2.实验方法：①DNA提取：取患者脑脊液10μ1，加入15μ1DNA提取液后混匀，置56℃水浴20分钟，再次混匀后置100℃状态下10分钟，最后冷至室温后离心，取上清液待检。②PCR扩增：PCR反应体系共20μ1，其中DNA扩增液15μ1，待检DNA样本5μ1，混匀后置98℃预处理5分钟，然后加Taq DNA聚合酶1U，再加20μ1消毒液体石蜡覆盖，最后进行PCR扩增。其中92℃30秒、55℃30秒、72℃60秒，共35周期，最后72℃保温5分钟。③琼脂糖凝胶电泳：取扩增产物10～20μ1置2%琼脂糖电泳20分钟(100V)，经溴乙锭染色10分钟，在紫外灯下观察结果。
, 百拇医药
结 果
本组34例通过PCR扩增，发现有3例HSV阳性、8例EBV阳性、11例CMV阳性，其特异性扩增产物分别为453bp、154bp、300bp。另有1例为EBV和CMV双重病毒的感染。这34例病人的治疗效果大多数很好，经降颅压及积极的对症、支持处理后，除1例HSV感染及1例EBV和CMV双重病毒感染的病人死亡外，均治愈出院。
讨 论
1.关于散发性脑炎的病因学分析：对于散发性脑炎的发病原因，目前仍不十分清楚，近年来国内外也未见有关这方面的报道，因其临床特点并不具有特异性，所以在临床上散发性脑炎又称为散发性病毒性脑炎、非特异性脑炎、非典型性脑炎等。1996年济南地区短期暴发散发性脑炎，我们采用PCR方法对34例患者进行了HSV、EBV和CMV三种病毒的检测，发现病毒感染的阳性率为67.6%，并且有1例HSV阳性及1例EBV和CMV双阳性的患者死亡，说明HSV和双重病毒感染是散发性脑炎的主要致死原因。我们认为，对临床拟诊为散发性脑炎的患者应进行相关病毒学的检查，这将对散脑的病因学分析及确定诊断有重要意义。
, 百拇医药
2.应用PCR方法对散发性脑炎进行早期诊断的临床价值：因为散发性脑炎在早期临床并无特异性，所以早期诊断并不容易。以往的方法是血清抗体的检测，但抗体升高一般要在病毒感染后第3～4周，且感染病毒不仅可在神经系统长期潜伏，也能在淋巴细胞内持续存在，许多因素均可使抗体激活，导致血清抗体滴度升高，因此抗体检测不一定能证明脑内病毒感染。反之，血中无抗体反应也不能轻易否定脑内病毒感染。血清抗体只是病毒感染的间接反应，而不是直接的证据。脑活检虽是病因诊断的可靠方法，但往往也只能做到追溯诊断，因此更达不到早期诊断的目的。
PCR是体外酶促合成特异性DNA片断的方法，特异性比较强，并且有着快速、简便、准确率高等优点，现已广泛应用于临床。目前已有许多应用该方法检测病毒感染的报道。我们认为对于散发性脑炎的患者，采用PCR方法进行相关病毒学的检查，不仅可以做到早期诊断，而且也为治疗提供了客观的依据。
(收稿：1998-06-15 修回：1998-11-09), http://www.100md.com