补阳还五汤对TNFa诱导血管内皮细胞释放vWF及表达组织因子的影响
作者：尚改萍 文志斌 李俊成 汉建忠 熊石龙 贺石林 肖振军 周春生
单位：尚改萍(生理教研室止血与血栓研究室 长沙 410078)；文志斌(生理教研室止血与血栓研究室 长沙 410078)；李俊成(生理教研室止血与血栓研究室 长沙 410078)；汉建忠(生理教研室止血与血栓研究室 长沙 410078)；熊石龙(生理教研室止血与血栓研究室 长沙 410078)；贺石林(生理教研室止血与血栓研究室 长沙 410078)；肖振军(附属湘雅医院 长沙 410008)；周春生(附属湘雅医院 长沙 410008)
关键词：黄芪；川芎；中药；汤剂；肿瘤坏死因子；内皮细；胞；von；Willebrand；因子
湖南医科大学学报000211[摘要] 目的：观察补阳还五汤对TNFa诱导血管内皮细胞释放vWF和表 达组织因子的影响。方法：对传代培养的新生牛主动脉内皮细胞4～8代分别给予不同处理，取上清液测vWF， 取细 胞冻融液测定组织因子活性。结果：①与对照组相比, TNFa促进内皮细胞表达组织因子(12. 79±2.59 vs. 4.69±0.83，P<0.01)，并呈剂量依赖性(r=0.971, 0～500 U.ml-1)，补阳还五汤抑制其效应(P<0.01)；②与对照组相比较, TNFa 促进 vWF 释放(13.82±4.76 vs. 6.24 ± 2.84 , P<0.01), 补阳还五汤抑制其作用(P <0.01)。结论： 补阳还五汤能抑制TNFα诱导血管内皮细胞表达组织因子和释放vWF。
, 百拇医药
[中图分类号] R285.5 [文献标识码] A [文章编号] 1000-5625(2000)02-0129-03
Effects of Buyang huanwu decoction on the release of vWF and the expression of tissue factor induced by tumor necrosis factor α in cultured bovine aortic endothelial cells
SHANG Gai-ping, WEN Zhi-bin, LI Jun-cheng, et al.
Department of Physiology, Hunan Medical University(Changsha 4100 78)
, 百拇医药
[Abstract] Objective: To study the effects of Buyang huanwu decoction (BHD) o n the release of von Willebrand factor(vWF) and the expression of tissue facto r(TF) activity induced by tumor necrosis factor α (TNFα) in cultured bovine ao rtic endothelial cells (BAECs). Methods: BAECs from neonatal cox were cultured and 4～8 passages were used. Cells were incubated for 8 hours after addition of different treatments. The supernatant was used to measure vWF and BAECs lysate to determine TF activity. Results:① Compared with the control, TNFα enhanced the expression of TF activity(12.79±2.59 vs. 4.69±0.83,P<0.01) and the effects were in dose-dependent manner(r=0.9712,P<0.01)； BHD inhibited the effe cts of T NFα(P<0.01). ②Compared with the control, TNFα promoted the release of vWF fro m endothelial cells (13.28±4.76 vs. 6.42±2.84,P<0.01) and BHD inhibite d the effect of TNFα(P<0.01). Conclusion: BHD can inhibit the expression of T Fand the release of vWF induced by TNFα.
, 百拇医药
[Key words] astragalus; angelica; Chinese materia medica; decoction; tumor necrosis factor α; von Willebrand factor; endothelium
血管内皮细胞能分泌多种生物活性物质，其功能失调与多种疾病的发生密切相关[1] 。新近 研究表明，组织因子(tissue factor, TF)是外源性凝血途径的启动因子，在正常生理性凝 血反应及病理性血栓形成中起重要作用[2，3]。内皮细胞正常情况下并不表达TF， 但在某些 病理状态及凝血酶、IL-1和肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor α, TNFα)作用下却 大量表达，这已成为目前国外研究的热点，但国内报道极少。vWF也是血管内皮细胞分泌的 活性物质之一，有学者认为von Willebrand factor(vWF)分泌增多可作为血管内皮细胞受 损的标志物[2，4]。TNFα是体内重要的炎症介质之一，对血管内皮细胞具有明显 的损伤作 用，它可促进血管内皮细胞表达TF和释放vWF。补阳还五汤为祖国医学中的经典方剂，具活 血化瘀之功效，为临床所广泛应用。现代医学研究表明，补阳还五汤具有抗凝、抗炎、保护 血管内皮细胞之功能[5]，但与上述诸因素关系如何尚未见报道。因此，笔者观察 了补阳还 五汤对TNFα所诱导的牛主动脉内皮细胞释放vWF和表达TF的影响，现将结果报告如下。
, 百拇医药
1 材料与方法
1.1 材料 D-Hank's液pH7.2～7.4，高压蒸气灭菌，4℃冰箱保存。胰蛋白 酶和M199培养基系S igma公司产品。小牛血清系杭州四季青生物制品研究所产品。凝血酶、兔脑凝血活酶来自中 国医学科学院血液学研究所。兔FⅦ相关抗原抗血清和冻干羊抗兔IgG荧光抗体购自卫生部上 海生物制品研究所。vWF放免试剂盒购自苏州医学院。TF单抗由美国Morrissey J H教授惠赠 。补阳还五汤提取液，依原方组成，各组分(黄芪、当归、红花、桃仁、赤芍、地龙、川芎)购自附属湘雅医院药房，常规煎煮3次，合并煎液，然后用95%酒精提取后过滤浓缩成注射 液，pH7.2～7.4，消毒备用。TNFα系北京邦定生物医学公司产品。
1.2 方法
1.2.1 牛主动脉内皮细胞(BAEC)培养[6] 取无菌的新生牛主动脉，结扎各分支，将0.25%的胰蛋白酶灌入主动脉扎紧两头，37℃消化15 min。收集消化液并以小牛血清灭活胰蛋白酶，离心，收集所得细胞，置培养瓶内进行原代培养。4～5 d细胞生长汇合后传代，将4～8 代细胞经台盼兰染色，拒染率>95%者(表明活细胞占细胞总数的95%以上)接种至24孔培养板(每孔细胞约0.5×105 ml-1)，2～3 d细胞汇合后进行实验。
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1.2.2 内皮细的胞鉴定 用间接荧光免疫法[6]。选生 长良好的培养细胞随机分为两组，其中一组为实验组，一组为空白对照组; 另取一组成纤维 细胞作阴性对照。以上3组细胞用95%酒精固定5 min，再用0.01 mol.L-1的PBS(pH= 7.5)洗3遍，吹干。实验组和成纤维细胞阴性对照组加兔FⅦ相关抗原(vWF)抗血清(1：20稀释) ，空白对照组加等量PBS，37℃温浴30 min，PBS洗3次，每次5 min，吹干。3组均加羊抗兔I gG荧光抗体(1：8稀释)，37℃温浴30 min，PBS洗3次，每次5 min，吹干，立即荧光显微 镜下观察，内皮细胞因含有特异性vWF将显黄色。
1.2.3 vWF的测定 按试剂盒操作说明进行。
1.2.4 TF活性检测 各组24孔板中加药或未加药的细胞于37℃，5%C O2条件下培养8 h，弃上清，用足量D-Hank's液反复清洗3次后，每孔加入0.5 ml D-Hank's液，细胞经 反 复冻融3次后，制成细胞冻融液。TF活性检测用一期凝血法[6]，以PT为14 s的兔脑 凝血活酶 为TF标准液，其80倍稀释液活性定为100，以血浆凝固时间为横轴，标准液TF活性的对数为 纵轴建立标准曲线，待测细胞冻融液的TF活性即可根据其凝固时间求得。
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1.2.5 TF抗原特异性鉴定 将不同浓度的TF单抗直接加入细胞冻融液中，若 细胞冻融液中的促凝活性可被抗体中和，则说明其促凝活性来自于TF，反之则说明其促凝活 性不是来自于TF。
1.3 统计学处理 测定结果以均数±标准差(
±s)表示，用方 差分析，组间两两比较用q检验。
2 结 果
2.1 内皮细胞的鉴定 荧光显微镜下实验组B AECs呈现强荧光(黄绿色荧光着色)，核与胞浆界限清楚，而空白对照组和阴性对照组均无 荧光。
2.2 TF活性特异性的鉴定 在内皮细胞冻融液中加入不同浓度的TF单抗 后，其促凝活性随着TF单 抗增多而逐渐减弱，直至其抗凝活性被TF单抗完全中和；当加入非特异性IgG后，则对TF的 促凝活性无影响(表1)。
, 百拇医药
表1 TF单抗对TF活性的影响 单抗浓度
(μg.ml-1)
细胞冻融液
标准TF液(1∶320)
TF单抗
非特异性单抗
TF单抗
非特异性单抗
0.00
20.22
20.22
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20.75
20.75
0.25
5.53
20.22
4.06
20.22
0.50
1.39
21.28
1.39
20.75
1.00
, 百拇医药
1.59
19.69
1.44
20.22
2.00
1.39
20.75
1.47
19.69
以上数据均为3次测试的均值
2.3 补阳还五汤对TNFα诱导BAEC 释放vWF的影响 培养8 h后，与对照组 相比，TNFα促进BAECs释放vWF(P<0.01)；补阳还五汤能明显抑制TNFα的作用(P <0.01)(表2)。
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2.4 补阳还五汤对TNFα诱导BAEC表达TF的影响
2.4.1 不同浓度的TNFα对BAEC表达TF的影响 体外培养的BAECs在无任何刺 激 的情况下可产生微量的TF；TNFα作用BAECs 8 h后，可诱导其产生较大量的TF，且在0～500 U*ml-1范围内，TF随TNFα浓度的 增加而增加(r= 0.9712), 当TNFα浓度超过500U.ml-1l时，TF表达量接近饱 和(表3)。
表2 补阳还五汤对TNFα诱导的BAEC释放vW F的影响(±s) 组别
样本数
vWF(U.ml- 1)
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空白对照组
10
6.20±2.84
TNFα组(400U.ml-1)
10
13.28±4.76①
补阳还五汤组(100mg.ml-1)
10
8.53±1.82②
补阳还五汤+TNFα组
, 百拇医药
10
0.55±0.37②
①与对照组比较: P<0.01; ②与TNFα组比较: P<0.01 表3 不同浓度TNFα对BAEC表达TF的 影响(±s) TNFα浓度 (U.ml-1)
样本数
TF活性(%)
0
6
2.78±0.94
25
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6
3.73±1.01
50
6
7.25±2.72
100
6
9.27±3.19
250
6
10.61±3.21
500
6
, 百拇医药
20.23±7.40
1000
6
23.84±6.94
2000
6
24.56±8.23
2.4.2 补阳还五汤对TNFα诱导BAEC表达TF的影响 TNFα作用培养的BAECs 8 h后，与对照组相比，能明显刺激 BAECs 表达TF活性(P< 0.01); 而补阳还五汤 能显著抑制其作用 (P< 0.01)(表4)。 表4 补阳还五汤对TNFα诱导 BAEC 表达TF的影响(±s) 组别
, 百拇医药
样本数
TF活性(%)
对照组
11
4.69±0.83
TNFα组(400U.ml-1)
11
12.79±2.59①
补阳还五汤组(100mg.ml-1)
11
, 百拇医药
2.25±0.47①
补阳还五汤+TNFα组
11
0.33±0.10②
①与对照组比较：P<0.01; ②与TNFα组比较： P<0.01
3 讨 论
在TNFα,凝血酶等刺激下，血管内皮细胞能产生大量的TF和vWF。这种诱生性的TF在血管内 异常表达是感染性休克和播散性血管内凝血(DIC)的一种重要发病机制，在动脉粥样硬化 血管内的血栓形成以及急性肾小球肾炎等病程中亦起非常重要的作用[2，7]。本文 结果表明 ，TNFα刺激BAECs表达TF活性，且呈剂量依赖式(0～500 U.ml-1)，与国外报道结 果相一致 [8]。继续增加TNFα浓度，TF表达仅稍有增加，这可能与内皮细胞表面受体饱和有 关。同时 TNFα也能促进BAECs释放vWF。大量研究表明，vWF的升高与高血压、妊娠高血压、心肌梗死 及动脉硬化等心血管疾病的发生密切相关[7]，并与病情的轻重呈平行关系。这是 由于vWF可 以加速血小板粘附、聚集，干扰纤溶过程，促进平滑肌细胞增生，加重内皮细胞损伤[ 4]。 因此，vWF被认为是心血管疾病的一个高危因素，并被建议作为血管内皮细胞损害的标志物 。而TNFα除本身对内皮细胞造成直接的细胞毒作用外，还能抑制纤溶反应，激活凝血系统 ，促进血栓形成[7]，并且通过促进BAECs表达TF，释放vWF，进一步加速上述病理 过程的发 生发展。补阳还五汤是收载于《医林改错》中的经典方剂，临床上常用于防治心脑血管意外 及其后遗症的治疗。近年来的医学研究证明，补阳还五汤具有扩张血管、改善微循环、降低 血小板聚集率，抗炎、抗氧化和保护血管内皮细胞之功能[5]，但其具体机制尚不 清楚，尤 其是与TNFα这个最主要的炎症介质对血管内皮细胞影响之间的关系如何，目前尚未见报道 。笔者发现，补阳还五汤不仅能抑制基础条件下BAECs表达TF，而且能明显抑制TNFα所诱导 的TF，vWF表达，这可能是补阳还五汤抗凝、抗血栓形成及抑制血管内炎症反应的机制之一 。本文结果为进一步理解补阳还五汤的药理作用提供了一些新的理论依据，也可能为临床合 理应用补阳还五汤提供新的参考。
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参考文献：
[1] De MGRY, Arnold GH. Vascular endothelial dysfunction[J ]. Drog Cardiovasc Dis, 1997,39(4):325-342.
[2] Camerer E, Kolsto AB, Prydz H,et al.Cell biology of tissue factor, th e principal initiator of blood coagulation[J]. Thromb Res, 1996, 81:1-41.
[3] Ф Sterud BA. Global view on the role of monocytes and platelets in ather ogenesis[J]. Thromb Res, 1997, 85(1):1-22.
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[4] Lip GYH, Blann A. von Willebrand factor: a marker of endothelial dysfunct ion in vascular disorders[J]. Cardivasc Res, 1997, 34:255-265.
[5] 梁翠微,郑有顺.补阳还五汤药理研究与临床应用新进展[J].中成药,1998，20(1 ):41-42.
[6] 李增刚,文志斌,汉建忠,等.凝血酶对牛主动脉内皮细胞组织因子活性影响及其与PKC 传导途径的关系[J].中华血液学杂志, 1999, 20(3):130-133.
[7] 关瑜,张梦玺,袁洪,等.冠心病与肿瘤坏死因子、白介素-6浓度关系的研究[J]. 临床心血管杂志, 1998, 14(6):325-328.
[8] Berilacqua MP, Dober JS, Majeau GR,et al.Recombinant tumor necrosis f actor induces procoagulant activity in cultured human vascular endothelium: Char acterization and comparison with the actions of interleukin-1[J]. Proc Natt Acad Sci USA,1986,83:4533-4537., 百拇医药
单位：尚改萍(生理教研室止血与血栓研究室 长沙 410078)；文志斌(生理教研室止血与血栓研究室 长沙 410078)；李俊成(生理教研室止血与血栓研究室 长沙 410078)；汉建忠(生理教研室止血与血栓研究室 长沙 410078)；熊石龙(生理教研室止血与血栓研究室 长沙 410078)；贺石林(生理教研室止血与血栓研究室 长沙 410078)；肖振军(附属湘雅医院 长沙 410008)；周春生(附属湘雅医院 长沙 410008)
关键词：黄芪；川芎；中药；汤剂；肿瘤坏死因子；内皮细；胞；von；Willebrand；因子
湖南医科大学学报000211[摘要] 目的：观察补阳还五汤对TNFa诱导血管内皮细胞释放vWF和表 达组织因子的影响。方法：对传代培养的新生牛主动脉内皮细胞4～8代分别给予不同处理，取上清液测vWF， 取细 胞冻融液测定组织因子活性。结果：①与对照组相比, TNFa促进内皮细胞表达组织因子(12. 79±2.59 vs. 4.69±0.83，P<0.01)，并呈剂量依赖性(r=0.971, 0～500 U.ml-1)，补阳还五汤抑制其效应(P<0.01)；②与对照组相比较, TNFa 促进 vWF 释放(13.82±4.76 vs. 6.24 ± 2.84 , P<0.01), 补阳还五汤抑制其作用(P <0.01)。结论： 补阳还五汤能抑制TNFα诱导血管内皮细胞表达组织因子和释放vWF。
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[中图分类号] R285.5 [文献标识码] A [文章编号] 1000-5625(2000)02-0129-03
Effects of Buyang huanwu decoction on the release of vWF and the expression of tissue factor induced by tumor necrosis factor α in cultured bovine aortic endothelial cells
SHANG Gai-ping, WEN Zhi-bin, LI Jun-cheng, et al.
Department of Physiology, Hunan Medical University(Changsha 4100 78)
, 百拇医药
[Abstract] Objective: To study the effects of Buyang huanwu decoction (BHD) o n the release of von Willebrand factor(vWF) and the expression of tissue facto r(TF) activity induced by tumor necrosis factor α (TNFα) in cultured bovine ao rtic endothelial cells (BAECs). Methods: BAECs from neonatal cox were cultured and 4～8 passages were used. Cells were incubated for 8 hours after addition of different treatments. The supernatant was used to measure vWF and BAECs lysate to determine TF activity. Results:① Compared with the control, TNFα enhanced the expression of TF activity(12.79±2.59 vs. 4.69±0.83,P<0.01) and the effects were in dose-dependent manner(r=0.9712,P<0.01)； BHD inhibited the effe cts of T NFα(P<0.01). ②Compared with the control, TNFα promoted the release of vWF fro m endothelial cells (13.28±4.76 vs. 6.42±2.84,P<0.01) and BHD inhibite d the effect of TNFα(P<0.01). Conclusion: BHD can inhibit the expression of T Fand the release of vWF induced by TNFα.
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[Key words] astragalus; angelica; Chinese materia medica; decoction; tumor necrosis factor α; von Willebrand factor; endothelium
血管内皮细胞能分泌多种生物活性物质，其功能失调与多种疾病的发生密切相关[1] 。新近 研究表明，组织因子(tissue factor, TF)是外源性凝血途径的启动因子，在正常生理性凝 血反应及病理性血栓形成中起重要作用[2，3]。内皮细胞正常情况下并不表达TF， 但在某些 病理状态及凝血酶、IL-1和肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor α, TNFα)作用下却 大量表达，这已成为目前国外研究的热点，但国内报道极少。vWF也是血管内皮细胞分泌的 活性物质之一，有学者认为von Willebrand factor(vWF)分泌增多可作为血管内皮细胞受 损的标志物[2，4]。TNFα是体内重要的炎症介质之一，对血管内皮细胞具有明显 的损伤作 用，它可促进血管内皮细胞表达TF和释放vWF。补阳还五汤为祖国医学中的经典方剂，具活 血化瘀之功效，为临床所广泛应用。现代医学研究表明，补阳还五汤具有抗凝、抗炎、保护 血管内皮细胞之功能[5]，但与上述诸因素关系如何尚未见报道。因此，笔者观察 了补阳还 五汤对TNFα所诱导的牛主动脉内皮细胞释放vWF和表达TF的影响，现将结果报告如下。
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1 材料与方法
1.1 材料 D-Hank's液pH7.2～7.4，高压蒸气灭菌，4℃冰箱保存。胰蛋白 酶和M199培养基系S igma公司产品。小牛血清系杭州四季青生物制品研究所产品。凝血酶、兔脑凝血活酶来自中 国医学科学院血液学研究所。兔FⅦ相关抗原抗血清和冻干羊抗兔IgG荧光抗体购自卫生部上 海生物制品研究所。vWF放免试剂盒购自苏州医学院。TF单抗由美国Morrissey J H教授惠赠 。补阳还五汤提取液，依原方组成，各组分(黄芪、当归、红花、桃仁、赤芍、地龙、川芎)购自附属湘雅医院药房，常规煎煮3次，合并煎液，然后用95%酒精提取后过滤浓缩成注射 液，pH7.2～7.4，消毒备用。TNFα系北京邦定生物医学公司产品。
1.2 方法
1.2.1 牛主动脉内皮细胞(BAEC)培养[6] 取无菌的新生牛主动脉，结扎各分支，将0.25%的胰蛋白酶灌入主动脉扎紧两头，37℃消化15 min。收集消化液并以小牛血清灭活胰蛋白酶，离心，收集所得细胞，置培养瓶内进行原代培养。4～5 d细胞生长汇合后传代，将4～8 代细胞经台盼兰染色，拒染率>95%者(表明活细胞占细胞总数的95%以上)接种至24孔培养板(每孔细胞约0.5×105 ml-1)，2～3 d细胞汇合后进行实验。
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1.2.2 内皮细的胞鉴定 用间接荧光免疫法[6]。选生 长良好的培养细胞随机分为两组，其中一组为实验组，一组为空白对照组; 另取一组成纤维 细胞作阴性对照。以上3组细胞用95%酒精固定5 min，再用0.01 mol.L-1的PBS(pH= 7.5)洗3遍，吹干。实验组和成纤维细胞阴性对照组加兔FⅦ相关抗原(vWF)抗血清(1：20稀释) ，空白对照组加等量PBS，37℃温浴30 min，PBS洗3次，每次5 min，吹干。3组均加羊抗兔I gG荧光抗体(1：8稀释)，37℃温浴30 min，PBS洗3次，每次5 min，吹干，立即荧光显微 镜下观察，内皮细胞因含有特异性vWF将显黄色。
1.2.3 vWF的测定 按试剂盒操作说明进行。
1.2.4 TF活性检测 各组24孔板中加药或未加药的细胞于37℃，5%C O2条件下培养8 h，弃上清，用足量D-Hank's液反复清洗3次后，每孔加入0.5 ml D-Hank's液，细胞经 反 复冻融3次后，制成细胞冻融液。TF活性检测用一期凝血法[6]，以PT为14 s的兔脑 凝血活酶 为TF标准液，其80倍稀释液活性定为100，以血浆凝固时间为横轴，标准液TF活性的对数为 纵轴建立标准曲线，待测细胞冻融液的TF活性即可根据其凝固时间求得。
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1.2.5 TF抗原特异性鉴定 将不同浓度的TF单抗直接加入细胞冻融液中，若 细胞冻融液中的促凝活性可被抗体中和，则说明其促凝活性来自于TF，反之则说明其促凝活 性不是来自于TF。
1.3 统计学处理 测定结果以均数±标准差(
±s)表示，用方 差分析，组间两两比较用q检验。2 结 果
2.1 内皮细胞的鉴定 荧光显微镜下实验组B AECs呈现强荧光(黄绿色荧光着色)，核与胞浆界限清楚，而空白对照组和阴性对照组均无 荧光。
2.2 TF活性特异性的鉴定 在内皮细胞冻融液中加入不同浓度的TF单抗 后，其促凝活性随着TF单 抗增多而逐渐减弱，直至其抗凝活性被TF单抗完全中和；当加入非特异性IgG后，则对TF的 促凝活性无影响(表1)。
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表1 TF单抗对TF活性的影响 单抗浓度
(μg.ml-1)
细胞冻融液
标准TF液(1∶320)
TF单抗
非特异性单抗
TF单抗
非特异性单抗
0.00
20.22
20.22
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20.75
20.75
0.25
5.53
20.22
4.06
20.22
0.50
1.39
21.28
1.39
20.75
1.00
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1.59
19.69
1.44
20.22
2.00
1.39
20.75
1.47
19.69
以上数据均为3次测试的均值
2.3 补阳还五汤对TNFα诱导BAEC 释放vWF的影响 培养8 h后，与对照组 相比，TNFα促进BAECs释放vWF(P<0.01)；补阳还五汤能明显抑制TNFα的作用(P <0.01)(表2)。
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2.4 补阳还五汤对TNFα诱导BAEC表达TF的影响
2.4.1 不同浓度的TNFα对BAEC表达TF的影响 体外培养的BAECs在无任何刺 激 的情况下可产生微量的TF；TNFα作用BAECs 8 h后，可诱导其产生较大量的TF，且在0～500 U*ml-1范围内，TF随TNFα浓度的 增加而增加(r= 0.9712), 当TNFα浓度超过500U.ml-1l时，TF表达量接近饱 和(表3)。
表2 补阳还五汤对TNFα诱导的BAEC释放vW F的影响(
±s) 组别样本数
vWF(U.ml- 1)
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空白对照组
10
6.20±2.84
TNFα组(400U.ml-1)
10
13.28±4.76①
补阳还五汤组(100mg.ml-1)
10
8.53±1.82②
补阳还五汤+TNFα组
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10
0.55±0.37②
①与对照组比较: P<0.01; ②与TNFα组比较: P<0.01 表3 不同浓度TNFα对BAEC表达TF的 影响(
±s) TNFα浓度 (U.ml-1)样本数
TF活性(%)
0
6
2.78±0.94
25
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6
3.73±1.01
50
6
7.25±2.72
100
6
9.27±3.19
250
6
10.61±3.21
500
6
, 百拇医药
20.23±7.40
1000
6
23.84±6.94
2000
6
24.56±8.23
2.4.2 补阳还五汤对TNFα诱导BAEC表达TF的影响 TNFα作用培养的BAECs 8 h后，与对照组相比，能明显刺激 BAECs 表达TF活性(P< 0.01); 而补阳还五汤 能显著抑制其作用 (P< 0.01)(表4)。 表4 补阳还五汤对TNFα诱导 BAEC 表达TF的影响(
±s) 组别, 百拇医药
样本数
TF活性(%)
对照组
11
4.69±0.83
TNFα组(400U.ml-1)
11
12.79±2.59①
补阳还五汤组(100mg.ml-1)
11
, 百拇医药
2.25±0.47①
补阳还五汤+TNFα组
11
0.33±0.10②
①与对照组比较：P<0.01; ②与TNFα组比较： P<0.01
3 讨 论
在TNFα,凝血酶等刺激下，血管内皮细胞能产生大量的TF和vWF。这种诱生性的TF在血管内 异常表达是感染性休克和播散性血管内凝血(DIC)的一种重要发病机制，在动脉粥样硬化 血管内的血栓形成以及急性肾小球肾炎等病程中亦起非常重要的作用[2，7]。本文 结果表明 ，TNFα刺激BAECs表达TF活性，且呈剂量依赖式(0～500 U.ml-1)，与国外报道结 果相一致 [8]。继续增加TNFα浓度，TF表达仅稍有增加，这可能与内皮细胞表面受体饱和有 关。同时 TNFα也能促进BAECs释放vWF。大量研究表明，vWF的升高与高血压、妊娠高血压、心肌梗死 及动脉硬化等心血管疾病的发生密切相关[7]，并与病情的轻重呈平行关系。这是 由于vWF可 以加速血小板粘附、聚集，干扰纤溶过程，促进平滑肌细胞增生，加重内皮细胞损伤[ 4]。 因此，vWF被认为是心血管疾病的一个高危因素，并被建议作为血管内皮细胞损害的标志物 。而TNFα除本身对内皮细胞造成直接的细胞毒作用外，还能抑制纤溶反应，激活凝血系统 ，促进血栓形成[7]，并且通过促进BAECs表达TF，释放vWF，进一步加速上述病理 过程的发 生发展。补阳还五汤是收载于《医林改错》中的经典方剂，临床上常用于防治心脑血管意外 及其后遗症的治疗。近年来的医学研究证明，补阳还五汤具有扩张血管、改善微循环、降低 血小板聚集率，抗炎、抗氧化和保护血管内皮细胞之功能[5]，但其具体机制尚不 清楚，尤 其是与TNFα这个最主要的炎症介质对血管内皮细胞影响之间的关系如何，目前尚未见报道 。笔者发现，补阳还五汤不仅能抑制基础条件下BAECs表达TF，而且能明显抑制TNFα所诱导 的TF，vWF表达，这可能是补阳还五汤抗凝、抗血栓形成及抑制血管内炎症反应的机制之一 。本文结果为进一步理解补阳还五汤的药理作用提供了一些新的理论依据，也可能为临床合 理应用补阳还五汤提供新的参考。
, http://www.100md.com
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