PCR检测宫颈病变组织和配偶尿道分泌物HPV的研究
作者：李京培 王明丽 史百芬 乔慕华 范晓芳 胡 勇 黄升海 陈禹保
单位：李京培 王明丽 史百芬 胡 勇 黄升海 安徽医科大学微生物学教研室，合肥 230032；乔慕华 安徽医科大学附属第一医院妇产科，合肥 230022；范晓芳 合肥市第二人民医院妇产科，合肥 230011；陈禹保 北京美迪科生物工程公司，北京 100012
关键词：宫颈疾病；聚合酶链反应；乳头状瘤病毒；人；肿瘤病毒感染
安徽医科大学学报990311 摘要 目的 检测宫颈病变组织人乳头瘤病毒(HPV)感染对其配偶泌尿生殖道的受染情况。方法 应用聚合酶链反应对43例女性宫颈病变组织和配偶尿道分泌物进行HPV 6.11型和HPV 16.18型检测。结果 宫颈病变组织和配偶尿道分泌物HPV 6.11型检出率分别为27.91%和11.63%；HPV 16.18型检出率分别为51.16%和37.21%。配偶尿道分泌物与宫颈病变组织HPV 6.11同型检出率为41.67%，HPV 16.18型同型检出率72.73%。结论 女性感染HPV的同时，其配偶也有潜伏感染，表明HPV可通过尿道传播。
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中国图书资料分类法分类号 R711.22
Human papolloma virus infections in urinary genital
tract of female patients and their partners by PCR technique
Li Jingpei, Wang Mingli, Shi Baifen et al
(Dept of Microbiology, Anhui Medical University, Hefei 230032)
Abstract Objective To measure the positive rates of human papilloma virus (HPV) type 6.11 and 16.18 in discharges of 43 patients from female lower genital tract and in secretions of 43 their partners. Methods HPV DNA in samples was quantitatively detected by polymerase chain reaction (PCR). Results The positive rate in female pathological specimen and in secretions of their spouses were 27.91% and 11.63% for HPV 6.11 and 51.16% and 37.21% for HPV 16.18 respectively. The coincidence rates for HPV 6.11 and HPV 16.18 in female pathological tissues and in secretions were 41.67% and 72.73% respectively. Conclusion When females suffer from HPV infection, their partners may have high probability to have an insidious infections, indicating the possibility of seminal transmission of HPV.
, 百拇医药
MsSH cervix diseases; polymerase chain reatoion; papilloma virus,human; tumor virus infections
人乳头瘤病毒(human papilloma virus, HPV)除能引起传染性很强的生殖器感染外，还与生殖道上皮恶性肿瘤及癌前病变密切相关〔1，2〕，因此HPV的检测对尖锐湿疣、癌前病变及宫颈癌的早期诊断和防治有重要意义。为了解配偶双方HPV相互感染的关系，本研究采用聚合酶链反应(PCR)检测宫颈病变组织与其配偶的尿道分泌物中HPV基因型状况，为分子流行病研究提供依据。
1 材料和方法
1.1 标本 由安徽医科大学第一附属医院和市二院妇产科门诊提供，共有阴道镜检查异常病变组织43例，其中Ⅱ～Ⅲ度宫颈糜烂的慢性宫颈炎24例，尖锐湿疣16例，慢性宫颈炎3例；其对应配偶尿道分泌物43例。
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1.2 标本的采集和处理 用无菌棉拭子取宫颈脱落细胞或配偶尿道分泌物悬浮于无菌生理盐水中，置-20℃保存。用时融解，猛烈振荡，10 000 r.min-1离心5 min。沉淀物加50 μl裂解液(含0.45% NP-40，0.45% Tween-20蛋白酶K 0.3 g.L-1)经100℃ 10 min，其上清中即含有待测为HPV DNA模板。
1.3 PCR技术工艺流程 采用北京美迪科生物工程公司研制生产的HPV 6.11型及HPV 16.18型DNA体外诊断试剂盒。各试剂用量参见试剂盒说明。反应条件：在科海PCR热循环仪中94℃预变性5 min后，按94℃ 45 s，55℃ 45 s，72℃ 45 s，循环35次，72℃延伸5 min。扩增产物经20 g.L-1含EB的琼脂糖凝胶电泳，在紫外灯下观察，并与DNA marker对比，以233 bp处出现扩增带为HPV 16.18型阳性，540 bp处出现扩增带为HPV 6.11型阳性，每次试验均设阳性及阴性对照。
, 百拇医药
2 结果
2.1 引物特异性测定 以标准HPV 16.18型和HPV 6.11型阳性DNA、沙眼衣原体DNA，巨细胞病毒及单纯疱疹毒DNA做为模板，在其它条件相同下扩增，除HPV阳性DNA外，扩增产物结果均阴性。
2.2 重复性试验 3例患者PCR阳性标本和3例PCR阴性标本，均每日重复试验连续3次，各次所得结果完全一致。
2.3 宫颈标本及其对应配偶尿道分泌物不同型HPV检出率 见表1。43例宫颈病变标本中检出HPV 6.11型、HPV 16.18型和HPV混合型阳性例数分别是12、22和4例，总HPV阳性38例，总阳性率为88.37%；对应其配偶标本检出HPV 6.11型、HPV 16.18型和HPV混合型分别为5、16和2例，总HPV阳性23例，总阳性率为53.49%。43例宫颈标本有22例HPV 16.18型阳性，这22例配偶尿道分泌物标本阳性16例，同型检出率为72.73%；且HPV 6.11型阳性12例，其对应配偶标本HPV 6.11型阳性5例，同型检出率为41.67%。43例宫颈标本HPV混合阳性4例，其配偶尿道分泌物HPV混合阳性2例，同型检出率为50%。
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表1 43例宫颈标本及其对应配偶尿道分泌物不同型HPV检出率(%) HPV型别
宫颈标本
尿道分泌物
二者同型率
(%)
例数(检出率)
例数(检出率)
HPV 6.11
12(27.91)
5(11.63)
41.67
HPV 16.18
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22(51.16)
16(37.21)
72.73
HPV混合型
4(9.30)
2(4.65)
50.00
3 讨论
HPV是宫颈上皮恶变的重要因子，目前尚无合适的体外培养系统，使其常规检测受到限制，PCR技术的应用使得HPV的临床检测出现了突破性进展。此方法快速，敏感性强，能检测出低拷贝数的HPV，但有时会发生假阳性。为了避免假阳性的出现，我们做了引物特异性试验，结果显示HPV 6.11型和HPV 16.18型阳性对照均出现特异性扩增带，而其它非HPV DNA及阴性对照均未见扩增带。因此说明该试验有良好的可信性。
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女性宫颈与配偶泌尿道生殖道HPV感染的相互关系，国内少见报道。本次检测宫颈病变组织和配偶尿道分泌物标本各43例，结果总HPV阳性率、HPV 6.11型阳性率和HPV 16.18型阳性率分别为88.37%、27.91%和51.16%，表明宫颈病变组织标本检出率高，且以感染HPV 16.18型为主。另外4例宫颈病变组织标本是HPV 6.11型和16.18型混合感染，其中3例是Ⅲ度宫颈糜烂的慢性宫颈炎患者，另1例为尖锐湿疣患者。而HPV DNA阴性宫颈组织标本推测可能出现HPV其它型别的感染。我们的结果明显高于崔玉兰等〔3〕HPV 6.11型阳性率(19.40%)和HPV 16.18型阳性率(30.56%)，尤以HPV 16.18型较报道的检测率为高。我们的实验还表明宫颈有HPV感染的妇女，其配偶泌尿生殖道中亦存在着HPV感染，且同型感染率HPV 6.11型、HPV 16.18型和HPV混合型分别为41.67%、72.73%和50.0%，证实了HPV在配偶间存在性传播相互感染的关系。
本次仅检测了HPV 6.11型和HPV 16.18型，且检出率较高，有条件还可测HPV 31.33型。凡是检出HPV DNA者，不论从传染病、流行病还是从肿瘤的发生等方面来看，都应视其为高危人群。除定期随访外，还应在配偶间采取措施，阻断传染源，从而达到防止疾病复发，防癌治癌的目的。
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作者简介：李京培，男37岁，在职研究生，高级实验师
王明丽，女，44岁，硕士，副教授，硕士生导师
参考文献
1 Adriaan JC, Eric CJ, Marcdu M et al. Use of anticomtamination primers in the PCR for the detection of human HPV genotypes in cervical scrapes and biopsies. J Med Virol, 1989;29(1):20～27
2 陈伟丽，姚
，王明伦等. 慢性宫颈炎患者宫颈中人乳头病毒基因的检测. 中华实验和临床病毒学杂志， 1995；9(2)：168～170
3 崔玉兰，崔红玉，李佩玲等. 应用PCR技术检测尖锐湿疣患者HPV感染. 哈尔滨医科大学学报， 1996；30(4)：358～360
1999-01-21收稿，1999-04-01修回, http://www.100md.com
单位：李京培 王明丽 史百芬 胡 勇 黄升海 安徽医科大学微生物学教研室，合肥 230032；乔慕华 安徽医科大学附属第一医院妇产科，合肥 230022；范晓芳 合肥市第二人民医院妇产科，合肥 230011；陈禹保 北京美迪科生物工程公司，北京 100012
关键词：宫颈疾病；聚合酶链反应；乳头状瘤病毒；人；肿瘤病毒感染
安徽医科大学学报990311 摘要 目的 检测宫颈病变组织人乳头瘤病毒(HPV)感染对其配偶泌尿生殖道的受染情况。方法 应用聚合酶链反应对43例女性宫颈病变组织和配偶尿道分泌物进行HPV 6.11型和HPV 16.18型检测。结果 宫颈病变组织和配偶尿道分泌物HPV 6.11型检出率分别为27.91%和11.63%；HPV 16.18型检出率分别为51.16%和37.21%。配偶尿道分泌物与宫颈病变组织HPV 6.11同型检出率为41.67%，HPV 16.18型同型检出率72.73%。结论 女性感染HPV的同时，其配偶也有潜伏感染，表明HPV可通过尿道传播。
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中国图书资料分类法分类号 R711.22
Human papolloma virus infections in urinary genital
tract of female patients and their partners by PCR technique
Li Jingpei, Wang Mingli, Shi Baifen et al
(Dept of Microbiology, Anhui Medical University, Hefei 230032)
Abstract Objective To measure the positive rates of human papilloma virus (HPV) type 6.11 and 16.18 in discharges of 43 patients from female lower genital tract and in secretions of 43 their partners. Methods HPV DNA in samples was quantitatively detected by polymerase chain reaction (PCR). Results The positive rate in female pathological specimen and in secretions of their spouses were 27.91% and 11.63% for HPV 6.11 and 51.16% and 37.21% for HPV 16.18 respectively. The coincidence rates for HPV 6.11 and HPV 16.18 in female pathological tissues and in secretions were 41.67% and 72.73% respectively. Conclusion When females suffer from HPV infection, their partners may have high probability to have an insidious infections, indicating the possibility of seminal transmission of HPV.
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MsSH cervix diseases; polymerase chain reatoion; papilloma virus,human; tumor virus infections
人乳头瘤病毒(human papilloma virus, HPV)除能引起传染性很强的生殖器感染外，还与生殖道上皮恶性肿瘤及癌前病变密切相关〔1，2〕，因此HPV的检测对尖锐湿疣、癌前病变及宫颈癌的早期诊断和防治有重要意义。为了解配偶双方HPV相互感染的关系，本研究采用聚合酶链反应(PCR)检测宫颈病变组织与其配偶的尿道分泌物中HPV基因型状况，为分子流行病研究提供依据。
1 材料和方法
1.1 标本 由安徽医科大学第一附属医院和市二院妇产科门诊提供，共有阴道镜检查异常病变组织43例，其中Ⅱ～Ⅲ度宫颈糜烂的慢性宫颈炎24例，尖锐湿疣16例，慢性宫颈炎3例；其对应配偶尿道分泌物43例。
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1.2 标本的采集和处理 用无菌棉拭子取宫颈脱落细胞或配偶尿道分泌物悬浮于无菌生理盐水中，置-20℃保存。用时融解，猛烈振荡，10 000 r.min-1离心5 min。沉淀物加50 μl裂解液(含0.45% NP-40，0.45% Tween-20蛋白酶K 0.3 g.L-1)经100℃ 10 min，其上清中即含有待测为HPV DNA模板。
1.3 PCR技术工艺流程 采用北京美迪科生物工程公司研制生产的HPV 6.11型及HPV 16.18型DNA体外诊断试剂盒。各试剂用量参见试剂盒说明。反应条件：在科海PCR热循环仪中94℃预变性5 min后，按94℃ 45 s，55℃ 45 s，72℃ 45 s，循环35次，72℃延伸5 min。扩增产物经20 g.L-1含EB的琼脂糖凝胶电泳，在紫外灯下观察，并与DNA marker对比，以233 bp处出现扩增带为HPV 16.18型阳性，540 bp处出现扩增带为HPV 6.11型阳性，每次试验均设阳性及阴性对照。
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2 结果
2.1 引物特异性测定 以标准HPV 16.18型和HPV 6.11型阳性DNA、沙眼衣原体DNA，巨细胞病毒及单纯疱疹毒DNA做为模板，在其它条件相同下扩增，除HPV阳性DNA外，扩增产物结果均阴性。
2.2 重复性试验 3例患者PCR阳性标本和3例PCR阴性标本，均每日重复试验连续3次，各次所得结果完全一致。
2.3 宫颈标本及其对应配偶尿道分泌物不同型HPV检出率 见表1。43例宫颈病变标本中检出HPV 6.11型、HPV 16.18型和HPV混合型阳性例数分别是12、22和4例，总HPV阳性38例，总阳性率为88.37%；对应其配偶标本检出HPV 6.11型、HPV 16.18型和HPV混合型分别为5、16和2例，总HPV阳性23例，总阳性率为53.49%。43例宫颈标本有22例HPV 16.18型阳性，这22例配偶尿道分泌物标本阳性16例，同型检出率为72.73%；且HPV 6.11型阳性12例，其对应配偶标本HPV 6.11型阳性5例，同型检出率为41.67%。43例宫颈标本HPV混合阳性4例，其配偶尿道分泌物HPV混合阳性2例，同型检出率为50%。
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表1 43例宫颈标本及其对应配偶尿道分泌物不同型HPV检出率(%) HPV型别
宫颈标本
尿道分泌物
二者同型率
(%)
例数(检出率)
例数(检出率)
HPV 6.11
12(27.91)
5(11.63)
41.67
HPV 16.18
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22(51.16)
16(37.21)
72.73
HPV混合型
4(9.30)
2(4.65)
50.00
3 讨论
HPV是宫颈上皮恶变的重要因子，目前尚无合适的体外培养系统，使其常规检测受到限制，PCR技术的应用使得HPV的临床检测出现了突破性进展。此方法快速，敏感性强，能检测出低拷贝数的HPV，但有时会发生假阳性。为了避免假阳性的出现，我们做了引物特异性试验，结果显示HPV 6.11型和HPV 16.18型阳性对照均出现特异性扩增带，而其它非HPV DNA及阴性对照均未见扩增带。因此说明该试验有良好的可信性。
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女性宫颈与配偶泌尿道生殖道HPV感染的相互关系，国内少见报道。本次检测宫颈病变组织和配偶尿道分泌物标本各43例，结果总HPV阳性率、HPV 6.11型阳性率和HPV 16.18型阳性率分别为88.37%、27.91%和51.16%，表明宫颈病变组织标本检出率高，且以感染HPV 16.18型为主。另外4例宫颈病变组织标本是HPV 6.11型和16.18型混合感染，其中3例是Ⅲ度宫颈糜烂的慢性宫颈炎患者，另1例为尖锐湿疣患者。而HPV DNA阴性宫颈组织标本推测可能出现HPV其它型别的感染。我们的结果明显高于崔玉兰等〔3〕HPV 6.11型阳性率(19.40%)和HPV 16.18型阳性率(30.56%)，尤以HPV 16.18型较报道的检测率为高。我们的实验还表明宫颈有HPV感染的妇女，其配偶泌尿生殖道中亦存在着HPV感染，且同型感染率HPV 6.11型、HPV 16.18型和HPV混合型分别为41.67%、72.73%和50.0%，证实了HPV在配偶间存在性传播相互感染的关系。
本次仅检测了HPV 6.11型和HPV 16.18型，且检出率较高，有条件还可测HPV 31.33型。凡是检出HPV DNA者，不论从传染病、流行病还是从肿瘤的发生等方面来看，都应视其为高危人群。除定期随访外，还应在配偶间采取措施，阻断传染源，从而达到防止疾病复发，防癌治癌的目的。
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作者简介：李京培，男37岁，在职研究生，高级实验师
王明丽，女，44岁，硕士，副教授，硕士生导师
参考文献
1 Adriaan JC, Eric CJ, Marcdu M et al. Use of anticomtamination primers in the PCR for the detection of human HPV genotypes in cervical scrapes and biopsies. J Med Virol, 1989;29(1):20～27
2 陈伟丽，姚
，王明伦等. 慢性宫颈炎患者宫颈中人乳头病毒基因的检测. 中华实验和临床病毒学杂志， 1995；9(2)：168～1703 崔玉兰，崔红玉，李佩玲等. 应用PCR技术检测尖锐湿疣患者HPV感染. 哈尔滨医科大学学报， 1996；30(4)：358～360
1999-01-21收稿，1999-04-01修回, http://www.100md.com