鼻内翻性乳头状瘤组织中p53和人乳头状瘤病毒检测
作者：王德辉 陈茂国 李玉茹 肖立峰 孙克敏
单位：150001 哈尔滨医科大学附属第一医院(王德辉、李玉茹、肖立峰、孙克敏)；黑龙江鸡西市人民医院(陈茂国)
关键词：
我们对内翻性乳头状瘤及其癌变组织进行突变型p53蛋白和HPV相关DNA序列检测 我们对内翻性乳头状瘤及其癌变组织进行突变型p53蛋白和HPV相关DNA序列检测。探讨p53蛋白异常表达和HPV感染与内翻性乳头状瘤的发生及癌变的关系。
一、材料与方法
1. p53蛋白检测：采用我院1983～1993年间病理确诊为鼻内翻性乳头状瘤(36例)及其癌变(16例)的石蜡包埋组织块，患者平均年龄51.4岁(32～67岁)，未找到同一患者鼻内翻性乳头状瘤和其癌变的前后自身对照的石蜡包埋组织块。上述石蜡包埋的标本，常规切片，脱蜡后，采用免疫组化ABC法进行p53蛋白染色。以马血清阻断非特异性结合后，与Ⅰ抗(鼠抗人p53单克隆抗体，Dako，美国)和Ⅱ抗(1∶200羊抗鼠IgG,上海华美生物工程公司)及1∶200 ABC试剂在22℃各作用1小时，DAB显色后，复染后封片。每个视野下有10%以上的细胞被染色时判定为p53蛋白阳性[1]。
, 百拇医药
2. HPV检测：取上述石蜡包埋标本，采用常规蛋白酶K消化，苯酚、氯仿抽提两次，提取DNA备PCR检查用。采用HPV E6区的通用引物进行DNA扩增，电泳后在紫外灯下进行观察，摄片并进行结果分析。
二、结果
p53蛋白阳性细胞的胞核呈棕黄色，弥漫或局灶地分布于癌细胞中，肿瘤间质细胞未见p53蛋白阳性细胞(附图)。HPV扩增产物的片断与设计的片断相符。
36例内翻性乳头状瘤组织中无p53蛋白阳性反应；16例内翻性乳头状瘤癌变组织中5例(31.3%)p53蛋白阳性。经统计学处理二者差异有极显著性(P<0.001)。36例内翻性乳头状瘤组织中21例(58.3%)HPV阳性；16例内翻性乳头状瘤癌变组织中11例(68.8%)HPV阳性。经统计学处理二者间差异无显著性(P>0.05)。内翻性乳头状瘤癌变组织中p53 和HPV均阳性者3例，p53阳性而HPV阴性者2例，p53阴性而HPV阳性者8例，p53 和HPV均为阴性者3例。
, http://www.100md.com
三、讨论
鼻内翻性乳头状瘤的重要生物学特性之一是易发生癌变。其癌变率为5%～15%[2]。 目前对内翻性乳头状瘤癌变的分子机制了解较少。p53基因是一种抑癌基因，其产物野生型p53蛋白在细胞增殖调控中发挥重要的负调节作用。 p53基因突变后产生突变型p53蛋白，后者失去了细胞增殖的负调节作用，可通过免疫组化方法进行突变型p53蛋白检测。近年来的研究表明p53蛋白异常表达是多种人体肿瘤发生中的最常见事件，本组中p53蛋白异常表达只见于内翻性乳头状瘤癌变组织。提示p53蛋白异常表达可能与内翻性乳头状瘤的发生无关，但在内翻性乳头状瘤癌变过程发挥一定作用。
本组采用HPV E6区设计的公共引物，可以扩增HPV 6、11、16、18及33型，由于HPV E6可在病毒感染宿主细胞时被整合到宿主细胞中，因而可有效地避免假阴性出现。本组中内翻性乳头状瘤组织中HPV的阳性率为58.3% ，内翻性乳头状瘤恶变组织中阳性率为68.8%, 两者差异无显著性。结果提示HPV感染可能在内翻性乳头状瘤的发生过程中发挥一定作用，但内翻性乳头状瘤癌变还需要HPV感染以外致癌因素参与，如p53蛋白异常表达的参与等。
, http://www.100md.com
参考文献
1Anwar K, Nakakuki K, Imai H, et al. Over-expression of p53 protein in human laryngeal carcinoma. Int J Cancer, 1993,53:952-956.
2Lesperance MM, Esclamado RM. Squamous cell carcinoma arising in inverted papilloma. Laryngoscope, 1995,105:178-183.
(收稿：1997-08-29 修回：1998-01-02), 百拇医药
单位：150001 哈尔滨医科大学附属第一医院(王德辉、李玉茹、肖立峰、孙克敏)；黑龙江鸡西市人民医院(陈茂国)
关键词：
我们对内翻性乳头状瘤及其癌变组织进行突变型p53蛋白和HPV相关DNA序列检测 我们对内翻性乳头状瘤及其癌变组织进行突变型p53蛋白和HPV相关DNA序列检测。探讨p53蛋白异常表达和HPV感染与内翻性乳头状瘤的发生及癌变的关系。
一、材料与方法
1. p53蛋白检测：采用我院1983～1993年间病理确诊为鼻内翻性乳头状瘤(36例)及其癌变(16例)的石蜡包埋组织块，患者平均年龄51.4岁(32～67岁)，未找到同一患者鼻内翻性乳头状瘤和其癌变的前后自身对照的石蜡包埋组织块。上述石蜡包埋的标本，常规切片，脱蜡后，采用免疫组化ABC法进行p53蛋白染色。以马血清阻断非特异性结合后，与Ⅰ抗(鼠抗人p53单克隆抗体，Dako，美国)和Ⅱ抗(1∶200羊抗鼠IgG,上海华美生物工程公司)及1∶200 ABC试剂在22℃各作用1小时，DAB显色后，复染后封片。每个视野下有10%以上的细胞被染色时判定为p53蛋白阳性[1]。
, 百拇医药
2. HPV检测：取上述石蜡包埋标本，采用常规蛋白酶K消化，苯酚、氯仿抽提两次，提取DNA备PCR检查用。采用HPV E6区的通用引物进行DNA扩增，电泳后在紫外灯下进行观察，摄片并进行结果分析。
二、结果
p53蛋白阳性细胞的胞核呈棕黄色，弥漫或局灶地分布于癌细胞中，肿瘤间质细胞未见p53蛋白阳性细胞(附图)。HPV扩增产物的片断与设计的片断相符。
36例内翻性乳头状瘤组织中无p53蛋白阳性反应；16例内翻性乳头状瘤癌变组织中5例(31.3%)p53蛋白阳性。经统计学处理二者差异有极显著性(P<0.001)。36例内翻性乳头状瘤组织中21例(58.3%)HPV阳性；16例内翻性乳头状瘤癌变组织中11例(68.8%)HPV阳性。经统计学处理二者间差异无显著性(P>0.05)。内翻性乳头状瘤癌变组织中p53 和HPV均阳性者3例，p53阳性而HPV阴性者2例，p53阴性而HPV阳性者8例，p53 和HPV均为阴性者3例。
, http://www.100md.com
三、讨论
鼻内翻性乳头状瘤的重要生物学特性之一是易发生癌变。其癌变率为5%～15%[2]。 目前对内翻性乳头状瘤癌变的分子机制了解较少。p53基因是一种抑癌基因，其产物野生型p53蛋白在细胞增殖调控中发挥重要的负调节作用。 p53基因突变后产生突变型p53蛋白，后者失去了细胞增殖的负调节作用，可通过免疫组化方法进行突变型p53蛋白检测。近年来的研究表明p53蛋白异常表达是多种人体肿瘤发生中的最常见事件，本组中p53蛋白异常表达只见于内翻性乳头状瘤癌变组织。提示p53蛋白异常表达可能与内翻性乳头状瘤的发生无关，但在内翻性乳头状瘤癌变过程发挥一定作用。
本组采用HPV E6区设计的公共引物，可以扩增HPV 6、11、16、18及33型，由于HPV E6可在病毒感染宿主细胞时被整合到宿主细胞中，因而可有效地避免假阴性出现。本组中内翻性乳头状瘤组织中HPV的阳性率为58.3% ，内翻性乳头状瘤恶变组织中阳性率为68.8%, 两者差异无显著性。结果提示HPV感染可能在内翻性乳头状瘤的发生过程中发挥一定作用，但内翻性乳头状瘤癌变还需要HPV感染以外致癌因素参与，如p53蛋白异常表达的参与等。
, http://www.100md.com
参考文献
1Anwar K, Nakakuki K, Imai H, et al. Over-expression of p53 protein in human laryngeal carcinoma. Int J Cancer, 1993,53:952-956.
2Lesperance MM, Esclamado RM. Squamous cell carcinoma arising in inverted papilloma. Laryngoscope, 1995,105:178-183.
(收稿：1997-08-29 修回：1998-01-02), 百拇医药