射干提取物对红色毛癣菌抑菌作用的实验研究*
作者：刘春平 南国荣** 王凤荣*** 四荣联** 王刚生**
单位：河北医科大学第三医院皮肤科(石家庄 050051)
关键词：皮肤真菌病；药物疗法；射干；发癣菌属；致病力
河北医科大学学报990318 中图号 R756
探讨中药射干乙醚部分提取物对红色毛癣菌抑菌作用机制,以期为临床采用射干提取物治疗皮肤癣菌病提供进一步的科学依据。
1 材料与方法
1.1 菌种:红色毛癣菌(Tr)1株,为南京皮肤病研究所菌种保藏中心提供的标准株。
, http://www.100md.com
1.2 药物:射干1 000 g,由本院药房提供。取射干1 000 g,以95 %乙醇回流提取,再分别以乙醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取,3部分得量分别是25 g、9 g和30 g。
1.3 液体药基的制备:取射干乙醚部分提取物,以二甲基亚砜为溶媒、沙氏液基为基质,配制质量浓度0.625、1.25和2.5 mg/ml 3种药基作为实验组;同时设与最高溶媒浓度相同的二甲基亚砜对照组和空白对照组。
1.4 菌种处理:挑取25 ℃培养10天Tr菌落的边缘菌丝置入上述3种药基及两对照组中,0.625和2.5 mg/ml质量浓度药基中的菌丝于24 h后取出,1.25 mg/ml质量浓度药基中的菌丝分别于12、24和72 h后取出,得到相同作用时间(24 h)不同药物质量浓度(0.625、1.25和2.5 mg/ml)样品组,和相同药物质量浓度(1.25 mg/ml)不同作用时间(12、24和72 h)样品组。两对照组中的菌丝分别于培养72小时后取出。
, http://www.100md.com
1.5 光镜样品制备及观察:采用传统的KOH制片法制备样品,光镜下观察。
1.6 电镜样品制备及观察:常规制备电镜样品,分别以Hitachi S-520电镜和Hitachi H-500电镜观察。
2 结 果
2.1 光镜观察:在两对照组中,菌丝弯曲自然,胞浆饱满,结构完好。在实验组中,随着药物质量浓度的增高和作用时间的延长,菌丝逐渐出现肿胀变形,胞浆淡染,胞壁增厚,结构模糊,直至破碎成片段。
2.2 扫描电镜:两对照组中的菌丝均生长良好,表面光滑饱满,直径6～15 μm。1.25 mg/ml药基作用12 h后,Tr菌丝表面变粗糙,出现小的破坏性孔洞;24 h后菌丝出现明显的破坏性裂隙;72 h后菌丝形态明显改变,粗细不一,出现多处破损和断裂。0.625 mg/ml药物作用24 h,菌丝形态基本正常,少数菌丝的生长尖端出现肿胀;2.5 mg/ml药物作用24 h后,菌丝普遍明显肿胀,出现众多菌丝片段。
, http://www.100md.com
2.3 透射电镜:在两对照组中,Tr细胞的胞壁完整,厚约0.18μm,胞内有细胞核、内质网和线粒体等结构。1.25 mg/ml药物作用12 h后,胞壁稍增厚,线粒体肿胀形成髓样体;24 h后线粒体严重肿胀变形,嵴多数被破坏,细胞壁均匀增厚;72 h后胞浆变性坏死,有些细胞壁破溃消失,细胞内容物溢出。0.625 mg/ml药物作用24 h,细胞内部无明显改变,壁略增厚。2.5 mg/ml药物作用24 h,胞壁明显增厚,部分破溃,变性坏死之内容物溢出胞外。
3 讨 论
光镜和电镜技术已广泛应用于真菌领域。利用电镜研究Saperconazole对Tr形态学的影响发现,药物作用后Tr外形变得不规则、壁不均匀增厚,有灶状电子致密物沉积,随后出现胞浆和细胞器的变性坏死。这些变化随着药物浓度增高和作用时间延长而加剧,本实验所观察到的现象与此类似。
(电镜室全体老师协助完成实验,特此致谢)
* 河北省卫生厅课题(98030) ** 第二医院皮肤科 *** 基础所病理研究室
(1998-05-22 收稿), http://www.100md.com(刘春平 南国荣** 王凤荣*** 四荣联** 王刚生**)
单位：河北医科大学第三医院皮肤科(石家庄 050051)
关键词：皮肤真菌病；药物疗法；射干；发癣菌属；致病力
河北医科大学学报990318 中图号 R756
探讨中药射干乙醚部分提取物对红色毛癣菌抑菌作用机制,以期为临床采用射干提取物治疗皮肤癣菌病提供进一步的科学依据。
1 材料与方法
1.1 菌种:红色毛癣菌(Tr)1株,为南京皮肤病研究所菌种保藏中心提供的标准株。
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1.2 药物:射干1 000 g,由本院药房提供。取射干1 000 g,以95 %乙醇回流提取,再分别以乙醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取,3部分得量分别是25 g、9 g和30 g。
1.3 液体药基的制备:取射干乙醚部分提取物,以二甲基亚砜为溶媒、沙氏液基为基质,配制质量浓度0.625、1.25和2.5 mg/ml 3种药基作为实验组;同时设与最高溶媒浓度相同的二甲基亚砜对照组和空白对照组。
1.4 菌种处理:挑取25 ℃培养10天Tr菌落的边缘菌丝置入上述3种药基及两对照组中,0.625和2.5 mg/ml质量浓度药基中的菌丝于24 h后取出,1.25 mg/ml质量浓度药基中的菌丝分别于12、24和72 h后取出,得到相同作用时间(24 h)不同药物质量浓度(0.625、1.25和2.5 mg/ml)样品组,和相同药物质量浓度(1.25 mg/ml)不同作用时间(12、24和72 h)样品组。两对照组中的菌丝分别于培养72小时后取出。
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1.5 光镜样品制备及观察:采用传统的KOH制片法制备样品,光镜下观察。
1.6 电镜样品制备及观察:常规制备电镜样品,分别以Hitachi S-520电镜和Hitachi H-500电镜观察。
2 结 果
2.1 光镜观察:在两对照组中,菌丝弯曲自然,胞浆饱满,结构完好。在实验组中,随着药物质量浓度的增高和作用时间的延长,菌丝逐渐出现肿胀变形,胞浆淡染,胞壁增厚,结构模糊,直至破碎成片段。
2.2 扫描电镜:两对照组中的菌丝均生长良好,表面光滑饱满,直径6～15 μm。1.25 mg/ml药基作用12 h后,Tr菌丝表面变粗糙,出现小的破坏性孔洞;24 h后菌丝出现明显的破坏性裂隙;72 h后菌丝形态明显改变,粗细不一,出现多处破损和断裂。0.625 mg/ml药物作用24 h,菌丝形态基本正常,少数菌丝的生长尖端出现肿胀;2.5 mg/ml药物作用24 h后,菌丝普遍明显肿胀,出现众多菌丝片段。
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2.3 透射电镜:在两对照组中,Tr细胞的胞壁完整,厚约0.18μm,胞内有细胞核、内质网和线粒体等结构。1.25 mg/ml药物作用12 h后,胞壁稍增厚,线粒体肿胀形成髓样体;24 h后线粒体严重肿胀变形,嵴多数被破坏,细胞壁均匀增厚;72 h后胞浆变性坏死,有些细胞壁破溃消失,细胞内容物溢出。0.625 mg/ml药物作用24 h,细胞内部无明显改变,壁略增厚。2.5 mg/ml药物作用24 h,胞壁明显增厚,部分破溃,变性坏死之内容物溢出胞外。
3 讨 论
光镜和电镜技术已广泛应用于真菌领域。利用电镜研究Saperconazole对Tr形态学的影响发现,药物作用后Tr外形变得不规则、壁不均匀增厚,有灶状电子致密物沉积,随后出现胞浆和细胞器的变性坏死。这些变化随着药物浓度增高和作用时间延长而加剧,本实验所观察到的现象与此类似。
(电镜室全体老师协助完成实验,特此致谢)
* 河北省卫生厅课题(98030) ** 第二医院皮肤科 *** 基础所病理研究室
(1998-05-22 收稿), http://www.100md.com(刘春平 南国荣** 王凤荣*** 四荣联** 王刚生**)