白细胞介素8对寻常型银屑病病理形成的动态研究
作者：商刚 陈艳 张岩
单位：商刚(主治医师 医学硕士 哈尔滨242医院皮肤科 150066)；陈艳(哈尔滨242医院)；张岩(哈尔滨医科大学附属皮肤科 教授 主治医师)
关键词：银屑病；IL-8；免疫组化
航空航天医药990301 摘要 目的：为研究白细胞介素8(IL-8)，在寻常型银屑病病理形成的持续性作用；方法：我们采取按时间顺序连续性取材，对其用抗IL-8抗体进行免疫组化测定；结果：早期病理变化轻微的皮损已经有了IL-8的表达，随着病理变化的日益典型化，IL-8的沉积部位下移，由表皮下层至真皮层；结论：IL-8是贯穿于寻常型银屑病病理的发生、发展的重要启动因素之一。
Study on continous effect taken by IL-8 to
, http://www.100md.com
formation of dermat pathology of psoriasis
Shang Gang,Chen Yan,Zhang Yan
Harbin 242 hospital(150066)
Abstract OBJECTIVE：In order to know how IL-8 take continous effect to formation of dermal pathology of psoriasis; METHODS：We took fresh biopsy speimens of acute eruptive guttate psoriasis,according to duration of its appearance and made them stained with IL-8,RESULTS:IL-8 can be marked in the reratincytes in early stage of psoriasis,and moves downward to the deepth of epidermal and dermal as the dermal patho logy is gradually formed.CONLUSION:IL-8 is one of important facts which set up the mechanism of psoriasis.
, 百拇医药
Key words Psoriasis IL-8 immunohistochemical method
近几年，国内外对寻常型银屑病的研究，虽然都集中在免疫异常上，尤其是细胞因子是研究的热点，但对某一因子在整个病理过程中的作用，尚未有人报道；我们按发疹时间顺序及形态学变化顺序从寻常型银屑病病人中取材，应用免疫组化的方法，进行IL-8测定，得到了阳性结果，并阐述其结果的理论意义。
1 资料与方法
1.1 取材 临床已确诊为寻常型银屑病12例，正常人3例，诊前1个月未经任何内用及外用治疗。患者自愿的情况下，以2%利多卡因局麻，用6mm钻刀，钻取皮损2块，放入3%多聚甲醛，5%戊二醛溶液中固定。取材标准：发疹1～2天，外观为1个针鼻大小，几乎没有鳞屑的丘疹；5～6天，外观为2个针鼻大小，有微薄的鳞屑的淡红色丘疹；7～14天，火柴头大小，有明显鳞屑的红色丘疹，基底有轻度浸润；30天，肉眼可看到较厚的鳞屑，基底浸润明显的暗红色丘疹或斑块。
, http://www.100md.com
1.2 IL-8测定方法：①石蜡切片常规脱蜡、水洗。②0.3%H2O2甲醇溶液阻断内源性过氧化酶30分钟。③0.01PH7.3的磷酸缓冲液(以下称PBS)冲洗3次，每次5分钟。④滴加第1抗体(兔抗IL-8单克隆抗体×200倍，西安第四军医大学提供)，湿合内室温反应1小时。⑤PBS冲洗后，滴加第2抗体(生物素化羊抗鼠IgG酶标抗体×50倍，DAX0公司提供)湿合室温反应30分钟。⑥PBS冲洗后滴加混合物(生物素与辣根过氧化物酶结合再与卵白素按比例混合×200倍)湿合内室温反应30分钟。⑦经PBS冲洗后，DAB显色液显色5分钟～10分钟，0.05Mtris缓冲液PH7.6100ml，加29mgDAB加5mlH2O2。⑧流水冲洗5分钟后苏木素或甲基绿染核。⑨常规染色、固封、上镜。
2 结果
见附表。正常皮肤未发现阳性结果。
, 百拇医药
寻常型银屑病连续性皮损的抗IL-8抗体免疫组化结果
表皮免疫病理形态
真皮免疫病理形态
发疹
1～2天
角质层完整，真皮表皮间界线和缓，高倍镜下基底细胞排列整齐，细胞质及细胞介桥被染成棕黄色，位于角质层下的角细胞较密集，靠近真皮处染色较疏。
真皮深层中，炎细胞聚集，细胞未有被染为棕黄色的细胞。
发疹
4～5天
表皮增厚，表皮与真皮交界线不规则，高倍镜下细胞排列不整齐，角化不全，细胞质及细胞间桥被染为棕黄色，靠近真皮处染色不密集。
, 百拇医药
真皮炎细胞浸润密集高倍镜真皮毛细血管周围的炎细胞呈袖口状外观，细胞为单个核细胞。
发疹
7～14天
30天
表皮过度增生，表皮突深入真皮，角化不全；30天皮损有munro微脓疡，表皮突被染成棕黄色，细胞质及细胞间皆为棕黄色。
真皮炎细胞聚集，高倍镜下，有中粒粒细胞侵入表皮，形成带状，聚集的炎细胞核周围被染成棕黄色。
3 讨论
本实验通过对不同发疹时间的皮损进行IL-8的免疫测定，结果显示角细胞内及细胞间桥有大量棕黄色物质存在，由于第1抗体是抗IL-8抗体，并被稀释200倍，在发疹1～2天及4～5天表皮病理变化不明显及极轻微时，角细胞内及细胞间便有了IL-8的存在。这时真皮炎细胞的聚集在真皮的深处，而IL-8沉积主要在靠近角质层的上部角朊细胞居多，而正常皮肤与未累及皮肤未发现，提示角细胞内IL-8可能是寻常型银屑病早期病理变化的重要免疫学指标。Sticherling等用天然IL-8单克隆抗体(52E8)研究IL-8的组织分布，发现正常皮肤和银屑病皮肤的基底层上部的角朊细胞都可见细胞内阳性染色，但银屑病染色较强〔1〕。我们的实验结果与其在部位上相似，但本实验正常人未见。发疹7～14天及30天的皮损，IL-8主要存在于表皮突接近真皮处，这与“Nickoloff等用免疫组化技术结果相似，Nickoloff等发现银屑病皮损内IL-8存在于基底细胞〔2〕。我们所做，除了基底朊细细胞，角细胞也有明显表达。这时光镜下，真皮的炎细胞离表皮很近，我们知道：IL-8是中性粒细胞及T淋巴细胞的趋化剂〔3〕，表明表皮突表达IL-8与中性粒细胞进入表皮形成murre微脓疡及表皮炎细胞浸润，从而诱发过度增生有关。因此，IL-8是引发表皮炎性增生的重要启动因。这时，真皮内，炎细胞聚集处，炎细胞核外被染为棕黄色。表明真皮内亦有IL-8的存在。这个结果在银屑病的研究中，国内外文献未见报道。人IL-8是一种多源性细胞因子，可来自单核细胞〔4〕、巨噬细胞〔5〕、2倍体皮肤纤维细胞及血管内皮细胞等〔6〕。schroder等发现银屑病皮损表皮内有大量的IL-8存在，认为表皮细胞亦是IL-8的来源之一〔7〕。有人用体外培养人类真皮，并使用IL-1及TNF刺激真皮内的纤维细胞，位于炎细胞聚集处，为单个细胞，有可能是淋巴细胞。有待于进一步证实。IL-8对T淋巴细胞都有较强趋化作用，在后期出现IL-8则肯定与真皮炎症反应扩大有关。这样，表皮与真皮都表现IL-8的存在，表明IL-8在银屑病中，对其病理形成，贯穿于整个过程，它是表皮炎症增生及真皮炎症增生的重要中介，它可以引发炎症的聚集及扩展，因此它是重要的启动因。 参考文献
, http://www.100md.com
1 Stecherling M et al.J-snvest-Dermatol,1991 Jut;97(1):73-9
2 Nickoloff BJ et al.Am-J-Pathol.1991;Jani 138(1);129-40
3 Barkar;J-NWN-Lancet,1991;388(8761);227-30
4 Arch-Dermatol Res 1985;278(2):92-6
5 Wolpe SD et al.J Exp Med;1988;Febl;167(2)570-81
6 Larsen CG et al.Science;1989 Mar 7;243(4897):1464-6
7 Schroder-JM et al.J-Invest-Dermatol;1992 Feb;98(2):241-7
1999年6月6日收稿, http://www.100md.com
单位：商刚(主治医师 医学硕士 哈尔滨242医院皮肤科 150066)；陈艳(哈尔滨242医院)；张岩(哈尔滨医科大学附属皮肤科 教授 主治医师)
关键词：银屑病；IL-8；免疫组化
航空航天医药990301 摘要 目的：为研究白细胞介素8(IL-8)，在寻常型银屑病病理形成的持续性作用；方法：我们采取按时间顺序连续性取材，对其用抗IL-8抗体进行免疫组化测定；结果：早期病理变化轻微的皮损已经有了IL-8的表达，随着病理变化的日益典型化，IL-8的沉积部位下移，由表皮下层至真皮层；结论：IL-8是贯穿于寻常型银屑病病理的发生、发展的重要启动因素之一。
Study on continous effect taken by IL-8 to
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formation of dermat pathology of psoriasis
Shang Gang,Chen Yan,Zhang Yan
Harbin 242 hospital(150066)
Abstract OBJECTIVE：In order to know how IL-8 take continous effect to formation of dermal pathology of psoriasis; METHODS：We took fresh biopsy speimens of acute eruptive guttate psoriasis,according to duration of its appearance and made them stained with IL-8,RESULTS:IL-8 can be marked in the reratincytes in early stage of psoriasis,and moves downward to the deepth of epidermal and dermal as the dermal patho logy is gradually formed.CONLUSION:IL-8 is one of important facts which set up the mechanism of psoriasis.
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Key words Psoriasis IL-8 immunohistochemical method
近几年，国内外对寻常型银屑病的研究，虽然都集中在免疫异常上，尤其是细胞因子是研究的热点，但对某一因子在整个病理过程中的作用，尚未有人报道；我们按发疹时间顺序及形态学变化顺序从寻常型银屑病病人中取材，应用免疫组化的方法，进行IL-8测定，得到了阳性结果，并阐述其结果的理论意义。
1 资料与方法
1.1 取材 临床已确诊为寻常型银屑病12例，正常人3例，诊前1个月未经任何内用及外用治疗。患者自愿的情况下，以2%利多卡因局麻，用6mm钻刀，钻取皮损2块，放入3%多聚甲醛，5%戊二醛溶液中固定。取材标准：发疹1～2天，外观为1个针鼻大小，几乎没有鳞屑的丘疹；5～6天，外观为2个针鼻大小，有微薄的鳞屑的淡红色丘疹；7～14天，火柴头大小，有明显鳞屑的红色丘疹，基底有轻度浸润；30天，肉眼可看到较厚的鳞屑，基底浸润明显的暗红色丘疹或斑块。
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1.2 IL-8测定方法：①石蜡切片常规脱蜡、水洗。②0.3%H2O2甲醇溶液阻断内源性过氧化酶30分钟。③0.01PH7.3的磷酸缓冲液(以下称PBS)冲洗3次，每次5分钟。④滴加第1抗体(兔抗IL-8单克隆抗体×200倍，西安第四军医大学提供)，湿合内室温反应1小时。⑤PBS冲洗后，滴加第2抗体(生物素化羊抗鼠IgG酶标抗体×50倍，DAX0公司提供)湿合室温反应30分钟。⑥PBS冲洗后滴加混合物(生物素与辣根过氧化物酶结合再与卵白素按比例混合×200倍)湿合内室温反应30分钟。⑦经PBS冲洗后，DAB显色液显色5分钟～10分钟，0.05Mtris缓冲液PH7.6100ml，加29mgDAB加5mlH2O2。⑧流水冲洗5分钟后苏木素或甲基绿染核。⑨常规染色、固封、上镜。
2 结果
见附表。正常皮肤未发现阳性结果。
, 百拇医药
寻常型银屑病连续性皮损的抗IL-8抗体免疫组化结果
表皮免疫病理形态
真皮免疫病理形态
发疹
1～2天
角质层完整，真皮表皮间界线和缓，高倍镜下基底细胞排列整齐，细胞质及细胞介桥被染成棕黄色，位于角质层下的角细胞较密集，靠近真皮处染色较疏。
真皮深层中，炎细胞聚集，细胞未有被染为棕黄色的细胞。
发疹
4～5天
表皮增厚，表皮与真皮交界线不规则，高倍镜下细胞排列不整齐，角化不全，细胞质及细胞间桥被染为棕黄色，靠近真皮处染色不密集。
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真皮炎细胞浸润密集高倍镜真皮毛细血管周围的炎细胞呈袖口状外观，细胞为单个核细胞。
发疹
7～14天
30天
表皮过度增生，表皮突深入真皮，角化不全；30天皮损有munro微脓疡，表皮突被染成棕黄色，细胞质及细胞间皆为棕黄色。
真皮炎细胞聚集，高倍镜下，有中粒粒细胞侵入表皮，形成带状，聚集的炎细胞核周围被染成棕黄色。
3 讨论
本实验通过对不同发疹时间的皮损进行IL-8的免疫测定，结果显示角细胞内及细胞间桥有大量棕黄色物质存在，由于第1抗体是抗IL-8抗体，并被稀释200倍，在发疹1～2天及4～5天表皮病理变化不明显及极轻微时，角细胞内及细胞间便有了IL-8的存在。这时真皮炎细胞的聚集在真皮的深处，而IL-8沉积主要在靠近角质层的上部角朊细胞居多，而正常皮肤与未累及皮肤未发现，提示角细胞内IL-8可能是寻常型银屑病早期病理变化的重要免疫学指标。Sticherling等用天然IL-8单克隆抗体(52E8)研究IL-8的组织分布，发现正常皮肤和银屑病皮肤的基底层上部的角朊细胞都可见细胞内阳性染色，但银屑病染色较强〔1〕。我们的实验结果与其在部位上相似，但本实验正常人未见。发疹7～14天及30天的皮损，IL-8主要存在于表皮突接近真皮处，这与“Nickoloff等用免疫组化技术结果相似，Nickoloff等发现银屑病皮损内IL-8存在于基底细胞〔2〕。我们所做，除了基底朊细细胞，角细胞也有明显表达。这时光镜下，真皮的炎细胞离表皮很近，我们知道：IL-8是中性粒细胞及T淋巴细胞的趋化剂〔3〕，表明表皮突表达IL-8与中性粒细胞进入表皮形成murre微脓疡及表皮炎细胞浸润，从而诱发过度增生有关。因此，IL-8是引发表皮炎性增生的重要启动因。这时，真皮内，炎细胞聚集处，炎细胞核外被染为棕黄色。表明真皮内亦有IL-8的存在。这个结果在银屑病的研究中，国内外文献未见报道。人IL-8是一种多源性细胞因子，可来自单核细胞〔4〕、巨噬细胞〔5〕、2倍体皮肤纤维细胞及血管内皮细胞等〔6〕。schroder等发现银屑病皮损表皮内有大量的IL-8存在，认为表皮细胞亦是IL-8的来源之一〔7〕。有人用体外培养人类真皮，并使用IL-1及TNF刺激真皮内的纤维细胞，位于炎细胞聚集处，为单个细胞，有可能是淋巴细胞。有待于进一步证实。IL-8对T淋巴细胞都有较强趋化作用，在后期出现IL-8则肯定与真皮炎症反应扩大有关。这样，表皮与真皮都表现IL-8的存在，表明IL-8在银屑病中，对其病理形成，贯穿于整个过程，它是表皮炎症增生及真皮炎症增生的重要中介，它可以引发炎症的聚集及扩展，因此它是重要的启动因。 参考文献
, http://www.100md.com
1 Stecherling M et al.J-snvest-Dermatol,1991 Jut;97(1):73-9
2 Nickoloff BJ et al.Am-J-Pathol.1991;Jani 138(1);129-40
3 Barkar;J-NWN-Lancet,1991;388(8761);227-30
4 Arch-Dermatol Res 1985;278(2):92-6
5 Wolpe SD et al.J Exp Med;1988;Febl;167(2)570-81
6 Larsen CG et al.Science;1989 Mar 7;243(4897):1464-6
7 Schroder-JM et al.J-Invest-Dermatol;1992 Feb;98(2):241-7
1999年6月6日收稿, http://www.100md.com