癌基因C-myc在实验性大鼠肝癌变过程中的表达
作者：施公胜 韩新华 王淼 顾美珍 黄剑飞 曹翔 孙超
单位：南通医学院附属医院病理科，南通226001
关键词：癌基因蛋白；实验性肝癌；癌前病变；大鼠
南通医学院学报000213 [摘 要] 目的:探讨癌基因 C-myc产物在实验性大鼠肝癌变过程中作用。方法:应用C-myc癌基因蛋白单克隆抗体，采用免疫组化SP方法，检测分析大鼠肝癌变过程中C-myc蛋白表达。结果:诱癌早期增生的肝细胞及变异肝细胞灶中即显示C-myc的过度表达，并随增生肝细胞结节的形成和演进所表达的细胞也增多。结论：癌基因C-myc激活后其产物超量表达参与了实验性肝癌的发生和发展，也为人类肝癌提供了一个参考诊断标志。
[中图分类号] R730.21 [文献标识码] A
[文章编号]1000-2057(2000)02-0148-02
, 百拇医药
A STUDY OF EXPRESSION OF C-myc IN EXPERIMENTAL PRECANCEROUS LESION OF LIVER RATS
SHI Gongsheng，HAN Xinhua，WANG Miao
(Department of Pathology , the Affiliated Hospital of Nantong Medical College , Nantong 226001)
[Abstract] Objective:To study the effect of C-myc oncogene protein in precancerous lesions of liver of rat.Method: The expression of C-myc oncogene protein was examined with the monoclonal antibody of C-myc and immunohistochemical S-P method in precancerous lesions of liver in rat. Result : The results showed that overexpression of C-myc was presented in the proliferated hepatocytes foci during the early stage of hepatocarcinogenesis and with the formation and progression of hyperplastic hepatocytic nodules , the overexpression cells increased . Conclusion : The overexpression of C-myc oncogene was directly involved in the initiation and progression of hepatocarcinoma in rat and could be used as a consultative marker for early diagnosis of human hepatocarcinoma.
, 百拇医药
[Key words] oncoprotein;precancerous;lesion of liver;rat
为了了解C-myc癌基因在化学诱发肝癌过程中的作用，我们采用SP免疫组化方法，着眼于癌基因C-myc在肝癌发生的启动和促进阶段的表达特点及其于病理形态学改变的关系，从分子水平探讨肝癌的发病机理。
1 材料与方法
1.1 鼠肝癌模型和标本 以封闭群Sprage Dawang(SD)雄性大鼠48只，体重140～180g，由南通医学院实验动物中心提供，随机分成8组，每组6只，任取其中1组为对照组，1组为实验备用组，6组为实验组。 实验(包括实验备用组)以含有0.05% 2-FAA(2-Fluorenglaclamide,2-乙酰氨基芴，Sigma公司出品)的颗粒饲料喂养，每隔2周切取肝脏，放入10%甲醛液固定，对照组同样处理。
, http://www.100md.com
1.2 方法 标本经石蜡包埋，4μm 厚切片作HE染色及免疫组化研究，采用SP法。C-myc单克隆抗体及SP试剂盒均为美国Maxim Biotech Inc公司产品。每例用TBS代替第一抗体作阴性对照。
1.3 阳性细胞半定量标准 高倍镜下，每张切片选择上、下、左、右病变区计完整细胞数，求其均数，Ⅰ级阳性细胞数为5%～10%，Ⅱ级阳性细胞数为11%～20%，Ⅲ级阳性细胞数为21%～30%，Ⅳ级阳性细胞数>30%。
2 结 果
2.1 肝脏病理改变 巨检，实验组肝表面增粗，失去正常颜色，呈灰黄色，诱癌8～12周，出现弥漫性粟粒到黄豆大小的结节。镜检：诱癌早期(1～4周)部分肝细胞肿胀，疏松变性(图1)。小叶周边可见散在增生的小圆细胞，5～8周小叶周边区出现增生的小肝细胞，体积略小，胞浆嗜碱性，核深染，圆形，并在小叶周边聚集成灶(图2)。8周后，可见大小不一的肝细胞增生灶和增生结节。诱癌晚期(10～12周)小叶结构大部破坏，代之大小不一癌巢结节(图3)。
, 百拇医药
图1 肝细胞肿胀，疏松变性及气球样变性 HE×200
图2 右上角为癌结节，中央为增生的小肝细胞；左下角示肝组织 HE×100
图3 左下角为癌结节；中上部分为增生的小肝细胞，其体积略小，胞浆嗜碱，圆形、卵圆形或三角形 HE×200
2.2 诱癌过程中C-myc表达特点 实验动物在诱癌1～4周即见到肝组织内有少量阳性细胞，主要分布在肝小叶周边增生的肝细胞内，免疫酶反应为棕黄色颗粒，主要定位于细胞浆内。随着诱癌时间延长，阳性细胞不断增加，结节周边常有较多反应较强的阳性细胞。诱癌中后期有一定结构异型明显的结节，常被阳性细胞占据(图4)，但不是所有病变均有阳性细胞，同一病变有的细胞呈阳性，有的则阴性。根据C-myc呈色范围、强弱进行半定量，结果见表1。
, 百拇医药
图4 C-myc阳性产物定位于癌细胞胞浆和胞核 免疫酶标×200
表1 C-myc免疫酶反应半定量 诱癌时间
(周)
n
分 级
平均数
Ⅰ
Ⅱ
Ⅲ
Ⅳ
2
4
, http://www.100md.com 6
8
10
12
6
6
6
6
6
6
6
5
4
0
, http://www.100md.com
0
0
0
1
2
2
1
1
0
0
0
4
3
2
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0
0
0
0
2
3
1.0
1.2
1.66
2.66
3.16
3.33
3 讨 论
, http://www.100md.com 目前，关于化学致癌剂作用于肝脏在短时间后癌基因原位表达的报道甚少。实验性肝癌的发生需要经过不同病变过程，如肝细胞的变性坏死、肝变异细胞灶、肝细胞增大结节和肝细胞肝癌等。本实验结果表明在诱癌早期增生的肝细胞中显示C-myc过度表达，随诱癌过程的进展，C-myc癌基因高表达的细胞不断增加，且分布在增生肝细胞灶和结节及癌变灶内，提示癌基因的异常表达可能是癌变过程中较早出现的分子改变，与肝癌的启动及癌性增生相关。因为早期首先表达癌基因的细胞是肝小叶周边增生的小肝细胞，后者源于肝内干细胞[1]。在诱癌过程中它们逐步向嗜碱性细胞及癌细胞转化。由此提示小肝细胞可能是本模型最早癌细胞的前身，而嗜碱性的细胞结节则是较重要的癌前病变[2] 。所以，本结果又从分子角度支持肝细胞来源于肝内干细胞的观点。
[参考文献]
[1] Sell S. Cellular events during Hepato-carcinegenesis and the question of permalignancy[J]. Adv Cancer Res,1987,48∶37.
[2] Sell s,Dunsford HA,Evidence for the stem cell origin of hepatocelluar carcinoma and Cholangio-Carcinoma[J].Am J Pathol,1989,134∶1347.
(1999-12-13收稿), 百拇医药
单位：南通医学院附属医院病理科，南通226001
关键词：癌基因蛋白；实验性肝癌；癌前病变；大鼠
南通医学院学报000213 [摘 要] 目的:探讨癌基因 C-myc产物在实验性大鼠肝癌变过程中作用。方法:应用C-myc癌基因蛋白单克隆抗体，采用免疫组化SP方法，检测分析大鼠肝癌变过程中C-myc蛋白表达。结果:诱癌早期增生的肝细胞及变异肝细胞灶中即显示C-myc的过度表达，并随增生肝细胞结节的形成和演进所表达的细胞也增多。结论：癌基因C-myc激活后其产物超量表达参与了实验性肝癌的发生和发展，也为人类肝癌提供了一个参考诊断标志。
[中图分类号] R730.21 [文献标识码] A
[文章编号]1000-2057(2000)02-0148-02
, 百拇医药
A STUDY OF EXPRESSION OF C-myc IN EXPERIMENTAL PRECANCEROUS LESION OF LIVER RATS
SHI Gongsheng，HAN Xinhua，WANG Miao
(Department of Pathology , the Affiliated Hospital of Nantong Medical College , Nantong 226001)
[Abstract] Objective:To study the effect of C-myc oncogene protein in precancerous lesions of liver of rat.Method: The expression of C-myc oncogene protein was examined with the monoclonal antibody of C-myc and immunohistochemical S-P method in precancerous lesions of liver in rat. Result : The results showed that overexpression of C-myc was presented in the proliferated hepatocytes foci during the early stage of hepatocarcinogenesis and with the formation and progression of hyperplastic hepatocytic nodules , the overexpression cells increased . Conclusion : The overexpression of C-myc oncogene was directly involved in the initiation and progression of hepatocarcinoma in rat and could be used as a consultative marker for early diagnosis of human hepatocarcinoma.
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[Key words] oncoprotein;precancerous;lesion of liver;rat
为了了解C-myc癌基因在化学诱发肝癌过程中的作用，我们采用SP免疫组化方法，着眼于癌基因C-myc在肝癌发生的启动和促进阶段的表达特点及其于病理形态学改变的关系，从分子水平探讨肝癌的发病机理。
1 材料与方法
1.1 鼠肝癌模型和标本 以封闭群Sprage Dawang(SD)雄性大鼠48只，体重140～180g，由南通医学院实验动物中心提供，随机分成8组，每组6只，任取其中1组为对照组，1组为实验备用组，6组为实验组。 实验(包括实验备用组)以含有0.05% 2-FAA(2-Fluorenglaclamide,2-乙酰氨基芴，Sigma公司出品)的颗粒饲料喂养，每隔2周切取肝脏，放入10%甲醛液固定，对照组同样处理。
, http://www.100md.com
1.2 方法 标本经石蜡包埋，4μm 厚切片作HE染色及免疫组化研究，采用SP法。C-myc单克隆抗体及SP试剂盒均为美国Maxim Biotech Inc公司产品。每例用TBS代替第一抗体作阴性对照。
1.3 阳性细胞半定量标准 高倍镜下，每张切片选择上、下、左、右病变区计完整细胞数，求其均数，Ⅰ级阳性细胞数为5%～10%，Ⅱ级阳性细胞数为11%～20%，Ⅲ级阳性细胞数为21%～30%，Ⅳ级阳性细胞数>30%。
2 结 果
2.1 肝脏病理改变 巨检，实验组肝表面增粗，失去正常颜色，呈灰黄色，诱癌8～12周，出现弥漫性粟粒到黄豆大小的结节。镜检：诱癌早期(1～4周)部分肝细胞肿胀，疏松变性(图1)。小叶周边可见散在增生的小圆细胞，5～8周小叶周边区出现增生的小肝细胞，体积略小，胞浆嗜碱性，核深染，圆形，并在小叶周边聚集成灶(图2)。8周后，可见大小不一的肝细胞增生灶和增生结节。诱癌晚期(10～12周)小叶结构大部破坏，代之大小不一癌巢结节(图3)。
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图1 肝细胞肿胀，疏松变性及气球样变性 HE×200
图2 右上角为癌结节，中央为增生的小肝细胞；左下角示肝组织 HE×100
图3 左下角为癌结节；中上部分为增生的小肝细胞，其体积略小，胞浆嗜碱，圆形、卵圆形或三角形 HE×200
2.2 诱癌过程中C-myc表达特点 实验动物在诱癌1～4周即见到肝组织内有少量阳性细胞，主要分布在肝小叶周边增生的肝细胞内，免疫酶反应为棕黄色颗粒，主要定位于细胞浆内。随着诱癌时间延长，阳性细胞不断增加，结节周边常有较多反应较强的阳性细胞。诱癌中后期有一定结构异型明显的结节，常被阳性细胞占据(图4)，但不是所有病变均有阳性细胞，同一病变有的细胞呈阳性，有的则阴性。根据C-myc呈色范围、强弱进行半定量，结果见表1。
, 百拇医药
图4 C-myc阳性产物定位于癌细胞胞浆和胞核 免疫酶标×200
表1 C-myc免疫酶反应半定量 诱癌时间
(周)
n
分 级
平均数
Ⅰ
Ⅱ
Ⅲ
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2
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, http://www.100md.com 目前，关于化学致癌剂作用于肝脏在短时间后癌基因原位表达的报道甚少。实验性肝癌的发生需要经过不同病变过程，如肝细胞的变性坏死、肝变异细胞灶、肝细胞增大结节和肝细胞肝癌等。本实验结果表明在诱癌早期增生的肝细胞中显示C-myc过度表达，随诱癌过程的进展，C-myc癌基因高表达的细胞不断增加，且分布在增生肝细胞灶和结节及癌变灶内，提示癌基因的异常表达可能是癌变过程中较早出现的分子改变，与肝癌的启动及癌性增生相关。因为早期首先表达癌基因的细胞是肝小叶周边增生的小肝细胞，后者源于肝内干细胞[1]。在诱癌过程中它们逐步向嗜碱性细胞及癌细胞转化。由此提示小肝细胞可能是本模型最早癌细胞的前身，而嗜碱性的细胞结节则是较重要的癌前病变[2] 。所以，本结果又从分子角度支持肝细胞来源于肝内干细胞的观点。
[参考文献]
[1] Sell S. Cellular events during Hepato-carcinegenesis and the question of permalignancy[J]. Adv Cancer Res,1987,48∶37.
[2] Sell s,Dunsford HA,Evidence for the stem cell origin of hepatocelluar carcinoma and Cholangio-Carcinoma[J].Am J Pathol,1989,134∶1347.
(1999-12-13收稿), 百拇医药