成人型多囊肾病产前基因诊断一例
作者：丁兰 张思仲 程璐
单位：丁兰 张思仲 程璐 华西医科大学附属第一医院遗传室 成都 610041
关键词：
中华妇产科杂志990725 成人型多囊肾病(APKD)是人类最常见的一种多系统危害严重的单基因遗传病，目前尚无有效的预防和根治措施，产前诊断可预防该病患儿的出生。PKD1基因定位于16p13.3，我们用与PKD1紧密连锁的4个微卫星SM6、CW4、CW2和KG8等对一APKD家系的风险胎儿进行了产前诊断，现报道如下。
APKD家系：先证者，26岁。为华西医科大学附属医院遗传咨询门诊患者。B超诊断为APKD，妊娠20周时抽取羊水40 ml。Ⅱ2，先证者母亲，50岁，B超及CT诊断为多囊肾；Ⅱ1，先证者父亲，正常；Ⅱ3，先证者舅舅，48岁，Ⅲ3(舅舅之子)，28岁，均B超确诊为多囊肾；Ⅲ2，先证者丈夫，28岁，正常。抽取该家系成员外周血约5 ml。外周血和羊水DNA按酚∶氯仿法抽提。引物序列及聚合酶链反应(PCR)扩增条件见文献[1]。采用10%聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染法分析PCR扩增结果。
结果 在先证者家系中，与PKD1连锁的CW4和KG8是有信息的，CW2和SM6是没有信息的。连锁分析结果表明，此APKD家系中致病基因与单倍型C3A2连锁，胎儿的单倍型组成为C1A1/C2A1，未从其受累母亲那里遗传C3A2单倍型，即未遗传携带PKD1致病基因的染色体。孕龄为20周的胎儿不是APKD携带者，故建议继续妊娠。随访先证者表明，足月娩出的胎儿为一正常男胎，与产前基因检查结果一致。
讨论 通过PCR扩增与PKD1紧密连锁的微卫星DNA进行APKD的产前基因诊断，仅需ng水平的模板DNA，即比经典的Southern分子杂交简便和快速， 是一种方便、快速和易于推广的方法。由于DNA用量甚微，将为用孕妇血中的胎儿细胞进行无创伤性的产前诊断奠定基础。在用微卫星DNA进行基因诊断时常遇到影子带和杂带问题，在用聚丙烯酰胺进行电泳时，甲叉双丙烯酰胺的比例是影响迁移率、影子带和杂带的一个重要因素。我们曾用甲叉双丙烯酰胺浓度为2.6%和5.3%的两种聚丙烯酰胺进行电泳，得到的PCR产物的迁移率和分辨率均有所不同。当甲叉双丙烯酰胺的浓度为5.3%时，杂带少，分辨率好。但不管主带的迁移率如何改变，他们都遵循孟德尔遗传规律，因此，用微卫星DNA进行连锁诊断是可行的。
参考文献
1 Belen Peral, Christopher J, Ward J L, et al. Evidence of linkage disequilibrium in the spanish polycystic kidney disease Ⅰ population. Am J Hum Genet, 1994, 54: 899-908.
(收稿：1998-05-06 修回：1999-03-15), http://www.100md.com
单位：丁兰 张思仲 程璐 华西医科大学附属第一医院遗传室 成都 610041
关键词：
中华妇产科杂志990725 成人型多囊肾病(APKD)是人类最常见的一种多系统危害严重的单基因遗传病，目前尚无有效的预防和根治措施，产前诊断可预防该病患儿的出生。PKD1基因定位于16p13.3，我们用与PKD1紧密连锁的4个微卫星SM6、CW4、CW2和KG8等对一APKD家系的风险胎儿进行了产前诊断，现报道如下。
APKD家系：先证者，26岁。为华西医科大学附属医院遗传咨询门诊患者。B超诊断为APKD，妊娠20周时抽取羊水40 ml。Ⅱ2，先证者母亲，50岁，B超及CT诊断为多囊肾；Ⅱ1，先证者父亲，正常；Ⅱ3，先证者舅舅，48岁，Ⅲ3(舅舅之子)，28岁，均B超确诊为多囊肾；Ⅲ2，先证者丈夫，28岁，正常。抽取该家系成员外周血约5 ml。外周血和羊水DNA按酚∶氯仿法抽提。引物序列及聚合酶链反应(PCR)扩增条件见文献[1]。采用10%聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染法分析PCR扩增结果。
结果 在先证者家系中，与PKD1连锁的CW4和KG8是有信息的，CW2和SM6是没有信息的。连锁分析结果表明，此APKD家系中致病基因与单倍型C3A2连锁，胎儿的单倍型组成为C1A1/C2A1，未从其受累母亲那里遗传C3A2单倍型，即未遗传携带PKD1致病基因的染色体。孕龄为20周的胎儿不是APKD携带者，故建议继续妊娠。随访先证者表明，足月娩出的胎儿为一正常男胎，与产前基因检查结果一致。
讨论 通过PCR扩增与PKD1紧密连锁的微卫星DNA进行APKD的产前基因诊断，仅需ng水平的模板DNA，即比经典的Southern分子杂交简便和快速， 是一种方便、快速和易于推广的方法。由于DNA用量甚微，将为用孕妇血中的胎儿细胞进行无创伤性的产前诊断奠定基础。在用微卫星DNA进行基因诊断时常遇到影子带和杂带问题，在用聚丙烯酰胺进行电泳时，甲叉双丙烯酰胺的比例是影响迁移率、影子带和杂带的一个重要因素。我们曾用甲叉双丙烯酰胺浓度为2.6%和5.3%的两种聚丙烯酰胺进行电泳，得到的PCR产物的迁移率和分辨率均有所不同。当甲叉双丙烯酰胺的浓度为5.3%时，杂带少，分辨率好。但不管主带的迁移率如何改变，他们都遵循孟德尔遗传规律，因此，用微卫星DNA进行连锁诊断是可行的。
参考文献
1 Belen Peral, Christopher J, Ward J L, et al. Evidence of linkage disequilibrium in the spanish polycystic kidney disease Ⅰ population. Am J Hum Genet, 1994, 54: 899-908.
(收稿：1998-05-06 修回：1999-03-15), http://www.100md.com