不形成菌落的细菌L型培养方法探讨
作者：冯锡才 唐素芳 林特夫
单位：冯锡才(安徽省宿州市妇幼保健站，234000)；唐素芳(安徽省宿州市妇幼保健站，234000)；林特夫(蚌埠医学院 微生物学教研室，安徽 蚌埠 233003)
关键词：细菌L型；培养基；不形成菌落；盲刮盲传法
蚌埠医学院学报000337
〔摘要〕 目的：对在液体L型培养基中混浊生长 ，而在固体L型培养基中不形成菌落的细菌L型的培养方法进行研究。方法：在改良降低的氯化钠含量固体L型培养基中 ，加入镁离子，采用盲刮盲传法。结果：发现普通L型培养基培养阳性率为46.15%，改良L型培养基培养 阳性率为79.49%。结论：改良L型培养基优于普通L型培养基。
〔中国图书资料分类法分类号〕 R 378；R 446.5 〔文献标识码〕 A
, 百拇医药
〔文章编号〕 1000-2200(2000)03-0213-02
对细菌L型的培养，通常多从高渗、高营养的角度配制培养基，取 得一定效果。在笔者工作中发现，仍有部分标本在L型液体培养基中呈混浊生长， 而在固体L型培养基不生长；笔者采用降低培养基中氯化钠的含量，加入适当的镁离子 ，用盲刮盲传的方式接种，使细菌L型的阳性检出率明显提高。
1 材料与方法
1.1 材料 (1)L型液体培养基中呈混浊生长，接种L型固体培养基72 h未见菌落形成者标本 39份。(2)常规L型固体培养基〔1〕。(3)含有镁离子的L型培养基：新鲜牛肉汤900 m l,日本蛋白胨20 g,琼脂粉10 g,氯化钠20 g,硫酸镁20 g,调pH值至7.6，血浆100 ml。
1.2 接种方法 采用盲刮盲传法，取混浊生长后培养液0.1 ml，涂布于改良的L型平板 ，37 ℃培养72 h后观察平板表面菌落形成情况，对无菌落形成或表面呈膜状者进行盲刮盲传，即 用接种环在平板表面盲刮后，种入装有0.2 ml增菌管内制成悬液，取0.1 ml传种下一代。同 时盲刮涂片，革兰染色，观察细菌形态，并用普通L型平板作对照培养。
, 百拇医药
2 结果
本组39份标本，经液体L型增菌培养3～7天，均出现不同程度的混浊现象，部分标本红 细胞由红色变为暗黑色，个别标本出现溶血现象，接种普通L型平板，72 h无菌落形成。将 上述标本以盲刮盲传法接种普通L型平板，盲传三代，3例见有颗粒状菌落，4例有膜状形成 ，五代传种后，有典型菌落4例，颗粒状菌落5例，9例呈膜状生长。涂片见有巨形体、长丝 体和原生小体。阳性18例，阳性率46.1%。用降低氯化钠含量，加入镁离子的L型平板 ，盲刮盲传 二代，培养基表面呈膜状生长者7例，三代传种后，可见颗粒菌落14例，典型L型菌落4例。 盲刮盲传五代，典型L型菌落11例，颗粒状菌落18例，呈膜状生长2例。二代、三代、五代阳 性率分别为17.95%、46.15%、79.49%，均高于普通固体L型培养基(P<0.05～P< 0.01)。
两种培养方法结果的配对比较见表1。
表1 两种培养方法结果的配对比较 普通固体
, 百拇医药
L型培养基
(加镁离子的固体L型培养基
二代
三代
五代
阳性
阴性
合计
阳性
阴性
合计
阳性
阴性
, 百拇医药
合计
阳性
0
0
0
3
4
7
18
0
18
阴性
7
32
, http://www.100md.com
39
15
17
32
13
8
21
合计
7
32
39
18
21
39
, 百拇医药
31
8
39
χ2配对
5.14
5.26
11.08
P
<0.05
<0.05
<0.01
经回复鉴定，金黄色葡萄球菌27例，大肠埃希菌2例，链球菌1例，类白喉杆菌1例。仍 有8例未见 菌落形成，但涂片革兰染色可见有丝状体、巨型体、原球体和类白喉样杆菌，着染深浅不一 。
, 百拇医药
3 讨论
细菌L型由于细胞壁的缺损程度不同，对外环境渗透压的要求也不尽相同〔1〕。 有的L型细菌必须在高渗环境中才能生长，而有的在等渗或低渗环境中也能生长。目前L型培 养 常用氯化钠、琥珀酸钠、蔗糖等作渗透压稳定剂，但仍没有一个对各种细菌L型均合适的理 想浓度。一种浓度的渗透压稳定剂要适应众多L型细菌生长较为困难。本组标本用降低氯化 钠浓 度，加入镁离子，阳性率明显提高，但仍有8例无菌落形成，是否与渗透压稳定剂的浓度有关，尚待进一步探讨。L型细菌部分或完全缺壁后，其生物学特性也有不同程度 的改变〔2〕，如生长速度减 慢，细菌形态不典型，营养要求、微量元素的摄取等都会有所改变。一般认为二价 阳离子具有稳定细胞膜的作用，在培养基中加入适量的镁离子，可以减低膜的损伤 ，有利于细菌L型的生长。
典型的L型菌落容易辨认，对不典型甚至无菌落形成的细菌L型，常误为无菌生长而造成漏诊 。在看不到菌落的情况下，采用盲刮盲传法〔3〕也是提高检出率的一个重要手段。
作者简介：冯锡才(1953-)，男，安徽阜阳人，主管技师.
〔参考文献〕
〔1〕 黄谷良，林特夫.细菌L型与疾病〔M〕.北京：学 苑出版社，1991.67.
〔2〕 冯锡才.细菌L型特殊型〔J〕.贵州医药，1995，19(Suppl) ∶321.
〔3〕 李影林.中华医学检验全书〔M〕.北京：人民卫生出版社， 1996.1 045.
收稿日期：1999-11-01, 百拇医药
单位：冯锡才(安徽省宿州市妇幼保健站，234000)；唐素芳(安徽省宿州市妇幼保健站，234000)；林特夫(蚌埠医学院 微生物学教研室，安徽 蚌埠 233003)
关键词：细菌L型；培养基；不形成菌落；盲刮盲传法
蚌埠医学院学报000337
〔摘要〕 目的：对在液体L型培养基中混浊生长 ，而在固体L型培养基中不形成菌落的细菌L型的培养方法进行研究。方法：在改良降低的氯化钠含量固体L型培养基中 ，加入镁离子，采用盲刮盲传法。结果：发现普通L型培养基培养阳性率为46.15%，改良L型培养基培养 阳性率为79.49%。结论：改良L型培养基优于普通L型培养基。
〔中国图书资料分类法分类号〕 R 378；R 446.5 〔文献标识码〕 A
, 百拇医药
〔文章编号〕 1000-2200(2000)03-0213-02
对细菌L型的培养，通常多从高渗、高营养的角度配制培养基，取 得一定效果。在笔者工作中发现，仍有部分标本在L型液体培养基中呈混浊生长， 而在固体L型培养基不生长；笔者采用降低培养基中氯化钠的含量，加入适当的镁离子 ，用盲刮盲传的方式接种，使细菌L型的阳性检出率明显提高。
1 材料与方法
1.1 材料 (1)L型液体培养基中呈混浊生长，接种L型固体培养基72 h未见菌落形成者标本 39份。(2)常规L型固体培养基〔1〕。(3)含有镁离子的L型培养基：新鲜牛肉汤900 m l,日本蛋白胨20 g,琼脂粉10 g,氯化钠20 g,硫酸镁20 g,调pH值至7.6，血浆100 ml。
1.2 接种方法 采用盲刮盲传法，取混浊生长后培养液0.1 ml，涂布于改良的L型平板 ，37 ℃培养72 h后观察平板表面菌落形成情况，对无菌落形成或表面呈膜状者进行盲刮盲传，即 用接种环在平板表面盲刮后，种入装有0.2 ml增菌管内制成悬液，取0.1 ml传种下一代。同 时盲刮涂片，革兰染色，观察细菌形态，并用普通L型平板作对照培养。
, 百拇医药
2 结果
本组39份标本，经液体L型增菌培养3～7天，均出现不同程度的混浊现象，部分标本红 细胞由红色变为暗黑色，个别标本出现溶血现象，接种普通L型平板，72 h无菌落形成。将 上述标本以盲刮盲传法接种普通L型平板，盲传三代，3例见有颗粒状菌落，4例有膜状形成 ，五代传种后，有典型菌落4例，颗粒状菌落5例，9例呈膜状生长。涂片见有巨形体、长丝 体和原生小体。阳性18例，阳性率46.1%。用降低氯化钠含量，加入镁离子的L型平板 ，盲刮盲传 二代，培养基表面呈膜状生长者7例，三代传种后，可见颗粒菌落14例，典型L型菌落4例。 盲刮盲传五代，典型L型菌落11例，颗粒状菌落18例，呈膜状生长2例。二代、三代、五代阳 性率分别为17.95%、46.15%、79.49%，均高于普通固体L型培养基(P<0.05～P< 0.01)。
两种培养方法结果的配对比较见表1。
表1 两种培养方法结果的配对比较 普通固体
, 百拇医药
L型培养基
(加镁离子的固体L型培养基
二代
三代
五代
阳性
阴性
合计
阳性
阴性
合计
阳性
阴性
, 百拇医药
合计
阳性
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, http://www.100md.com
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, 百拇医药
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χ2配对
5.14
5.26
11.08
P
<0.05
<0.05
<0.01
经回复鉴定，金黄色葡萄球菌27例，大肠埃希菌2例，链球菌1例，类白喉杆菌1例。仍 有8例未见 菌落形成，但涂片革兰染色可见有丝状体、巨型体、原球体和类白喉样杆菌，着染深浅不一 。
, 百拇医药
3 讨论
细菌L型由于细胞壁的缺损程度不同，对外环境渗透压的要求也不尽相同〔1〕。 有的L型细菌必须在高渗环境中才能生长，而有的在等渗或低渗环境中也能生长。目前L型培 养 常用氯化钠、琥珀酸钠、蔗糖等作渗透压稳定剂，但仍没有一个对各种细菌L型均合适的理 想浓度。一种浓度的渗透压稳定剂要适应众多L型细菌生长较为困难。本组标本用降低氯化 钠浓 度，加入镁离子，阳性率明显提高，但仍有8例无菌落形成，是否与渗透压稳定剂的浓度有关，尚待进一步探讨。L型细菌部分或完全缺壁后，其生物学特性也有不同程度 的改变〔2〕，如生长速度减 慢，细菌形态不典型，营养要求、微量元素的摄取等都会有所改变。一般认为二价 阳离子具有稳定细胞膜的作用，在培养基中加入适量的镁离子，可以减低膜的损伤 ，有利于细菌L型的生长。
典型的L型菌落容易辨认，对不典型甚至无菌落形成的细菌L型，常误为无菌生长而造成漏诊 。在看不到菌落的情况下，采用盲刮盲传法〔3〕也是提高检出率的一个重要手段。
作者简介：冯锡才(1953-)，男，安徽阜阳人，主管技师.
〔参考文献〕
〔1〕 黄谷良，林特夫.细菌L型与疾病〔M〕.北京：学 苑出版社，1991.67.
〔2〕 冯锡才.细菌L型特殊型〔J〕.贵州医药，1995，19(Suppl) ∶321.
〔3〕 李影林.中华医学检验全书〔M〕.北京：人民卫生出版社， 1996.1 045.
收稿日期：1999-11-01, 百拇医药