不孕夫妇血清抗精子抗体检测及其临床意义
作者：麦美琪 周力学 何英明 梁焕松 吕超
单位：中山医科大学孙逸仙纪念医院妇产科 510120
关键词：酶联免疫吸附测定；抗精子抗体；免疫性不孕；不育
广东医学001118 【摘要】 目的 探讨不孕不育患者血清抗精子抗体水平及其治疗转归情况。方法 用酶联免疫吸附(ELISA)法对实验组812例女性不孕患者和618例男性不育患者进行血清抗精子抗体总Ig测定，并相应与284例和156例对照组作比较。将实验组中阳性患者按AsAb浓度分成A，B，C 3组：A组75～150 IU/L、B组151～250 IU/L、C组大于250 IU/L。结果 实验组中抗精子抗体阳性检出率均明显高于对照组。抗精子抗体转阴率A，B组较高，为21.4%～74.3%；C组最低，只有2.9%～5.9%。经治疗后，3组抗精子抗体浓度下降率为19.0%～56.2%。结论 抗精子抗体浓度越低，转阴率越高，对生育影响越小。反之转阴率低，对生育影响可能较大。
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在生育力正常的已婚男性和女性的血液中不存在抗精子抗体(antisperm antibody, AsAb)，若在不育男女任何一方的血清中检出抗精子抗体则可诊断为免疫性不孕或不育。抗精子抗体是引起免疫不育的重要原因之一[1]，其在免疫性不孕或不育中起着关键作用已为大量实验研究和临床观察所证实，在不育症人群中，免疫因素约占10%～20%。血清中AsAb浓度水平的高低对生育有明显影响，已知AsAb的浓度与生育能力成负相关。本文用酶联免疫(ELISA)法对不孕和不育患者作血清AsAb总Ig浓度测定，并对其阳性者作治疗后动态观察，以了解不同浓度抗精子抗体水平治疗后转归情况，指导临床治疗。
1 资料与方法
1.1 资料来源与分组 实验组：1 430例血清均获自1997年2月至1999年10月在我院妇科不孕门诊中就诊的妇女及其丈夫，不育时间2～6 a。其中女性组812例，年龄25～38岁，中位数31岁；男性组618例，年龄28～45岁，中位数34岁。按首次测定的AsAb浓度分A，B，C 3组：A组75～150 IU/L，B组151～250 IU/L，C组>250 IU/L。对照组：440例血清，均为生育能力正常者。男性对照组获自同期在我院产科门诊产检做地贫筛查的标本，年龄26～34岁，中位数31岁，其妻子均已怀孕20周以上。女性对照组获自同期妇科门诊就诊的曾做人流术妇女做内分泌检查的标本，年龄23～31岁，中位数28岁。
, 百拇医药
1.2 血清样品 空腹外周静脉采血2 ml，新鲜分离血清加入有盖微量试管内，置-20℃冰箱储存备用。
1.3 试剂与设备 AsAb检测试剂盒系德国SERATEC公司生产。试剂盒性能：敏感度为15 IU/L；特异性：与IgM无交叉反应；回收实验：96%；批内误差6%。酶标仪采用美国产550型酶联免疫检测仪。
1.4 实验与治疗方法 将低温保存备用的待测血清复温后，ELISA按试剂盒说明书操作，测定AsAb总Ig，其值≥75 IU/L为阳性，<75 IU/L为阴性[2，3]。阳性患者以中药和激素合并治疗，分别在治疗3，6，9个月后检测AsAb浓度。
1.5 统计学方法 团体t检验。
2 结果
2.1 1 430例血清AsAb总Ig测定结果 见表1。
, 百拇医药
表1 实验组与对照组AsAb阳性率及浓度均值(IU/L)的比较 组别
例数
阳性(例)
浓度均值
阳性率(%)
女性组
实验组
对照组
812
284
278
11
, 百拇医药 219.7±7.4
95.5±6.9
34.1
3.87
男性组
实验组
对照组
618
156
164
4
229.4±10.9
102.5±7.9
, http://www.100md.com
26.4
2.56
表中显示，实验组中女性组和男性组AsAb阳性率及浓度均值明显高于对照组，差异有显著性(P<0.001)。
2.2 AsAb阳性患者初始浓度与治疗3，6，9个月后浓度水平比较 各组浓度变化见表2。由表2可见，各组在治疗后，AsAb浓度均有不同程度的下降。各组治疗前和治疗3个月后浓度比较，女性各组P<0.01，差异有显著性；男性A，B组P<0.01，C组P<0.05，差异有显著性。治疗9个月后，女性A组和男性A组均能转阴，而B组和C组仍为阳性，尤其是C组，抗精子抗体仍保持在较高水平。治疗6个月和9个月浓度下降趋向缓慢。女性组和男性组无明显差异。
2.3 AsAb阳性各组治疗前和治疗3，6，9个月后浓度下降率及转阴率比较 各组治疗后，AsAb浓度均有不同程度的下降，下降幅度为19.0%～56.2%，平均下降率为33.0%。转阴率A，B组明显较高，为21.4%～74.3%，平均为46.5%；C组最低，为2.9%～5.9%。
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表2 AsAb阳性组治疗前后水平的比较(
±s)IU/L 组 别
治疗前
治疗后
3个月
6个月
9个月
女
性
组
A
107.4±2.0
, 百拇医药 87.0±6.7
81.2±5.3
65.8±4.8
(n=140)
(n=80)
(n=69)
(n=36)
B
199.9±3.5
149.1±16.7
107.5±8.9
87.5±7.6
, http://www.100md.com
(n=76)
(n=56)
(n=48)
(n=41)
C
351.9±16.6
281.9±25.5
251.4±9.4
248.9±23.3
(n=62)
(n=54)
(n=42)
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(n=38)
男
性
组
A
109.8±2.5
79.1±7.9
82.1±6.4
70.8±4.6
(n=90)
(n=48)
(n=42)
(n=31)
, 百拇医药
B
201.1±5.0
147.0±25.1
114.2±19.2
96.4±15.8
(n=40)
(n=34)
(n=28)
(n=20)
C
377.4±25.4
243.6±34.8
, 百拇医药
258.6±28.2
268.5±24.1
(n=34)
(n=20)
(n=14)
(n=12)
3 讨论
在正常生育者的血清中不含有抗精子抗体或含量很低，若在不育夫妇中检测出任何一方含有抗精子抗体，则可结合病史、体检等综合分析判断，诊断为免疫性不孕或不育。不孕、不育患者血清AsAb阳性检出率及浓度远高于正常对照组。有资料报道，在原因不明的不孕、不育者中，AsAb阳性者占20%～30%，本文检查结果显示男性阳性率为26.4%，女性阳性率为34.1%，与文献报道基本一致，且男、女性阳性率相差不大。
, 百拇医药
3.1 AsAb阳性患者治疗后AsAb浓度下降及转阴的意义 虽然AsAb在免疫性不育中所起的确切作用尚不完全清楚，但其浓度的高低对生育的影响是肯定的。通过本研究，我们观察到AsAb浓度的下降及转阴率的高低与治疗前浓度的高低直接相关。浓度越低，治疗后浓度下降越快，转阴率越高。浓度越高，疗效越差，所需疗程越长，转阴率显著降低，尤其当浓度大于250 IU/L时，治疗中其浓度下降缓慢，转阴率低，可能对生育影响较大。目前临床上对免疫性不孕、不育的治疗一般采用免疫抑制剂或中西医结合治疗。本研究对AsAb阳性患者的治疗，采用中药和地塞米松合并疗法，中药以北芪、丹参、赤芍、归尾、益智仁、甘草为主药，地塞米松0.5～0.75 mg，每日1次，对患者进行活血化淤、破气利水等综合辨证施治，3个月为一疗程。在我们的临床观察中可看到，A，B组患者经治疗3个月后有21.4%～41.5% AsAb已转阴；治疗9个月后，46.1%～74.3%转阴。B组虽有47.5%～53.9%未能转阴，但有50.0%～53.9%浓度降至100 IU/L以下，停药后不易回升。而C组患者经治疗后，AsAb虽有不同程度的下降，但仍处在较高水平，治疗6个月和9个月后，浓度变化不大，转阴率很低，仅为2.9%～5.9%，甚至治疗1 a浓度变化也不大，大多数患者浓度仍在200 IU/L以上，且停药后较易反复，患者因抗精子抗体浓度降不下来而造成怀孕困难。因此表明，AsAb浓度高，较难生育，若浓度超过300～400 IU/L时则治疗效果较差。此外，对照组的抗精子抗体阳性检出率为3.22%，且在低浓度组范围，说明AsAb阳性者低浓度时有生育可能。关于各浓度组的妊娠率有待我们今后进一步探讨。
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3.2 抗精子抗体检测及追踪的临床意义 抗精子抗体传统检测方法包括凝集试验(FD试验)和精子制动试验(SIT法)等，这些方法因不同来源的精子存在个体差异，常出现假阳性反应，且操作烦琐，难以推广。目前我们使用的ELISA方法具有敏感度高、特异性强、实验重复性好、药盒保存期长、无需新鲜精液、操作简便快速等优点，故值得推广应用。抗精子抗体的作用主要表现为精子凝集、精子制动，影响精子的运送，抑制精子穿透宫颈黏液，限制精子与卵子透明带粘附，抑制精子顶体的活性，使精子不易穿透包绕卵细胞的放射冠和透明带，阻碍精子与卵细胞膜的融合，阻止精子与卵子结合及影响胚胎的存活导致死亡和流产等。通过了解不育夫妇体内抗精子抗体水平，找出免疫性不孕或不育之原因，并对阳性者作治疗后动态观察，掌握治疗的转归情况，较好地指导临床用药及受孕时间。因此，本文介绍的ELISA定量检测血清抗精子抗体对临床不孕、不育及流产的病因诊断和治疗以及预后的判断提供了有价值的指标。
参考文献
1，谢文英，主编.男性学.上海：上海科学技术出版社，1991. 176
, 百拇医药
2，Nakagawa K, Yamano S, Kamada M, et al. Quolity of embryo does not affect the implantation rate of IVF-ET in infertile women with antisperm antibody. Fertil Steril, 1999, 72(6):1055
3，Culligan PJ, Crane MM, Boone WB, et al. Validity and cost-effectiveness of antisperm antibody testing before in vitro-fertilization. Fertil Steril, 1998, 69(5):894
(收稿日期：2000-01-05), 百拇医药
单位：中山医科大学孙逸仙纪念医院妇产科 510120
关键词：酶联免疫吸附测定；抗精子抗体；免疫性不孕；不育
广东医学001118 【摘要】 目的 探讨不孕不育患者血清抗精子抗体水平及其治疗转归情况。方法 用酶联免疫吸附(ELISA)法对实验组812例女性不孕患者和618例男性不育患者进行血清抗精子抗体总Ig测定，并相应与284例和156例对照组作比较。将实验组中阳性患者按AsAb浓度分成A，B，C 3组：A组75～150 IU/L、B组151～250 IU/L、C组大于250 IU/L。结果 实验组中抗精子抗体阳性检出率均明显高于对照组。抗精子抗体转阴率A，B组较高，为21.4%～74.3%；C组最低，只有2.9%～5.9%。经治疗后，3组抗精子抗体浓度下降率为19.0%～56.2%。结论 抗精子抗体浓度越低，转阴率越高，对生育影响越小。反之转阴率低，对生育影响可能较大。
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在生育力正常的已婚男性和女性的血液中不存在抗精子抗体(antisperm antibody, AsAb)，若在不育男女任何一方的血清中检出抗精子抗体则可诊断为免疫性不孕或不育。抗精子抗体是引起免疫不育的重要原因之一[1]，其在免疫性不孕或不育中起着关键作用已为大量实验研究和临床观察所证实，在不育症人群中，免疫因素约占10%～20%。血清中AsAb浓度水平的高低对生育有明显影响，已知AsAb的浓度与生育能力成负相关。本文用酶联免疫(ELISA)法对不孕和不育患者作血清AsAb总Ig浓度测定，并对其阳性者作治疗后动态观察，以了解不同浓度抗精子抗体水平治疗后转归情况，指导临床治疗。
1 资料与方法
1.1 资料来源与分组 实验组：1 430例血清均获自1997年2月至1999年10月在我院妇科不孕门诊中就诊的妇女及其丈夫，不育时间2～6 a。其中女性组812例，年龄25～38岁，中位数31岁；男性组618例，年龄28～45岁，中位数34岁。按首次测定的AsAb浓度分A，B，C 3组：A组75～150 IU/L，B组151～250 IU/L，C组>250 IU/L。对照组：440例血清，均为生育能力正常者。男性对照组获自同期在我院产科门诊产检做地贫筛查的标本，年龄26～34岁，中位数31岁，其妻子均已怀孕20周以上。女性对照组获自同期妇科门诊就诊的曾做人流术妇女做内分泌检查的标本，年龄23～31岁，中位数28岁。
, 百拇医药
1.2 血清样品 空腹外周静脉采血2 ml，新鲜分离血清加入有盖微量试管内，置-20℃冰箱储存备用。
1.3 试剂与设备 AsAb检测试剂盒系德国SERATEC公司生产。试剂盒性能：敏感度为15 IU/L；特异性：与IgM无交叉反应；回收实验：96%；批内误差6%。酶标仪采用美国产550型酶联免疫检测仪。
1.4 实验与治疗方法 将低温保存备用的待测血清复温后，ELISA按试剂盒说明书操作，测定AsAb总Ig，其值≥75 IU/L为阳性，<75 IU/L为阴性[2，3]。阳性患者以中药和激素合并治疗，分别在治疗3，6，9个月后检测AsAb浓度。
1.5 统计学方法 团体t检验。
2 结果
2.1 1 430例血清AsAb总Ig测定结果 见表1。
, 百拇医药
表1 实验组与对照组AsAb阳性率及浓度均值(IU/L)的比较 组别
例数
阳性(例)
浓度均值
阳性率(%)
女性组
实验组
对照组
812
284
278
11
, 百拇医药 219.7±7.4
95.5±6.9
34.1
3.87
男性组
实验组
对照组
618
156
164
4
229.4±10.9
102.5±7.9
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26.4
2.56
表中显示，实验组中女性组和男性组AsAb阳性率及浓度均值明显高于对照组，差异有显著性(P<0.001)。
2.2 AsAb阳性患者初始浓度与治疗3，6，9个月后浓度水平比较 各组浓度变化见表2。由表2可见，各组在治疗后，AsAb浓度均有不同程度的下降。各组治疗前和治疗3个月后浓度比较，女性各组P<0.01，差异有显著性；男性A，B组P<0.01，C组P<0.05，差异有显著性。治疗9个月后，女性A组和男性A组均能转阴，而B组和C组仍为阳性，尤其是C组，抗精子抗体仍保持在较高水平。治疗6个月和9个月浓度下降趋向缓慢。女性组和男性组无明显差异。
2.3 AsAb阳性各组治疗前和治疗3，6，9个月后浓度下降率及转阴率比较 各组治疗后，AsAb浓度均有不同程度的下降，下降幅度为19.0%～56.2%，平均下降率为33.0%。转阴率A，B组明显较高，为21.4%～74.3%，平均为46.5%；C组最低，为2.9%～5.9%。
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表2 AsAb阳性组治疗前后水平的比较(
±s)IU/L 组 别治疗前
治疗后
3个月
6个月
9个月
女
性
组
A
107.4±2.0
, 百拇医药 87.0±6.7
81.2±5.3
65.8±4.8
(n=140)
(n=80)
(n=69)
(n=36)
B
199.9±3.5
149.1±16.7
107.5±8.9
87.5±7.6
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(n=76)
(n=56)
(n=48)
(n=41)
C
351.9±16.6
281.9±25.5
251.4±9.4
248.9±23.3
(n=62)
(n=54)
(n=42)
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(n=38)
男
性
组
A
109.8±2.5
79.1±7.9
82.1±6.4
70.8±4.6
(n=90)
(n=48)
(n=42)
(n=31)
, 百拇医药
B
201.1±5.0
147.0±25.1
114.2±19.2
96.4±15.8
(n=40)
(n=34)
(n=28)
(n=20)
C
377.4±25.4
243.6±34.8
, 百拇医药
258.6±28.2
268.5±24.1
(n=34)
(n=20)
(n=14)
(n=12)
3 讨论
在正常生育者的血清中不含有抗精子抗体或含量很低，若在不育夫妇中检测出任何一方含有抗精子抗体，则可结合病史、体检等综合分析判断，诊断为免疫性不孕或不育。不孕、不育患者血清AsAb阳性检出率及浓度远高于正常对照组。有资料报道，在原因不明的不孕、不育者中，AsAb阳性者占20%～30%，本文检查结果显示男性阳性率为26.4%，女性阳性率为34.1%，与文献报道基本一致，且男、女性阳性率相差不大。
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3.1 AsAb阳性患者治疗后AsAb浓度下降及转阴的意义 虽然AsAb在免疫性不育中所起的确切作用尚不完全清楚，但其浓度的高低对生育的影响是肯定的。通过本研究，我们观察到AsAb浓度的下降及转阴率的高低与治疗前浓度的高低直接相关。浓度越低，治疗后浓度下降越快，转阴率越高。浓度越高，疗效越差，所需疗程越长，转阴率显著降低，尤其当浓度大于250 IU/L时，治疗中其浓度下降缓慢，转阴率低，可能对生育影响较大。目前临床上对免疫性不孕、不育的治疗一般采用免疫抑制剂或中西医结合治疗。本研究对AsAb阳性患者的治疗，采用中药和地塞米松合并疗法，中药以北芪、丹参、赤芍、归尾、益智仁、甘草为主药，地塞米松0.5～0.75 mg，每日1次，对患者进行活血化淤、破气利水等综合辨证施治，3个月为一疗程。在我们的临床观察中可看到，A，B组患者经治疗3个月后有21.4%～41.5% AsAb已转阴；治疗9个月后，46.1%～74.3%转阴。B组虽有47.5%～53.9%未能转阴，但有50.0%～53.9%浓度降至100 IU/L以下，停药后不易回升。而C组患者经治疗后，AsAb虽有不同程度的下降，但仍处在较高水平，治疗6个月和9个月后，浓度变化不大，转阴率很低，仅为2.9%～5.9%，甚至治疗1 a浓度变化也不大，大多数患者浓度仍在200 IU/L以上，且停药后较易反复，患者因抗精子抗体浓度降不下来而造成怀孕困难。因此表明，AsAb浓度高，较难生育，若浓度超过300～400 IU/L时则治疗效果较差。此外，对照组的抗精子抗体阳性检出率为3.22%，且在低浓度组范围，说明AsAb阳性者低浓度时有生育可能。关于各浓度组的妊娠率有待我们今后进一步探讨。
, http://www.100md.com
3.2 抗精子抗体检测及追踪的临床意义 抗精子抗体传统检测方法包括凝集试验(FD试验)和精子制动试验(SIT法)等，这些方法因不同来源的精子存在个体差异，常出现假阳性反应，且操作烦琐，难以推广。目前我们使用的ELISA方法具有敏感度高、特异性强、实验重复性好、药盒保存期长、无需新鲜精液、操作简便快速等优点，故值得推广应用。抗精子抗体的作用主要表现为精子凝集、精子制动，影响精子的运送，抑制精子穿透宫颈黏液，限制精子与卵子透明带粘附，抑制精子顶体的活性，使精子不易穿透包绕卵细胞的放射冠和透明带，阻碍精子与卵细胞膜的融合，阻止精子与卵子结合及影响胚胎的存活导致死亡和流产等。通过了解不育夫妇体内抗精子抗体水平，找出免疫性不孕或不育之原因，并对阳性者作治疗后动态观察，掌握治疗的转归情况，较好地指导临床用药及受孕时间。因此，本文介绍的ELISA定量检测血清抗精子抗体对临床不孕、不育及流产的病因诊断和治疗以及预后的判断提供了有价值的指标。
参考文献
1，谢文英，主编.男性学.上海：上海科学技术出版社，1991. 176
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2，Nakagawa K, Yamano S, Kamada M, et al. Quolity of embryo does not affect the implantation rate of IVF-ET in infertile women with antisperm antibody. Fertil Steril, 1999, 72(6):1055
3，Culligan PJ, Crane MM, Boone WB, et al. Validity and cost-effectiveness of antisperm antibody testing before in vitro-fertilization. Fertil Steril, 1998, 69(5):894
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