复方辛酸甘油脂——柠烯乳剂溶解胆固醇结石的动物观察
作者：范跃祖 张圣道
单位：上海第二医科大学附属瑞金医院外科 200025
关键词：
中华医学杂志900322 范跃祖 张圣道
甲基叔丁醚(MTBE)是目前最有效的胆固醇结石CS溶剂，在体外数小时即能使CS溶解，但其毒性作用大。本实验用自制的复方辛酸甘油脂——柠烯乳剂(MLCTP)与MTBE等溶剂对CS的溶石作用进行比较，并作了MLCTP的毒性实验，以探索一种即有速效又安全的CS溶剂。
一、实验方法和结果
1. 溶石实验：配制7种溶石剂：(1)辛酸甘油脂(MO)，本实验室自制，经气质联谱仪分析其质量符合临床要求。(2)MO改良乳剂(GMOC)[1]。(3)柠烯，日本Tokyo kasei kogyo Co. Ltd.产品。(4)复方桔皮油乳剂[2]。(5)MTBE，西德 E.Merck产品。(6)MTBE-甲亚砜(MTBE-DMSO)[8]。(7)MLCTP配方(按100ml计)：MO36ml，柠烯54ml，1，2-环已二按四乙酸(Fluka进口分装)1g，胰蛋白酶(Difco进口分装)2.5g，吐温80(上海大众制药厂产品)2ml，去离子蒸馏水8ml。混合并剧烈振摇使成乳剂，pH8.5。
, http://www.100md.com
4例经手术取了贩胆囊结石，测得胆固醇量90±9%，胆红素0.9±0.3%，为Ⅱ类胆石[4]。每例选取体积、重量相近，表面结构完整的结石7块，干燥恒重后秤重，随机分至7种溶石剂组，置于5ml溶石液，在37°C恒温水浴48小时，每2小时轻摇溶石液，记录胆石全溶时间。未全溶者到48小时取出，干燥恒重后秤重。溶石效果采用重量减轻百分比和全溶时间表示。
体外溶石48小时，复方桔皮油乳剂、MO、GMOC组的结石减重率分别为48±7%，81±10%和76±9%。MLCTP仅用15±7小时可使Ⅱ类CS全溶，溶石率达100%，显著高于上述其它各溶石剂组(P<0.01)；溶石速度接近于MTBE，MTBE-DMSO；而且不遗留有胆石残核。结果表明，MLCTP能快速有效地溶解CS(附表)。
附表 7种溶石剂对胆固醇结石的溶石比较(
±S) 溶石剂组
, 百拇医药
胆石重量(mg)
溶石率(%)
全溶时间
溶石前
溶石后
1.辛酸甘油脂(MO)
162±48
34±27
81±10
2.辛酸甘油脂改良乳剂(GMOC)
159±61
41±32
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76±9
3.柠烯
126±54
2±3
98±3
4.复方桔皮油乳剂
156±97
98±100
48±27
5.甲基叔丁醚(MTBE)
213±47
0
100
, 百拇医药
7.6±0.8
6.甲基叔丁醚-二甲亚砜(MTBE-DMSO)
176±22
0
100
8.9±0.8
7.复方辛酸甘油脂-柠烯乳剂(LMCTP)
169±33
0
100*
15.3±6.7**
注：(1)7与1、2、4组比较，*P<0.01；(2)7与5、6组比较，**P<0.05
, 百拇医药
2. 毒性实验：所用动物，(1)纯种昆明小白鼠200只，体重20±2g；(2)新西兰兔4只，体重2.5±0.5g；(3)杂种狗8条，体重10～15kg。上述动物均为雌雄各半。
小鼠半致死量(LD50)急性毒性实验：根据预实验设定LD0和LD100，按寇氏法进行[5]，分别作MLCTP的经口灌注和腹腔注射的LD50实验。MLCTP经口灌注的LD50为19.6ml/kg，腹腔注射的LD50为8.1ml/kg，存活小鼠精神和活动均正常。
兔眼结膜刺激反应：左眼结膜囊滴MTBE，右眼结膜囊滴MLCTP各2滴。MTBE滴入眼结膜囊时即有尖叫和怕惊跳现象；第1小时的眼结膜明显充血水肿，复盖眼球的2/3；第24小时仍有轻度充血水肿，复盖眼球的1/3。MLCTP滴眼后无尖叫惊跳反应，第1小时仅有眼结膜轻微水肿，4小时后自行消退。
, 百拇医药
狗胆囊、胆管刺激实验：用戊巴比妥钠静脉麻醉后开腹，作胆囊、胆管造瘘术，术后1周经造瘘管灌注MLCTP，每次4～5ml，1小时1次，胆囊连续灌注2天，共48次；胆管连灌注4小时，共4次。灌注期间回抽偶有轻度出血。灌注2天后行剖腹探查，仅见狗胆囊、十二指肠乳头周围有散在的小出血点，病理检查呈轻度炎性反应。2周后探查，肉眼和病理症实狗胆囊、胆管、十二指肠乳头周围均无异常。
二、讨论
溶石药必须具备对胆石有溶解作用，对人体无害等条件。MTBE虽然是CS的最有效溶剂，但毒性作用大。小鼠经口灌胃的MTBE LD50为5.96ml/kg，腹腔注射的LD50为1.70ml/kg。极少量MTBE可造成严重溶血[6]。MO是广泛用于治疗吸收障碍的中链三酸甘油脂的代谢产物，其胆固醇溶解度为117g/L，1985年已被美国FDA批准用于临床。柠烯是从柠檬中提取，其胆固醇溶解度为167g/L，和MO合用(3：2)时，但固醇溶解度可达357g/L，高于MTBE(200g/L)，且通过协同机制提高对CS的溶石作用[7]。本实验配制的MLCTP，体外15小时可使CS全溶，明显优于复方桔皮油乳剂、MO和GMOC(P<0.01)，溶石速度接近MTBE，毒性明显低于MTBE，对兔眼结膜和胆道局部组织均无明显刺激反应。
, 百拇医药
参考文献
1. Leuschner U, et al. Gallstone dissolution in the biliary tract: in vitro investigations on inhibiting factors and special dissolution agents. Am J Gastroenterol 1982；77：222.
2. 傅华群，等.复方桔皮油乳剂溶解胆管残留结石的临床研究.中西医结合杂志 1985；5：134.
3. Dai KY, et al. Dissolution agents of human mixed cholesterol stones, Gastroenterol Clin Biol 1988；12：312.
4. 傅培彬，等.以胆石剖面结构及化学成分为基础的胆石分类法.中华外科杂志 1984；22：258.
, 百拇医药
5. 孙瑞元，徐叔云.毒性实验.见：徐叔云，等，主编.药理实验方法学.北京：人民卫生出版社，1988：400-416.
6. 张臣烈，等.甲基叔丁醚及其乳剂毒性的研究.南京：第十一届全国外科学术会议论文摘要，1988；41-42.
7. Asakawa S, et al. Development of new solution using through endoscopically placed nasobiliary tube. Hepatology 1983；3：810.
(1989年4月20日收稿 同年7月31日修回), 百拇医药
单位：上海第二医科大学附属瑞金医院外科 200025
关键词：
中华医学杂志900322 范跃祖 张圣道
甲基叔丁醚(MTBE)是目前最有效的胆固醇结石CS溶剂，在体外数小时即能使CS溶解，但其毒性作用大。本实验用自制的复方辛酸甘油脂——柠烯乳剂(MLCTP)与MTBE等溶剂对CS的溶石作用进行比较，并作了MLCTP的毒性实验，以探索一种即有速效又安全的CS溶剂。
一、实验方法和结果
1. 溶石实验：配制7种溶石剂：(1)辛酸甘油脂(MO)，本实验室自制，经气质联谱仪分析其质量符合临床要求。(2)MO改良乳剂(GMOC)[1]。(3)柠烯，日本Tokyo kasei kogyo Co. Ltd.产品。(4)复方桔皮油乳剂[2]。(5)MTBE，西德 E.Merck产品。(6)MTBE-甲亚砜(MTBE-DMSO)[8]。(7)MLCTP配方(按100ml计)：MO36ml，柠烯54ml，1，2-环已二按四乙酸(Fluka进口分装)1g，胰蛋白酶(Difco进口分装)2.5g，吐温80(上海大众制药厂产品)2ml，去离子蒸馏水8ml。混合并剧烈振摇使成乳剂，pH8.5。
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4例经手术取了贩胆囊结石，测得胆固醇量90±9%，胆红素0.9±0.3%，为Ⅱ类胆石[4]。每例选取体积、重量相近，表面结构完整的结石7块，干燥恒重后秤重，随机分至7种溶石剂组，置于5ml溶石液，在37°C恒温水浴48小时，每2小时轻摇溶石液，记录胆石全溶时间。未全溶者到48小时取出，干燥恒重后秤重。溶石效果采用重量减轻百分比和全溶时间表示。
体外溶石48小时，复方桔皮油乳剂、MO、GMOC组的结石减重率分别为48±7%，81±10%和76±9%。MLCTP仅用15±7小时可使Ⅱ类CS全溶，溶石率达100%，显著高于上述其它各溶石剂组(P<0.01)；溶石速度接近于MTBE，MTBE-DMSO；而且不遗留有胆石残核。结果表明，MLCTP能快速有效地溶解CS(附表)。
附表 7种溶石剂对胆固醇结石的溶石比较(
±S) 溶石剂组, 百拇医药
胆石重量(mg)
溶石率(%)
全溶时间
溶石前
溶石后
1.辛酸甘油脂(MO)
162±48
34±27
81±10
2.辛酸甘油脂改良乳剂(GMOC)
159±61
41±32
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76±9
3.柠烯
126±54
2±3
98±3
4.复方桔皮油乳剂
156±97
98±100
48±27
5.甲基叔丁醚(MTBE)
213±47
0
100
, 百拇医药
7.6±0.8
6.甲基叔丁醚-二甲亚砜(MTBE-DMSO)
176±22
0
100
8.9±0.8
7.复方辛酸甘油脂-柠烯乳剂(LMCTP)
169±33
0
100*
15.3±6.7**
注：(1)7与1、2、4组比较，*P<0.01；(2)7与5、6组比较，**P<0.05
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2. 毒性实验：所用动物，(1)纯种昆明小白鼠200只，体重20±2g；(2)新西兰兔4只，体重2.5±0.5g；(3)杂种狗8条，体重10～15kg。上述动物均为雌雄各半。
小鼠半致死量(LD50)急性毒性实验：根据预实验设定LD0和LD100，按寇氏法进行[5]，分别作MLCTP的经口灌注和腹腔注射的LD50实验。MLCTP经口灌注的LD50为19.6ml/kg，腹腔注射的LD50为8.1ml/kg，存活小鼠精神和活动均正常。
兔眼结膜刺激反应：左眼结膜囊滴MTBE，右眼结膜囊滴MLCTP各2滴。MTBE滴入眼结膜囊时即有尖叫和怕惊跳现象；第1小时的眼结膜明显充血水肿，复盖眼球的2/3；第24小时仍有轻度充血水肿，复盖眼球的1/3。MLCTP滴眼后无尖叫惊跳反应，第1小时仅有眼结膜轻微水肿，4小时后自行消退。
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狗胆囊、胆管刺激实验：用戊巴比妥钠静脉麻醉后开腹，作胆囊、胆管造瘘术，术后1周经造瘘管灌注MLCTP，每次4～5ml，1小时1次，胆囊连续灌注2天，共48次；胆管连灌注4小时，共4次。灌注期间回抽偶有轻度出血。灌注2天后行剖腹探查，仅见狗胆囊、十二指肠乳头周围有散在的小出血点，病理检查呈轻度炎性反应。2周后探查，肉眼和病理症实狗胆囊、胆管、十二指肠乳头周围均无异常。
二、讨论
溶石药必须具备对胆石有溶解作用，对人体无害等条件。MTBE虽然是CS的最有效溶剂，但毒性作用大。小鼠经口灌胃的MTBE LD50为5.96ml/kg，腹腔注射的LD50为1.70ml/kg。极少量MTBE可造成严重溶血[6]。MO是广泛用于治疗吸收障碍的中链三酸甘油脂的代谢产物，其胆固醇溶解度为117g/L，1985年已被美国FDA批准用于临床。柠烯是从柠檬中提取，其胆固醇溶解度为167g/L，和MO合用(3：2)时，但固醇溶解度可达357g/L，高于MTBE(200g/L)，且通过协同机制提高对CS的溶石作用[7]。本实验配制的MLCTP，体外15小时可使CS全溶，明显优于复方桔皮油乳剂、MO和GMOC(P<0.01)，溶石速度接近MTBE，毒性明显低于MTBE，对兔眼结膜和胆道局部组织均无明显刺激反应。
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参考文献
1. Leuschner U, et al. Gallstone dissolution in the biliary tract: in vitro investigations on inhibiting factors and special dissolution agents. Am J Gastroenterol 1982；77：222.
2. 傅华群，等.复方桔皮油乳剂溶解胆管残留结石的临床研究.中西医结合杂志 1985；5：134.
3. Dai KY, et al. Dissolution agents of human mixed cholesterol stones, Gastroenterol Clin Biol 1988；12：312.
4. 傅培彬，等.以胆石剖面结构及化学成分为基础的胆石分类法.中华外科杂志 1984；22：258.
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5. 孙瑞元，徐叔云.毒性实验.见：徐叔云，等，主编.药理实验方法学.北京：人民卫生出版社，1988：400-416.
6. 张臣烈，等.甲基叔丁醚及其乳剂毒性的研究.南京：第十一届全国外科学术会议论文摘要，1988；41-42.
7. Asakawa S, et al. Development of new solution using through endoscopically placed nasobiliary tube. Hepatology 1983；3：810.
(1989年4月20日收稿 同年7月31日修回), 百拇医药