伯基特淋巴瘤与EB病毒的关系及其p53和bcl-2蛋白的表达
作者：李佩娟 崔全才 王志永 何乐健 刘淑荣 刘彤华
单位：*论著*
关键词：伯基特淋巴瘤；疱疹病毒4型；人；DNA；病毒；蛋白质P53；蛋白质bcl-2
New Page 1 【摘要】 目的 了解伯基特淋巴瘤和EB病毒的关系及p53和bcl-2蛋白的表达。方法 采用PCR、原位PCR及免疫组化LSAB方法, 检测了28例伯基特淋巴瘤石蜡包埋的组织块。结果 发现8例EB病毒DNA阳性, 阳性率为28.5%, 8例阳性病例做了原位杂交, 其中3例为阳性。27例做了p53和bcl-2免疫组化检测, 阳性病例各为12例(44.4%)和13例(48.1%)。Ⅰ～Ⅱ期和Ⅲ～Ⅳ期p53和bcl-2阳性病例分别为3例(23.0%)、9例(64.2%)和3例(23.0%)、10例(71.4%), 两者均表现Ⅲ～Ⅳ期阳性率高于Ⅰ～Ⅱ期。χ2检验: P<0.05,差异有显著性。EB病毒、p53和bcl-2同时阳性的有4例, EB病毒和p53同时阳性的有5例, EB病毒和bcl-2同时阳性的有4例,p53和bcl-2同时阳性的(包括EB病毒、p53和bcl-2同时阳性的病例在内)共有9例, 即EB病毒阳性的病例有半数以上合并p53和bcl-2阳性, 而p53和bcl-2则有70%左右阳性病例同时有阳性表达。结论 肿瘤内EB病毒DNA阳性率和非洲型伯基特淋巴瘤不同, 而和世界各地报道的散发型相似；肿瘤内p53和bcl-2表达Ⅲ～Ⅳ期明显高于Ⅰ～Ⅱ期; EB病毒、p53和bcl-2之间可能存在某些相互的影响。
, 百拇医药
The correlation between Burkitt′s lymphoma and Epstein-Barr virus in 28 cases and their expression of p53 and bcl-2 proteins Li Peijuan*, Cui Quancai, Wang Zhiyong, et al. * Department of Pathology, Beijing Children′s Hospital, Beijing 100045
【Abstract】 Objective To investigate the correlation between Burkitt′s lymphoma and Epstein-Barr (EB) virus and its expression of p53 and bcl-2 proteins. Methods Polymerase chain reaction (PCR), in situ PCR and immunohistochemical techniques were applied to specimens from 28 cases of Burkitt′s lymphomas on paraffin-embedded sections. Results EB virus was found in 8 (28.5%) cases by PCR, of which 3 were positive by in situ PCR. Positive rates for the expression of p53 and bcl-2 were 44.4% and 48.1% respectively. Whereas in stages Ⅰ-Ⅱ and Ⅲ-Ⅳ, they were 3(23.0%), 9(64.2%) and 3(23.0%), 10(71.4%) respectively. Both the expression of p53 and bcl-2 were high in stages Ⅲ-Ⅳ, low in stages Ⅰ-Ⅱ (P<0.05). The positive cases of EB virus in combination with the expression of p53 and bcl-2 protein, p53 protein and bcl-2 protein were 4,5,4 respectively and 9 cases were positive for p53 and bcl-2 protein. In other words, the positive cases for EB virus in combination with the expression of p53 and bcl-2 were 50%, whereas 70% were positive for both p53 and bcl-2. Conclusions The positive rates of EB virus in our series are different from some reports of African-Burkitt′s and similar to many other reports of endemic Burkitt′s lymphoma. The expression of p53 and bcl-2 proteins are significantly correlated with stage; high in stages Ⅲ-Ⅳ and low in stages Ⅰ-Ⅱ. EB virus, p53 and bcl-2 proteins may affect each other.
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【Key words】 Burkitt′s lymphoma Herpsvirus 4, human DNA, virual Protein p53 Protein bcl-2
淋巴瘤是小儿时期最常见的恶性实体瘤之一，伯基特淋巴瘤又是小儿非Hodgkin淋巴瘤中较常见的一型，此瘤属于未分化型小无核裂细胞淋巴瘤。恶性度高，病变发展迅速，多数病人预后很差，国外曾有很多报道，国内报道不多。伯基特淋巴瘤与EB病毒的关系及其p53和bcl-2的表达报道不多[1，2]，我们复查了北京儿童医院病理科从1956年至1991年小儿淋巴瘤的材料, 将其中典型的伯基特淋巴瘤28例进行了临床病理资料的分析, 用PCR方法将石蜡包埋的组织块进行了EB病毒DNA检测, 并检测了肿瘤的免疫表型和p53及bcl-2蛋白的表达。
材料与方法
1.复查了1956～1991年54例伯基特淋巴瘤，挑选临床病理资料完整的28例进行以下各项检测。
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2.EB病毒检测：DNA模板的提取：石蜡包埋组织, 一次性刀片5 μm厚切片, 取3～5张蜡膜, 放入1.5 ml离心管中, 常规二甲苯脱蜡, 梯度乙醇入水, 离心后组织用400 μl PK缓冲液悬浮,70 ℃水浴10分钟, 自然次序冷却后加蛋白酶K, 55 ℃消化3小时, 等体积酚抽提,上清液加入2倍体积乙醇, 0.2 mol/LNASC沉淀, 1 2000r/min离心, TE重溶沉淀。(1) PCR扩增：30 μlPCR扩增体积中含PCR缓冲液, 200 μmol/L dNTP, 50 pmol/L扩增引物(TC60:CCAGAGGTAAGTGGACTT, TC61: GACCGGTGCCTT CTTAGG, 北京医科大学生化系合成),0.2 μg模板DNA, 0.25 UTagDNA聚合酶, 经94 ℃1分钟, 55 ℃1分钟, 72 ℃ 1.5分钟扩增30个循环。电泳鉴定及Southern转印：0.8 μl扩增产物, 经3%琼脂糖凝胶电泳后，20 μl阳性病例扩增产物经琼脂糖电泳, 照像后, 经Southern转印至硝酸纤维素膜上后, 用α-P-dCTP标记EBV-Ban W核酸探针杂交后, 经严格冲洗, 放射自显影后观察结果。(2) 原位杂交：对PCR扩增EBV检测阳性的8例进行原位杂交, Raji细胞为阳性对照,P-2细胞为阴性对照, 石蜡包埋组织5 μm厚切片, 常规脱蜡脱水, PBS冲洗, 0.1 mol/L HCl10分钟后, 蛋白酶K消化37 ℃10分钟, 梯度乙醇脱水, 42 ℃预杂交2小时后加杂交液40～80 μl/片, 42 ℃过夜杂交, 严格冲洗后, 经脱水、自然干燥，涂核-4乳胶, 放射自显影7～10天后, D-76显影、定影, HE复染观察。原位杂交探针标记：1850 kBq α-S-dCTP(杜邦公司), 随机引物标记方法标记EBV-BanW核酸探针(Promega公司标记盒)。
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3.用免疫组化方法检测肿瘤的白细胞共同抗原(LCA), UCHL-1和L26, 确定其免疫表型，p53和bcl-2蛋白, L26, UCHL-1, LCA和bcl-2为DAKO公司产品,p53为Santa Cruz Biotechnology公司产品, STMP试剂盒为Zymed公司产品。p53和bcl-2在组织脱蜡复水后用0.01 mol/L枸橼酸钠水浴煮至90 ℃10分钟，自然冷却10分钟后进行LSAB法免疫组化染色(步骤略)。检测结果28例有1例肿瘤蜡块只剩边缘结缔组织, 故取消, 只剩27例。阳性反应的评估: 肿瘤细胞阳性观察标准：0%～25%为±,25%～50%+,50%～75%++，>75%+++。
4.统计学处理用卡方(χ2)检验法。
结果
1.临床资料: 男21例, 女7例, 男女之比为3∶1。发病年龄以2岁至13岁, 2～5岁10例, 6～9岁9例, 10～13岁9例。病变部位: 腹部13例, 包括回肠7例(其中3例表现肠套叠症状和体征), 肠系膜淋巴结5例, 腹腔1例; 颈淋巴结5例; 腹股沟淋巴结1例(其中1例伴有颅神经Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅵ损害和下肢瘫痪); 鼻咽部2例; 纵隔1例。病期：根据Ann Arbor分期标准:Ⅰ期: 7例, 表现为单纯的局部肿物。Ⅱ期: 6例, 表现为局部肿物和附属淋巴结肿大。Ⅲ期和Ⅳ期: 14例, 有2个或2个以上部位肿块, 伴有或无全身症状。
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2.病理表现: 28例全部表现为典型伯基特淋巴瘤的病理形态, 瘤细胞大部分为一致的小圆细胞, 核膜较厚, 核染色质粗糙, 核仁清楚, 呈弥漫排列, 肿瘤细胞之间可见星天状分布的巨噬细胞(图1), 肿瘤细胞之间尚可见到点状或片状坏死。免疫组化染色：27例全部表现为B细胞免疫表型, 阳性细胞除1例在50%以下外, 其余阳性表达在50%以上。
3.EB病毒检测：28例肿瘤DNA PCR扩增产物中有8 例在122bp有特异性扩增带,并经Southernblot证实产物为EBV-Ban W(图2，3), 阳性率为28.5%。8例阳性病例原位杂交结果, 3例阳性(图4)。阳性信号主要分布在肿瘤细胞胞浆及胞核内，信号强度不等, 最多者50%。原位杂交阳性的3例, 2例发生于结外, 1例发生于结内。
4.p53检测结果：27例中12例表达50%以上有意义的阳性(图5), 阳性率为44.4%,按病期分Ⅰ～Ⅱ期病人, 13例中阳性有3例, 阳性率为23.0%,Ⅲ～Ⅳ期14例病人有9例阳性, 阳性率为64.2%。
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5.bcl-2检测结果: 27例中13例表达50%以上有意义的阳性, 阳性率为48.1%。按病期分：Ⅰ～Ⅱ期病人13例, 阳性3例, 阳性率23.0%；Ⅲ～Ⅳ病人14例, 阳性病人10例, 阳性率71.4%。
6.p53和bcl-2检测结果：Ⅲ～Ⅳ期阳性率明显高于Ⅰ～Ⅱ期病人, χ2检验结果P<0.05, 差异有显著性。
EB病毒、p53和bcl-2同时阳性4例, EB病毒和p53同时阳性5例, EB病毒和bcl-2同时阳性4例, 即EB病毒阳性的病例有半数以上同时合并p53和bcl-2或其中之一阳性, p53和bcl-2同时阳性的
图1 瘤细胞由大小一致的小圆细胞构成，核膜较厚，核染色质粗糙，核仁清楚，弥漫排列，瘤细胞之间散在星天状分布的吞噬细胞 HE×800 图5 p53染色显示胞核内棕黄色阳性物质 LSAB法×800
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M1：pBR322/Hinf I Marker,Raji：阳性对照细胞(下同)，1～8为病例号,M2:pBR322/BstN I Marker
图2 8例伯基特淋巴瘤PCR扩增产物凝胶电泳结果
图3 图2中凝胶经Southern Blot，与α-P-dCTP标记EBV-Ban W核酸探针杂交放射自显影结果
图4 2-S-dATP标记EBV-Ban W探针，瘤细胞胞浆内及核内有EB病毒感染 原位杂交 ×1500
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病例, 包括EB病毒、p53和bcl-2同时阳性的病例在内共有9例, 即p53和bcl-2同时表达阳性的占其阳性病例的70.0%左右。原位杂交阳性的3例有2例同时有p53和bcl-2阳性表达, 另1例原位杂交阳性病例合并p53阳性表达, bcl-2为阴性。
讨论
病源学研究发现伯基特淋巴瘤和EB病毒关系非常密切, 80%～90%的病人发现EB病毒基因和血液循环内EB病毒抗体[3]。此后世界各地也相继报道了与非洲淋巴瘤相似的病例, 但肿瘤发生部位及其与EB病毒的关系和前者稍有不同。前者称为非洲型伯基特淋巴瘤, 后者称为散发型或非非洲型伯基特淋巴瘤。和非洲型相比, 非非洲型最常见的发病部位为腹部,EB病毒DNA的阳性率只有20%左右[3]。我们的材料和国外报道的非非洲型相似, EB病毒阳性率为28.5%, 病变也以侵犯腹部为主。
EB病毒和许多肿瘤关系很密切。除病毒相关因素外, 最近很多研究表明, 染色体和癌基因的突变与许多肿瘤的发生和病变的进展、治疗效果及病人预后关系非常密切[4，5]。
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p53是肿瘤的抑癌基因。p53突变是人类恶性肿瘤最常见的基因改变。由于癌基因的突变, 使p53从抑癌基因转化成肿瘤基因。许多报道表明p53的突变或过度表达对淋巴瘤的发生和病变的进展起重要作用[5，6]。p53的突变多见于高度恶性的淋巴瘤, 少见于低度和中度恶性淋巴瘤[7]。从病期看, Ⅲ～Ⅳ期病人阳性率时显著高于Ⅰ～Ⅱ期。
原癌基因bcl-2已证实为凋亡相关基因。这种基因首先发现与滤泡型非Hodgkin淋巴瘤密切相关, 因而命名为B细胞淋巴瘤-2。这种基因正常位于第18对染色体, 由于染色体7(14;18)转位, 造成bcl-2蛋白水平增高[4，8]。有报道，bcl-2的表达和肿瘤细胞分化程度、病变的进展、病人对治疗的反应及预后关系密切[9]。本组病人48.1%bcl-2呈阳性反应, 从病期分析, bcl-2和p53相似, 阳性病例多见于中晚期病人。
EB病毒阳性的病例有半数(4例)同时合并p53和bcl-2阳性, 有70%左右的病例p53和bcl-2同时表达阳性。Murray等[8]曾报道，器官移植后淋巴组织增生性疾病包括淋巴瘤。他们发现EB病毒可以引起bcl-2的表达。从本组材料看,EB病毒、p53和bcl-2之间可能存在一些相互的影响。
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参考文献
1Bogedain C, Alliger P, Schwarzmann F, et al. Different activation of Epstein-Barr virus immediate-early and early genes in Burkitt′s lymphoma cells and lymphoblastoid cell line. J Virol, 1994, 68：1200-1203.
2Rowe M, Rowe DT, Gregory CD, et al. Differences in B cell growth phenotype reflect novel patterns of Epstein-Barr virus latent gene expression in Burkitt′s lymphoma cells. EMBO J, 1987, 6：2743-2751.
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3Dehner LP. Pediatric Surgical Pathology. 2th ed. Bultimore: Williams ＆ Wilkins, 1987. 825-837.
4Yunis J, Mayer MG, Arnesen MA, et al. Bcl-2 and other genomic alternation in the prognosis of large cell lymphoma. N Engl J Med, 1989, 320：1047-1054.
5Farrugia MM, Duan LJ, Reis MD, et al. Alterations of P53 tumor suppressor gene in diffuse large cell lymphomas with translocation of the c-myc and bcl-2 proto-oncogenes. Blood, 1994, 83：191-198.
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6Icikawa A, Hotta T, Takagi Norio, et al. Mutations of P53 gene and their relation to disease progression in B-cell lymphoma. Blood, 1992, 79：2701-2707.
7Said JW, Barrera R, Sinlaku IP, et al. Immunohistochemical analysis of P53 express in malignant lymphomas. Am J Pathol, 1992, 141：1343-1348.
8Murray PG, Swinnen LJ, Constandinou CM, et al. Bcl-2 but not its Epstein-Barr virus-encoded a homologue, BHRF1, is commonly expressed in posttransplantation lymphoproliferative disorders. Blood, 1996, 87：706-711.
9Hermine O, Haioun C, Lepage E, et al. Prognostic significance of bcl-2 protein expression in aggressive non-Hodgkin′s lymphoma. Blood, 1996, 87：265-272.
(收稿：1997-01-13 修回：1997-10-22), http://www.100md.com
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关键词：伯基特淋巴瘤；疱疹病毒4型；人；DNA；病毒；蛋白质P53；蛋白质bcl-2
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The correlation between Burkitt′s lymphoma and Epstein-Barr virus in 28 cases and their expression of p53 and bcl-2 proteins Li Peijuan*, Cui Quancai, Wang Zhiyong, et al. * Department of Pathology, Beijing Children′s Hospital, Beijing 100045
【Abstract】 Objective To investigate the correlation between Burkitt′s lymphoma and Epstein-Barr (EB) virus and its expression of p53 and bcl-2 proteins. Methods Polymerase chain reaction (PCR), in situ PCR and immunohistochemical techniques were applied to specimens from 28 cases of Burkitt′s lymphomas on paraffin-embedded sections. Results EB virus was found in 8 (28.5%) cases by PCR, of which 3 were positive by in situ PCR. Positive rates for the expression of p53 and bcl-2 were 44.4% and 48.1% respectively. Whereas in stages Ⅰ-Ⅱ and Ⅲ-Ⅳ, they were 3(23.0%), 9(64.2%) and 3(23.0%), 10(71.4%) respectively. Both the expression of p53 and bcl-2 were high in stages Ⅲ-Ⅳ, low in stages Ⅰ-Ⅱ (P<0.05). The positive cases of EB virus in combination with the expression of p53 and bcl-2 protein, p53 protein and bcl-2 protein were 4,5,4 respectively and 9 cases were positive for p53 and bcl-2 protein. In other words, the positive cases for EB virus in combination with the expression of p53 and bcl-2 were 50%, whereas 70% were positive for both p53 and bcl-2. Conclusions The positive rates of EB virus in our series are different from some reports of African-Burkitt′s and similar to many other reports of endemic Burkitt′s lymphoma. The expression of p53 and bcl-2 proteins are significantly correlated with stage; high in stages Ⅲ-Ⅳ and low in stages Ⅰ-Ⅱ. EB virus, p53 and bcl-2 proteins may affect each other.
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【Key words】 Burkitt′s lymphoma Herpsvirus 4, human DNA, virual Protein p53 Protein bcl-2
淋巴瘤是小儿时期最常见的恶性实体瘤之一，伯基特淋巴瘤又是小儿非Hodgkin淋巴瘤中较常见的一型，此瘤属于未分化型小无核裂细胞淋巴瘤。恶性度高，病变发展迅速，多数病人预后很差，国外曾有很多报道，国内报道不多。伯基特淋巴瘤与EB病毒的关系及其p53和bcl-2的表达报道不多[1，2]，我们复查了北京儿童医院病理科从1956年至1991年小儿淋巴瘤的材料, 将其中典型的伯基特淋巴瘤28例进行了临床病理资料的分析, 用PCR方法将石蜡包埋的组织块进行了EB病毒DNA检测, 并检测了肿瘤的免疫表型和p53及bcl-2蛋白的表达。
材料与方法
1.复查了1956～1991年54例伯基特淋巴瘤，挑选临床病理资料完整的28例进行以下各项检测。
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2.EB病毒检测：DNA模板的提取：石蜡包埋组织, 一次性刀片5 μm厚切片, 取3～5张蜡膜, 放入1.5 ml离心管中, 常规二甲苯脱蜡, 梯度乙醇入水, 离心后组织用400 μl PK缓冲液悬浮,70 ℃水浴10分钟, 自然次序冷却后加蛋白酶K, 55 ℃消化3小时, 等体积酚抽提,上清液加入2倍体积乙醇, 0.2 mol/LNASC沉淀, 1 2000r/min离心, TE重溶沉淀。(1) PCR扩增：30 μlPCR扩增体积中含PCR缓冲液, 200 μmol/L dNTP, 50 pmol/L扩增引物(TC60:CCAGAGGTAAGTGGACTT, TC61: GACCGGTGCCTT CTTAGG, 北京医科大学生化系合成),0.2 μg模板DNA, 0.25 UTagDNA聚合酶, 经94 ℃1分钟, 55 ℃1分钟, 72 ℃ 1.5分钟扩增30个循环。电泳鉴定及Southern转印：0.8 μl扩增产物, 经3%琼脂糖凝胶电泳后，20 μl阳性病例扩增产物经琼脂糖电泳, 照像后, 经Southern转印至硝酸纤维素膜上后, 用α-P-dCTP标记EBV-Ban W核酸探针杂交后, 经严格冲洗, 放射自显影后观察结果。(2) 原位杂交：对PCR扩增EBV检测阳性的8例进行原位杂交, Raji细胞为阳性对照,P-2细胞为阴性对照, 石蜡包埋组织5 μm厚切片, 常规脱蜡脱水, PBS冲洗, 0.1 mol/L HCl10分钟后, 蛋白酶K消化37 ℃10分钟, 梯度乙醇脱水, 42 ℃预杂交2小时后加杂交液40～80 μl/片, 42 ℃过夜杂交, 严格冲洗后, 经脱水、自然干燥，涂核-4乳胶, 放射自显影7～10天后, D-76显影、定影, HE复染观察。原位杂交探针标记：1850 kBq α-S-dCTP(杜邦公司), 随机引物标记方法标记EBV-BanW核酸探针(Promega公司标记盒)。
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3.用免疫组化方法检测肿瘤的白细胞共同抗原(LCA), UCHL-1和L26, 确定其免疫表型，p53和bcl-2蛋白, L26, UCHL-1, LCA和bcl-2为DAKO公司产品,p53为Santa Cruz Biotechnology公司产品, STMP试剂盒为Zymed公司产品。p53和bcl-2在组织脱蜡复水后用0.01 mol/L枸橼酸钠水浴煮至90 ℃10分钟，自然冷却10分钟后进行LSAB法免疫组化染色(步骤略)。检测结果28例有1例肿瘤蜡块只剩边缘结缔组织, 故取消, 只剩27例。阳性反应的评估: 肿瘤细胞阳性观察标准：0%～25%为±,25%～50%+,50%～75%++，>75%+++。
4.统计学处理用卡方(χ2)检验法。
结果
1.临床资料: 男21例, 女7例, 男女之比为3∶1。发病年龄以2岁至13岁, 2～5岁10例, 6～9岁9例, 10～13岁9例。病变部位: 腹部13例, 包括回肠7例(其中3例表现肠套叠症状和体征), 肠系膜淋巴结5例, 腹腔1例; 颈淋巴结5例; 腹股沟淋巴结1例(其中1例伴有颅神经Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅵ损害和下肢瘫痪); 鼻咽部2例; 纵隔1例。病期：根据Ann Arbor分期标准:Ⅰ期: 7例, 表现为单纯的局部肿物。Ⅱ期: 6例, 表现为局部肿物和附属淋巴结肿大。Ⅲ期和Ⅳ期: 14例, 有2个或2个以上部位肿块, 伴有或无全身症状。
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2.病理表现: 28例全部表现为典型伯基特淋巴瘤的病理形态, 瘤细胞大部分为一致的小圆细胞, 核膜较厚, 核染色质粗糙, 核仁清楚, 呈弥漫排列, 肿瘤细胞之间可见星天状分布的巨噬细胞(图1), 肿瘤细胞之间尚可见到点状或片状坏死。免疫组化染色：27例全部表现为B细胞免疫表型, 阳性细胞除1例在50%以下外, 其余阳性表达在50%以上。
3.EB病毒检测：28例肿瘤DNA PCR扩增产物中有8 例在122bp有特异性扩增带,并经Southernblot证实产物为EBV-Ban W(图2，3), 阳性率为28.5%。8例阳性病例原位杂交结果, 3例阳性(图4)。阳性信号主要分布在肿瘤细胞胞浆及胞核内，信号强度不等, 最多者50%。原位杂交阳性的3例, 2例发生于结外, 1例发生于结内。
4.p53检测结果：27例中12例表达50%以上有意义的阳性(图5), 阳性率为44.4%,按病期分Ⅰ～Ⅱ期病人, 13例中阳性有3例, 阳性率为23.0%,Ⅲ～Ⅳ期14例病人有9例阳性, 阳性率为64.2%。
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5.bcl-2检测结果: 27例中13例表达50%以上有意义的阳性, 阳性率为48.1%。按病期分：Ⅰ～Ⅱ期病人13例, 阳性3例, 阳性率23.0%；Ⅲ～Ⅳ病人14例, 阳性病人10例, 阳性率71.4%。
6.p53和bcl-2检测结果：Ⅲ～Ⅳ期阳性率明显高于Ⅰ～Ⅱ期病人, χ2检验结果P<0.05, 差异有显著性。
EB病毒、p53和bcl-2同时阳性4例, EB病毒和p53同时阳性5例, EB病毒和bcl-2同时阳性4例, 即EB病毒阳性的病例有半数以上同时合并p53和bcl-2或其中之一阳性, p53和bcl-2同时阳性的
图1 瘤细胞由大小一致的小圆细胞构成，核膜较厚，核染色质粗糙，核仁清楚，弥漫排列，瘤细胞之间散在星天状分布的吞噬细胞 HE×800 图5 p53染色显示胞核内棕黄色阳性物质 LSAB法×800
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M1：pBR322/Hinf I Marker,Raji：阳性对照细胞(下同)，1～8为病例号,M2:pBR322/BstN I Marker
图2 8例伯基特淋巴瘤PCR扩增产物凝胶电泳结果
图3 图2中凝胶经Southern Blot，与α-P-dCTP标记EBV-Ban W核酸探针杂交放射自显影结果
图4 2-S-dATP标记EBV-Ban W探针，瘤细胞胞浆内及核内有EB病毒感染 原位杂交 ×1500
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病例, 包括EB病毒、p53和bcl-2同时阳性的病例在内共有9例, 即p53和bcl-2同时表达阳性的占其阳性病例的70.0%左右。原位杂交阳性的3例有2例同时有p53和bcl-2阳性表达, 另1例原位杂交阳性病例合并p53阳性表达, bcl-2为阴性。
讨论
病源学研究发现伯基特淋巴瘤和EB病毒关系非常密切, 80%～90%的病人发现EB病毒基因和血液循环内EB病毒抗体[3]。此后世界各地也相继报道了与非洲淋巴瘤相似的病例, 但肿瘤发生部位及其与EB病毒的关系和前者稍有不同。前者称为非洲型伯基特淋巴瘤, 后者称为散发型或非非洲型伯基特淋巴瘤。和非洲型相比, 非非洲型最常见的发病部位为腹部,EB病毒DNA的阳性率只有20%左右[3]。我们的材料和国外报道的非非洲型相似, EB病毒阳性率为28.5%, 病变也以侵犯腹部为主。
EB病毒和许多肿瘤关系很密切。除病毒相关因素外, 最近很多研究表明, 染色体和癌基因的突变与许多肿瘤的发生和病变的进展、治疗效果及病人预后关系非常密切[4，5]。
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p53是肿瘤的抑癌基因。p53突变是人类恶性肿瘤最常见的基因改变。由于癌基因的突变, 使p53从抑癌基因转化成肿瘤基因。许多报道表明p53的突变或过度表达对淋巴瘤的发生和病变的进展起重要作用[5，6]。p53的突变多见于高度恶性的淋巴瘤, 少见于低度和中度恶性淋巴瘤[7]。从病期看, Ⅲ～Ⅳ期病人阳性率时显著高于Ⅰ～Ⅱ期。
原癌基因bcl-2已证实为凋亡相关基因。这种基因首先发现与滤泡型非Hodgkin淋巴瘤密切相关, 因而命名为B细胞淋巴瘤-2。这种基因正常位于第18对染色体, 由于染色体7(14;18)转位, 造成bcl-2蛋白水平增高[4，8]。有报道，bcl-2的表达和肿瘤细胞分化程度、病变的进展、病人对治疗的反应及预后关系密切[9]。本组病人48.1%bcl-2呈阳性反应, 从病期分析, bcl-2和p53相似, 阳性病例多见于中晚期病人。
EB病毒阳性的病例有半数(4例)同时合并p53和bcl-2阳性, 有70%左右的病例p53和bcl-2同时表达阳性。Murray等[8]曾报道，器官移植后淋巴组织增生性疾病包括淋巴瘤。他们发现EB病毒可以引起bcl-2的表达。从本组材料看,EB病毒、p53和bcl-2之间可能存在一些相互的影响。
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参考文献
1Bogedain C, Alliger P, Schwarzmann F, et al. Different activation of Epstein-Barr virus immediate-early and early genes in Burkitt′s lymphoma cells and lymphoblastoid cell line. J Virol, 1994, 68：1200-1203.
2Rowe M, Rowe DT, Gregory CD, et al. Differences in B cell growth phenotype reflect novel patterns of Epstein-Barr virus latent gene expression in Burkitt′s lymphoma cells. EMBO J, 1987, 6：2743-2751.
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3Dehner LP. Pediatric Surgical Pathology. 2th ed. Bultimore: Williams ＆ Wilkins, 1987. 825-837.
4Yunis J, Mayer MG, Arnesen MA, et al. Bcl-2 and other genomic alternation in the prognosis of large cell lymphoma. N Engl J Med, 1989, 320：1047-1054.
5Farrugia MM, Duan LJ, Reis MD, et al. Alterations of P53 tumor suppressor gene in diffuse large cell lymphomas with translocation of the c-myc and bcl-2 proto-oncogenes. Blood, 1994, 83：191-198.
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6Icikawa A, Hotta T, Takagi Norio, et al. Mutations of P53 gene and their relation to disease progression in B-cell lymphoma. Blood, 1992, 79：2701-2707.
7Said JW, Barrera R, Sinlaku IP, et al. Immunohistochemical analysis of P53 express in malignant lymphomas. Am J Pathol, 1992, 141：1343-1348.
8Murray PG, Swinnen LJ, Constandinou CM, et al. Bcl-2 but not its Epstein-Barr virus-encoded a homologue, BHRF1, is commonly expressed in posttransplantation lymphoproliferative disorders. Blood, 1996, 87：706-711.
9Hermine O, Haioun C, Lepage E, et al. Prognostic significance of bcl-2 protein expression in aggressive non-Hodgkin′s lymphoma. Blood, 1996, 87：265-272.
(收稿：1997-01-13 修回：1997-10-22), http://www.100md.com