成熟心肌细胞的培养技术
作者：李予蓉 商立军
单位：李予蓉(第四军医大学:军卫系防原教研室, 陕西 西安 710032)；商立军(第四军医大学:基础部生理学教研室, 陕西 西安 710032)
关键词：
心脏杂志000264 成熟心肌细胞的培养, 首先要成功地无菌分离成熟的心肌细胞, 这比单纯地分离成熟心肌细胞或单纯地培养胚胎期和新生期心肌细胞较困难。 一般可作典型的Langandorff装置, 配合无菌操作要求来得到用于培养的无菌成熟心肌细胞。 实验动物等都经消毒灭菌, 分离仪器保存在分层的通风橱中, 以免在分离过程上空气传播的污染物污染溶液。 其它预防污染的方法有:①用70%酒精彻底清洗分离装置, 用无菌去离子水冲洗, 在心脏灌流之前至少要进行两次冲洗; ②在即将开始分离之前, 对易于拆卸的装置进行灭菌, 然后重新装好。 分离用灌流液、酶液、保存液及培养液均用纯水和高浓度试剂制备, 并经过常规灭菌。 所有器械及操作均需无菌, 若培养物遭受微生物感染, 培养基中的pH平衡也会破坏, 还可能产生对心肌细胞有害的活性物质。 如细菌感染, 可向培养基中加入抗生素, 但由于真菌对心肌细胞的高度毒性, 处理真菌或酵母污染, 应以预防为主。
分离得到成熟的心肌细胞后就需要进行心肌细胞铺板及介质更换。 心肌细胞向培养基表面的吸附会影响细胞形态, 与培养基表面的相互作用可能会改变膜电流和收缩性等特性, 吸附因子常用层粘连蛋白。 吸附底物可使用塑料或玻璃, 玻璃盖片在使用前用70%酒精清洗, 水冲洗并自动吸附。 层粘连蛋白在铺开细胞前至少30 min就会吸附到培养皿上。 要得到平皿上心肌细胞的高吸附率, 应作到以下几点:①正确的细胞密度铺板。 ②分离心肌细胞后应迅速铺板。 ③要有高百分比的柱形心肌细胞。 一旦心肌细胞被铺开, 则将其放置4 h完成吸附, 这段时间过后轻轻更换介质, 除去所有未吸附的细胞。 培养的心肌细胞对切应力和介质骚动很敏感, 因此介质更换必须缓慢而小心。 第1次更换后, 以后每隔3 d更换1次, 介质预先用5%的CO2加温和平衡。, 百拇医药
单位：李予蓉(第四军医大学:军卫系防原教研室, 陕西 西安 710032)；商立军(第四军医大学:基础部生理学教研室, 陕西 西安 710032)
关键词：
心脏杂志000264 成熟心肌细胞的培养, 首先要成功地无菌分离成熟的心肌细胞, 这比单纯地分离成熟心肌细胞或单纯地培养胚胎期和新生期心肌细胞较困难。 一般可作典型的Langandorff装置, 配合无菌操作要求来得到用于培养的无菌成熟心肌细胞。 实验动物等都经消毒灭菌, 分离仪器保存在分层的通风橱中, 以免在分离过程上空气传播的污染物污染溶液。 其它预防污染的方法有:①用70%酒精彻底清洗分离装置, 用无菌去离子水冲洗, 在心脏灌流之前至少要进行两次冲洗; ②在即将开始分离之前, 对易于拆卸的装置进行灭菌, 然后重新装好。 分离用灌流液、酶液、保存液及培养液均用纯水和高浓度试剂制备, 并经过常规灭菌。 所有器械及操作均需无菌, 若培养物遭受微生物感染, 培养基中的pH平衡也会破坏, 还可能产生对心肌细胞有害的活性物质。 如细菌感染, 可向培养基中加入抗生素, 但由于真菌对心肌细胞的高度毒性, 处理真菌或酵母污染, 应以预防为主。
分离得到成熟的心肌细胞后就需要进行心肌细胞铺板及介质更换。 心肌细胞向培养基表面的吸附会影响细胞形态, 与培养基表面的相互作用可能会改变膜电流和收缩性等特性, 吸附因子常用层粘连蛋白。 吸附底物可使用塑料或玻璃, 玻璃盖片在使用前用70%酒精清洗, 水冲洗并自动吸附。 层粘连蛋白在铺开细胞前至少30 min就会吸附到培养皿上。 要得到平皿上心肌细胞的高吸附率, 应作到以下几点:①正确的细胞密度铺板。 ②分离心肌细胞后应迅速铺板。 ③要有高百分比的柱形心肌细胞。 一旦心肌细胞被铺开, 则将其放置4 h完成吸附, 这段时间过后轻轻更换介质, 除去所有未吸附的细胞。 培养的心肌细胞对切应力和介质骚动很敏感, 因此介质更换必须缓慢而小心。 第1次更换后, 以后每隔3 d更换1次, 介质预先用5%的CO2加温和平衡。, 百拇医药