(基础研究部分)一种全新的检测循环内皮细胞的方法——流式细胞仪法
作者：李宏伟 迟 喧 修瑞娟
单位：100005 北京市，中国医学科学院中国协和医科大学微循环研究所
关键词：循环内皮细胞；流式细胞仪
目的 在生理及病理条件下从外周血中获取的内皮细胞称为循环内皮细胞
目的 在生理及病理条件下从外周血中获取的内皮细胞称为循环内皮细胞(Circulating Endothelial Cells，CEC)。用以往的分离方法所回收的细胞中大多数是血小板，特异性及回收率均较低。本文旨在建立一种高效的、特异性及回收率高的分离计数CEC的方法。方法 将3ml的人外周血用Hanks液稀释1倍，首先应用Percoll密度梯度离心法分离细胞，其密度为1.045—1.060mg/ml，循环内皮细胞即包含于此层中。然后用FITC标记的CD31小鼠抗人单克隆抗体作为内皮细胞的标志物。在装备用488nm光线氩离子激光光源的流式细胞仪上检测。根据前向角光散射的不同，每例标本收集10000个细胞，根据阴性对照设定门，以检测CD31阳性细胞的百分比，并将已知数目培养的人脐静脉内皮细胞(1.5×104个/ml)加入外周血中，在流式细胞仪上测定CD31阳性细胞的百分比。计算此方法将内皮细胞从外周血中检出的比率，以检测此方法的回收率。最后应用流式细胞仪分选CD31阳性门内的细胞，并染以荧光标记的因子Ⅷ相关抗原抗体，之后分别于激光共聚焦显微镜及倒置相差显微镜下鉴定和观察其形态学特征。结果 此方法对CEC的回收率为86%，较应用Takahashi方法的回收率(64.8%)有显著提高。经倒置相差显微镜及激光共聚焦显微镜鉴定所分选的CD31阳性细胞是内皮细胞。结论 我们建立了一种新的循环内皮细胞的分离计数方法，即流式细胞仪法。本方法应用流式细胞仪法计数了CEC，并应用激光共聚焦显微镜、倒置相差显微镜对检出细胞进行了鉴定。此方法克服了以往方法的缺点，具有客观、快速、精确、特异性及回收率高、取血量少(3ml)的特点。它可用于不同疾病患者血样中CEC的定量检测及其功能状态的分析，使之广泛应用于临床多种疾病的诊断及判断疗效和预后，使CEC真正成为来自活体的特异的且直接反映血管损伤的指示物。, 百拇医药
单位：100005 北京市，中国医学科学院中国协和医科大学微循环研究所
关键词：循环内皮细胞；流式细胞仪
目的 在生理及病理条件下从外周血中获取的内皮细胞称为循环内皮细胞
目的 在生理及病理条件下从外周血中获取的内皮细胞称为循环内皮细胞(Circulating Endothelial Cells，CEC)。用以往的分离方法所回收的细胞中大多数是血小板，特异性及回收率均较低。本文旨在建立一种高效的、特异性及回收率高的分离计数CEC的方法。方法 将3ml的人外周血用Hanks液稀释1倍，首先应用Percoll密度梯度离心法分离细胞，其密度为1.045—1.060mg/ml，循环内皮细胞即包含于此层中。然后用FITC标记的CD31小鼠抗人单克隆抗体作为内皮细胞的标志物。在装备用488nm光线氩离子激光光源的流式细胞仪上检测。根据前向角光散射的不同，每例标本收集10000个细胞，根据阴性对照设定门，以检测CD31阳性细胞的百分比，并将已知数目培养的人脐静脉内皮细胞(1.5×104个/ml)加入外周血中，在流式细胞仪上测定CD31阳性细胞的百分比。计算此方法将内皮细胞从外周血中检出的比率，以检测此方法的回收率。最后应用流式细胞仪分选CD31阳性门内的细胞，并染以荧光标记的因子Ⅷ相关抗原抗体，之后分别于激光共聚焦显微镜及倒置相差显微镜下鉴定和观察其形态学特征。结果 此方法对CEC的回收率为86%，较应用Takahashi方法的回收率(64.8%)有显著提高。经倒置相差显微镜及激光共聚焦显微镜鉴定所分选的CD31阳性细胞是内皮细胞。结论 我们建立了一种新的循环内皮细胞的分离计数方法，即流式细胞仪法。本方法应用流式细胞仪法计数了CEC，并应用激光共聚焦显微镜、倒置相差显微镜对检出细胞进行了鉴定。此方法克服了以往方法的缺点，具有客观、快速、精确、特异性及回收率高、取血量少(3ml)的特点。它可用于不同疾病患者血样中CEC的定量检测及其功能状态的分析，使之广泛应用于临床多种疾病的诊断及判断疗效和预后，使CEC真正成为来自活体的特异的且直接反映血管损伤的指示物。, 百拇医药