GC法测定血浆中尼莫地平浓度及药动学研究
作者：邝荔香 丁黎
单位：邝荔香(安徽医科大学临床药理所，合肥 230032)；丁黎(中国药科大学药物分析研究室，南京 210009)
关键词：尼莫地平；药代动力学；色谱法；高压液相
安徽医科大学学报000310 摘要 目的 建立血浆中尼莫地平的气相色谱检测方法，测定健康志愿者口服尼莫地平薄膜片后的血药浓度和进行药动学研究。方法 样品用甲醇溶解，以尼群地平作为内标，经DB-1熔融石英毛细管柱(25 m×0.32 mm，膜厚0.25 μm)分离，进入Ni-63电子捕获检测器检测。结果 尼莫地平的平均回收率在90.46%～93.15%，RSD在6.5%～9.8%，在1～120 μg.L-1范围线性关系良好(r=0.999 9)，最低检测限为0.3 μg.L-1。结论 该方法重现性好，提取回收率高。12名健康志愿者口服尼莫地平后，血中峰浓度(0.57 h)达49.65 μg.L-1，药物在体内吸收消除均较快。
, 百拇医药
中图分类号 R972.4
文献标识码 A 文章编号 1000-1492(2000)03-0191-03
Determination nimodipine in plasma by GC and pharmacokinetic studies
Kuang Lixiang, Ding Li
(Institute Clinical of Pharmacology,Anhui Medical Univercity,Hefei 230032)
Abstract Objective The GC method was established for analysis of nimodipine in plasma. The plasma concentrations of volunteers oral nimodipine were determined and its pharmacokinetics was studied. Methods The sample was disolved by methanol, nisoldipine as internal standard. Used column(DB-1 25 m×0.32 mm， film thickness 0.25 μm). ECD was used as a detector. Results The average recorery was 90.46%～93.15%,with RSD being 6.5%～9.81%. The linear range was 1～120 μg.L-1 and correlation coefficient was good(r=0.9999). The lower limit of detection was 0.3 μg.L-1. Conclusion The GC method has good repetition, Its recorery is higher. The mean peak concentration in plasma after oral administration of 60 mg nimodipine to twelve healthy volunteers is 49.65 μg.L-1. The drugs absorption and elimination are quicker.
, 百拇医药
MeSH nimodipine/pharmacokinetics; chromatography, high pressure liquid
尼莫地平(nimodipine,NMDP)是第二代双氢吡啶类钙通道拮抗剂，能选择作用于脑血管，起扩张脑动脉增加脑部血流量的作用，用于治疗缺血性脑血管疾病，临床上主要用于治疗偏头痛、轻、中度高血压病、突发性耳聋及预防和治疗蛛网膜下腔出血所引起的脑血管痉挛。
而NMDP在体内转化后有多种代谢产物，且在人体血液或其它体液中的治疗浓度较低。已经报道的方法有高效液相色谱法(HPLC)〔1〕，放免法〔2〕及气相色谱法(GC)〔3〕，我们参考文献，采用经济成本最低的GC测定方法，进行了人体药代动力学研究。
1 实验部分
, http://www.100md.com 1.1 仪器与试剂 Varian 3400气相色谱仪，Ni-63电子捕获检测器(ECD)，Shimadza CR-6A数据处理机。
NMDP薄膜包衣片和NMDP原料药(北京拜耳医药保健有限公司提供，批号100278，规格：每片30 mg)，尼群地平(中国药科大学药物分析研究室提供)，环已烷，乙醚，甲醇均为分析纯。
1.2 色谱条件 色谱柱，DB-1 25 m×0.32 mm ID熔融石英毛细管柱，膜厚0.25 μm(美国J8 W Scientific公司)；载气为高纯度氮气，柱前压为220 Pa，尾吹气流速为20 ml.min-1，分流比为1∶25，气化室温度为270℃，柱温245℃(7～8 min)40℃.min-1 270℃(5 min)，检测器温度为300℃。
1.3 血样前处理 在离心管中精密加入血浆1 ml，内标尼群地平标准溶液50 μl(1 mg.L-1)，混匀，再加入1 mol.L-1 NaOH溶液0.5 ml混匀，然后再加入环己烷—乙醚(1∶1)6.0 ml，涡旋振荡3 min，于4000 r.min-1离心10 min，取上层有机相5.0 ml于另一管中，于40℃水溶以氮气流吹干。用50 μl甲醇溶解残渣，取2 μl上清液进样。
, http://www.100md.com
1.4 药物代谢动力学试验 12名健康男性志愿者，体重(61.4±5.6)kg，年龄(21.8±1.7)岁，心、肝、肾功能正常，受试者在被告知所有与药物有关的可能的不良反应后，根据赫尔辛基宣言精神，签署受试者知情同意书。实验前1周及实验期间未服用其它任何药物，晨起空腹一次口服NMDP片(30 mg×2片)，200 ml温开水送服，于服药后0.167、0.333、0.667、1、1.5、2、3、4、6、8 h于肘静脉取3 ml血于肝素试管中，离心(3 000 r.min-1)5 min，取1 ml血浆供GC分析。
2 结果
2.1 色谱行为 在上述色谱条件下，尼莫地平与内标尼群地平及血浆中杂质峰达到良好分离，其保留时间分别为NMDP 11.2 min，内标尼群地平7.7 min，色谱图见图1。
2.2 标准曲线 用甲醇作溶剂精密配制1 g.L-1 NMDP及1 g.L-1内标尼群地平储备液，放入冰箱-20℃保存。
, http://www.100md.com
于离心管中精密加入1 ml血浆以及不同量的尼莫地平标准液和内标溶液50 μl(1 mg.L-1)，配成系列标准工作液1、3、10、30、60和120 μg.L-1，按血浆样品处理项下操作，以样品峰面积(As)与内标峰面积(Ais)之比(f=As/Ais)为纵坐标，样品浓度C为横坐标，求得回归方程f=0.012 3C-0.002 569，r=0.999 9；其最低检测到浓度为0.3 μg.L-1，最低可定量浓度为1 μg.L-1。
2.3 方法的精密度与回收率 分别精密配制3、30和120 μg.L-1的血浆标准品5份，每份均含内标50 μl(1 mg.L-1)，按1.3项下处理样品，测定日内和日间相对标准差，结果见表1。方法的回收率是以上述3种浓度的血浆标准品经“1.3”项下处理后测定所得峰面积比值f与同量的NMDP标准工作液直接进样所得的峰面积比值f之比求得，其结果见表1。
, 百拇医药
2.4 人体内药动学分析 12名健康志愿者口服60mg的NMDP后，其血药浓度—时间曲线符合口服二房室模型，见图2，其药动学参数见表2，血药浓度—时间数据以3P87程序进行拟合，算得药动学参数见表2。
图1-1 空白血浆色谱图
图1-2 尼莫地平和内标对照品色谱图
(内标Rt=7.75 min，尼莫地平Rt=11.20 min)
图1-3 受试者口服尼莫地平片剂后血浆样品色谱图
, 百拇医药
(内标Rt=7.78 min,尼莫地平Rt=11.20 min)
表1 方法的精密度和回收率(n=5) 浓度(μg.L-1)
日内RSD
(%)
日间RSD
(%)
回收率
(%)
3
6.06
9.81
, http://www.100md.com
90.46±5.3
30
3.52
6.27
91.15±5.0
120
0.96
6.50
93.15±2.7
图2 12名健康志愿者口服60 mg NMDP后平均血浆
浓度的药一时曲线
, http://www.100md.com
3 讨论
GC法和HPLC法相比较各有优缺点，HPLC法选择性好，但灵敏度较低，进样量大；GC法灵敏度高、进样量小，但易受干扰。本实验根据实验室条件，选择GC法。
NMDP的分子量为418，在GC法中对进样器温度和柱温要求较高，故实验采用熔融石英毛细管柱，用环己烷—乙醚作提取剂，毒性较低而提取回收率较高在90%以上。从色谱峰看血浆杂质、样品、内标均得到很好的分离，本方法检出限为0.3 μg.L-1，线性良好r=0.999 9，日内、日间相对标准差小于10.0%。尼群地平作为内标较理想，其结构、理化性质与NMDP相似，色谱行为相似并能完全分离，也不是NMDP的代谢产物。本实验所建立的方法，具有灵敏度高，专属性强，定量准确等特点，符合生物样品分析要求。
12名健康志愿者口服NMDP 60 mg后，药物在体内吸收消除均较快，0.57 h达到血药浓度峰值，血中峰浓度可达49.65 mg.L-1，2.16 h消除半衰期，在体内消除较完全其血浆清除率为0.5 mg.h-1.μg-1.L，说明该制剂在体内吸收良好，消除较完全，是一种优良的制剂。
, 百拇医药
由于GC的高灵敏度， 本法还可用于其它体液中NMDP的定量，如脑脊液和乳汁等。
表2 健康志愿者口服NMDP的药动学参数(n=12) t1/2α(h)
t1/2β
(h)
Tmax
(h)
Cmax
(μg.L-1)
t1/2Ka
, http://www.100md.com
(h)
AUC0～∞
(h.μg.L-1)
Vc/F
(L)
CL
(mg.h-1.μg-1.L)
0.32
2.16
0.57
, 百拇医药 49.65
0.20
119.52
0.64
0.50
作者简介：邝荔香，女，37岁，助理研究员参考文献
1，Qian M, Gallo JM. High-performance liquid chromatographic determination of the calcium channal blocker nimodipine in monkey plasma. J Chromatogr,1992;578(2):316～320
2，Gould RJ, Kenneth MM, Solomon HS. A simple radioreceptor assay for calcium antagonist drugs. Life Sci,1983;33(26):2 665～2 672
3，Jakobsen P, Mikkelsen EO. Determination of nimodipine by gas chromatography using electron-capture detection; external factors influencing nimodipine concentration during inrtraveous administration. J Chromatogr,1986;374(2):383～387
1999-12-09收稿，2000-05-19修回, 百拇医药
单位：邝荔香(安徽医科大学临床药理所，合肥 230032)；丁黎(中国药科大学药物分析研究室，南京 210009)
关键词：尼莫地平；药代动力学；色谱法；高压液相
安徽医科大学学报000310 摘要 目的 建立血浆中尼莫地平的气相色谱检测方法，测定健康志愿者口服尼莫地平薄膜片后的血药浓度和进行药动学研究。方法 样品用甲醇溶解，以尼群地平作为内标，经DB-1熔融石英毛细管柱(25 m×0.32 mm，膜厚0.25 μm)分离，进入Ni-63电子捕获检测器检测。结果 尼莫地平的平均回收率在90.46%～93.15%，RSD在6.5%～9.8%，在1～120 μg.L-1范围线性关系良好(r=0.999 9)，最低检测限为0.3 μg.L-1。结论 该方法重现性好，提取回收率高。12名健康志愿者口服尼莫地平后，血中峰浓度(0.57 h)达49.65 μg.L-1，药物在体内吸收消除均较快。
, 百拇医药
中图分类号 R972.4
文献标识码 A 文章编号 1000-1492(2000)03-0191-03
Determination nimodipine in plasma by GC and pharmacokinetic studies
Kuang Lixiang, Ding Li
(Institute Clinical of Pharmacology,Anhui Medical Univercity,Hefei 230032)
Abstract Objective The GC method was established for analysis of nimodipine in plasma. The plasma concentrations of volunteers oral nimodipine were determined and its pharmacokinetics was studied. Methods The sample was disolved by methanol, nisoldipine as internal standard. Used column(DB-1 25 m×0.32 mm， film thickness 0.25 μm). ECD was used as a detector. Results The average recorery was 90.46%～93.15%,with RSD being 6.5%～9.81%. The linear range was 1～120 μg.L-1 and correlation coefficient was good(r=0.9999). The lower limit of detection was 0.3 μg.L-1. Conclusion The GC method has good repetition, Its recorery is higher. The mean peak concentration in plasma after oral administration of 60 mg nimodipine to twelve healthy volunteers is 49.65 μg.L-1. The drugs absorption and elimination are quicker.
, 百拇医药
MeSH nimodipine/pharmacokinetics; chromatography, high pressure liquid
尼莫地平(nimodipine,NMDP)是第二代双氢吡啶类钙通道拮抗剂，能选择作用于脑血管，起扩张脑动脉增加脑部血流量的作用，用于治疗缺血性脑血管疾病，临床上主要用于治疗偏头痛、轻、中度高血压病、突发性耳聋及预防和治疗蛛网膜下腔出血所引起的脑血管痉挛。
而NMDP在体内转化后有多种代谢产物，且在人体血液或其它体液中的治疗浓度较低。已经报道的方法有高效液相色谱法(HPLC)〔1〕，放免法〔2〕及气相色谱法(GC)〔3〕，我们参考文献，采用经济成本最低的GC测定方法，进行了人体药代动力学研究。
1 实验部分
, http://www.100md.com 1.1 仪器与试剂 Varian 3400气相色谱仪，Ni-63电子捕获检测器(ECD)，Shimadza CR-6A数据处理机。
NMDP薄膜包衣片和NMDP原料药(北京拜耳医药保健有限公司提供，批号100278，规格：每片30 mg)，尼群地平(中国药科大学药物分析研究室提供)，环已烷，乙醚，甲醇均为分析纯。
1.2 色谱条件 色谱柱，DB-1 25 m×0.32 mm ID熔融石英毛细管柱，膜厚0.25 μm(美国J8 W Scientific公司)；载气为高纯度氮气，柱前压为220 Pa，尾吹气流速为20 ml.min-1，分流比为1∶25，气化室温度为270℃，柱温245℃(7～8 min)40℃.min-1 270℃(5 min)，检测器温度为300℃。
1.3 血样前处理 在离心管中精密加入血浆1 ml，内标尼群地平标准溶液50 μl(1 mg.L-1)，混匀，再加入1 mol.L-1 NaOH溶液0.5 ml混匀，然后再加入环己烷—乙醚(1∶1)6.0 ml，涡旋振荡3 min，于4000 r.min-1离心10 min，取上层有机相5.0 ml于另一管中，于40℃水溶以氮气流吹干。用50 μl甲醇溶解残渣，取2 μl上清液进样。
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1.4 药物代谢动力学试验 12名健康男性志愿者，体重(61.4±5.6)kg，年龄(21.8±1.7)岁，心、肝、肾功能正常，受试者在被告知所有与药物有关的可能的不良反应后，根据赫尔辛基宣言精神，签署受试者知情同意书。实验前1周及实验期间未服用其它任何药物，晨起空腹一次口服NMDP片(30 mg×2片)，200 ml温开水送服，于服药后0.167、0.333、0.667、1、1.5、2、3、4、6、8 h于肘静脉取3 ml血于肝素试管中，离心(3 000 r.min-1)5 min，取1 ml血浆供GC分析。
2 结果
2.1 色谱行为 在上述色谱条件下，尼莫地平与内标尼群地平及血浆中杂质峰达到良好分离，其保留时间分别为NMDP 11.2 min，内标尼群地平7.7 min，色谱图见图1。
2.2 标准曲线 用甲醇作溶剂精密配制1 g.L-1 NMDP及1 g.L-1内标尼群地平储备液，放入冰箱-20℃保存。
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于离心管中精密加入1 ml血浆以及不同量的尼莫地平标准液和内标溶液50 μl(1 mg.L-1)，配成系列标准工作液1、3、10、30、60和120 μg.L-1，按血浆样品处理项下操作，以样品峰面积(As)与内标峰面积(Ais)之比(f=As/Ais)为纵坐标，样品浓度C为横坐标，求得回归方程f=0.012 3C-0.002 569，r=0.999 9；其最低检测到浓度为0.3 μg.L-1，最低可定量浓度为1 μg.L-1。
2.3 方法的精密度与回收率 分别精密配制3、30和120 μg.L-1的血浆标准品5份，每份均含内标50 μl(1 mg.L-1)，按1.3项下处理样品，测定日内和日间相对标准差，结果见表1。方法的回收率是以上述3种浓度的血浆标准品经“1.3”项下处理后测定所得峰面积比值f与同量的NMDP标准工作液直接进样所得的峰面积比值f之比求得，其结果见表1。
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2.4 人体内药动学分析 12名健康志愿者口服60mg的NMDP后，其血药浓度—时间曲线符合口服二房室模型，见图2，其药动学参数见表2，血药浓度—时间数据以3P87程序进行拟合，算得药动学参数见表2。
图1-1 空白血浆色谱图
图1-2 尼莫地平和内标对照品色谱图
(内标Rt=7.75 min，尼莫地平Rt=11.20 min)
图1-3 受试者口服尼莫地平片剂后血浆样品色谱图
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(内标Rt=7.78 min,尼莫地平Rt=11.20 min)
表1 方法的精密度和回收率(n=5) 浓度(μg.L-1)
日内RSD
(%)
日间RSD
(%)
回收率
(%)
3
6.06
9.81
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90.46±5.3
30
3.52
6.27
91.15±5.0
120
0.96
6.50
93.15±2.7
图2 12名健康志愿者口服60 mg NMDP后平均血浆
浓度的药一时曲线
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3 讨论
GC法和HPLC法相比较各有优缺点，HPLC法选择性好，但灵敏度较低，进样量大；GC法灵敏度高、进样量小，但易受干扰。本实验根据实验室条件，选择GC法。
NMDP的分子量为418，在GC法中对进样器温度和柱温要求较高，故实验采用熔融石英毛细管柱，用环己烷—乙醚作提取剂，毒性较低而提取回收率较高在90%以上。从色谱峰看血浆杂质、样品、内标均得到很好的分离，本方法检出限为0.3 μg.L-1，线性良好r=0.999 9，日内、日间相对标准差小于10.0%。尼群地平作为内标较理想，其结构、理化性质与NMDP相似，色谱行为相似并能完全分离，也不是NMDP的代谢产物。本实验所建立的方法，具有灵敏度高，专属性强，定量准确等特点，符合生物样品分析要求。
12名健康志愿者口服NMDP 60 mg后，药物在体内吸收消除均较快，0.57 h达到血药浓度峰值，血中峰浓度可达49.65 mg.L-1，2.16 h消除半衰期，在体内消除较完全其血浆清除率为0.5 mg.h-1.μg-1.L，说明该制剂在体内吸收良好，消除较完全，是一种优良的制剂。
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由于GC的高灵敏度， 本法还可用于其它体液中NMDP的定量，如脑脊液和乳汁等。
表2 健康志愿者口服NMDP的药动学参数(n=12) t1/2α(h)
t1/2β
(h)
Tmax
(h)
Cmax
(μg.L-1)
t1/2Ka
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(h)
AUC0～∞
(h.μg.L-1)
Vc/F
(L)
CL
(mg.h-1.μg-1.L)
0.32
2.16
0.57
, 百拇医药 49.65
0.20
119.52
0.64
0.50
作者简介：邝荔香，女，37岁，助理研究员参考文献
1，Qian M, Gallo JM. High-performance liquid chromatographic determination of the calcium channal blocker nimodipine in monkey plasma. J Chromatogr,1992;578(2):316～320
2，Gould RJ, Kenneth MM, Solomon HS. A simple radioreceptor assay for calcium antagonist drugs. Life Sci,1983;33(26):2 665～2 672
3，Jakobsen P, Mikkelsen EO. Determination of nimodipine by gas chromatography using electron-capture detection; external factors influencing nimodipine concentration during inrtraveous administration. J Chromatogr,1986;374(2):383～387
1999-12-09收稿，2000-05-19修回, 百拇医药