长沙地区疱疹病毒性脑炎的病原研究
作者：刘水平 肖扬名 夏忠弟 周爱东
单位：刘水平(微生物学教研室 长沙 410078)；肖扬名(微生物学教研室 长沙 410078)；夏忠弟(微生物学教研室 长沙 410078)；周爱东(微生物学教研室 长沙 410078)
关键词：脑炎；病毒性；单纯疱疹；荧光抗体技术
湖南医科大学学报000217 [摘要] 目的：探讨长沙地区病毒性脑炎与疱疹病毒 感染的关系。方法：应用间接免疫荧光技术(IFA)检测病毒性脑炎患者脑脊液或血清中疱疹 病毒特异性IgG，IgM。结果：921例病毒性脑炎患者中有133例(14.4%)诊断为单纯疱疹病毒 性脑炎，10岁以下年龄为发病高峰，9例(0.98%)诊断为巨细胞病毒性脑炎，12例(1.3%)为 水痘-带状疱疹病毒性脑炎。结论：长沙地区疱疹病毒性脑炎病原以单纯疱疹病毒最常见； IFA法对疱疹病毒性脑炎具有诊断价值。
, http://www.100md.com
[中图分类号] R373.31 [文献标识码] A [文章编号] 1000-5625(2000)02-0147-02
Study on the etiology of herpes viral encephalitis in Changsha area
LIU Shui-ping， XIAO Yang-ming, XIA Zhong-di, et al
Department of Microbiology, Hunan Medical University(Changsha, 410078)
[Abstract] Objective: To study the relationship between herpes viral infection and viral encephalitis. Methods： The cerebral spinal flu id(CSF) and sera of the patients with viral encephalitis were detected for herpe s virus-specific IgG and IgM with indirect fluorescent antibody assay (IFA). Re s ults： One hundred and thirty-three(14.4%) cases of 921 patients with viral enc ephalitis were diagnosed a s herpes simplex viral encephalitis, of which the maximum morbidity is under the age of 10, 9(0.98%) cases as cytomegaloviral encephalitis and 12(1.3%) cases as varicella-zoster viral encephalitis. Conclusion： Herpes simplex viruses are t h e common causative agents of viral encephalitis in Changsha area, and IFA is val uable for the diagnosis of herpes viral encephalitis.
, 百拇医药
[Key words] encephalitis,viral; herpes simplex; fluorescent antibody technique
病毒性脑炎是临床常见的中枢神经系统感染性疾病，病原有多种，以疱疹病毒最 为常见[1]。由于该病早期临床表现不典型，容易漏诊、误诊，导致病人死亡或残 废。近年来，特异性抗病毒药物无环鸟苷等的临床应用，疱疹病毒性脑炎的死亡率大为降低 [2]。因此，确诊其病原，以帮助临床早期诊断和治疗尤为重要。本研究用间接免 疫 荧光技术(IFA)对湖南省长沙地区921例临床诊断为病毒性脑炎患者的脑脊液或血清中单纯疱 疹病毒I型(HSV-1)，巨细胞病毒(CMV)，水痘一带状疱疹病毒(VZV)特异性IgG，IgM进行检 测，探讨长沙地区病毒性脑炎与疱疹病毒感染的关系。
1 资料与方法
1.1 一般资料 921例病毒性脑炎患者为1990年12月～1997年12月湖南医科 大学 附属湘雅医院、第二附属医院住院或门诊病人，根据临床综合病史、症状体征，CSF，EEG ，CT和/或MRI等资料确诊；其中男631例，女290例，年龄9月～72岁。全年发病无明显季节性。其他脑神经系统疾患26例(新型隐球菌脑炎8例，癫痫12例，结核性脑膜炎6例)。病人入院10d内或门诊病人取脑脊液或/和血清，其中有133例病人住院2～4周后第2次取脑脊液或/和血清供病毒抗体检测。
, 百拇医药
1.2 方法
1.2.1 三种病毒抗原片的制备 人胚肺成纤维细胞感染CMV或VZV，HeLa细胞感染H SV-1，当 细胞病变程度为+++～++++时，胰酶-EDTA消化细胞，加0.01 mol.L-1PBS(pH7.4) 吹 打，制成适量 浓度的细胞悬液(约105个/ml) ，涂片、干燥后4℃冷丙酮固定10 min，即为病毒抗原片 。
1.2.2 病毒特异性抗体检测 用IFA法按文献[3]进行。病人脑脊 液从原液、血清从1∶8开始倍比稀释，第二抗体为FITC标记的羊抗人IgG，IgM。加第一抗 体及第二抗体后孵育条件均为置湿盒37℃ 1 h，每次孵育后用0.01 mol.L-1PBS(pH 7.4)洗3次，每次5 min， 最后用蒸馏水漂洗1次，吹干后加甘油-PBS封片，在Nikon-114荧光显微镜下观察 特异性荧光。实验设阳性血清、阴性血清、PBS及正常细胞对照。
, 百拇医药
1.2.3 病毒抗体阳性结果判断 参考王得新等[4]方法，凡符合 下列情况者判为病毒性抗体阳性： ①脑脊液、血清病毒IgM阳性；②双份脑脊液、双份血清IgG抗体滴度4倍或4倍以 上升高；③单份血清标本IgG抗体滴度与脑脊液的IgG抗体滴度比值≤40。
2 结 果
在921例病毒性脑炎病人中，154例(16.7%)诊断为疱疹病毒性脑炎，以单纯疱疹 病毒脑炎检出率最高 (附表)。133例单纯疱疹病毒性脑炎患者 中～10岁48(36 .1%)例，～20 岁17(12.8%)例，～30岁20(15.0%)例，～40岁16(12.0%)例，>50岁32(24.1%)例。
附表 长沙地区921例病毒性脑炎病人3种疱疹病毒抗体诊断为 阳性结果(例数)
n
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HSV-1(%)
CMV(%)
VZV(%)
合 计(%)
病毒性脑炎
921
133(14.4)
9(0.98)
12(1.3)
154(16.7 )
新型隐球菌脑炎
8
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0
0
0
0
癫痫
12
0
0
0
0
结核性脑膜炎
6
0
0
, 百拇医药
0
0
3 讨 论
疱疹病毒为一组具有包膜、中等大小的双股DNA病毒。该组病毒可通过粘膜、胎盘、 器官移 植以及输血等多种途径感染人体。在人群中感染率高，且易形成潜伏感染。潜伏的病毒可被 某些机体内外因素激活，导致多种疾病。已有的研究表明，该组病毒中有4种即HSV，VZ V，CMV和EBV等能侵袭中枢神经系统，导致疱疹病毒性脑炎[1]。HSV引起的单纯疱疹性脑炎(HSE)是非流行性脑炎中最常见的类型，约占病毒性脑炎的2%～19 %和散发性坏死脑炎的20%～75%[5]。HSV有Ⅰ，Ⅱ两型，95%的单纯疱疹病毒脑炎由 HSV-Ⅰ引起。HSV-Ⅰ经口腔鼻粘膜感染人体，经 嗅神经和三叉神经进入颅内，潜伏于神经节内，在一定激发因素激活下致使神经节变性坏死 ，引起坏死性脑炎。一般认为，婴幼儿、儿童HSE多为HSV原发感染，由于其免疫系统发育和 特异性免疫之不足，导致HSE的发病率高。成年人HSE则多为潜伏病毒活化或再感染所致。
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人类巨细胞病毒(HCMV)感染非常普遍，以先天性感染、器官移植、AIDS病人感染最严重。HC MV先天性感染是引起先天性畸形的重要原因之一。VZV是引起 婴幼儿水痘和成人带状疱疹的病原，感染后可潜伏于脊后根神经节或脑感觉神经节的神经细 胞内。当机体免疫功能低下时，潜伏的病毒被激活，可引起机体严重机会性感染，如侵犯到 大脑，导致CMV脑炎[4]或VZV脑膜炎或脑炎。
疱疹病毒性脑炎预后较差，早期诊断是治疗成功 的关键。疱疹病毒性脑炎的确诊依赖于病原学检测，最有说服力的诊断方法是从脑组织或脑 脊液中分离到疱疹病毒，但从脑组织取材诊断的方法只能在死后或做活检，而后者是一种损 伤 性手术。从脑脊液中分离病毒的方法，一般分离率很低，仅4%左右，分离阴性不能排除疱疹 性脑炎[6]。PCR-DNA法敏感性高，特异性好且快速简便。但由于疱疹病毒在人群 中 感染率高，初次感染后很难被宿主完全清除，且DNA可渗入宿主细胞，因此，用PCR-DNA检 测 脑炎患者CSF中的疱疹病毒DNA在排除假阳性后也并非有绝对病原学联系。用IFA技术检测疱 疹病毒抗体，敏感性与特异性均高[7]。本研究用IFA法检测3种疱疹病毒性脑炎 ， 结果显示：①HSE可发生于任何年龄组，以10岁以下年龄为发病高峰，这符合HSV感染特征 ；②3种疱疹病毒脑炎检出率为16.7%，HSE检出率为14.4%，说明HSV为长沙地区乃至全国 疱疹病毒性脑炎的主要病原，CMV和VZV所致脑炎也不容忽视。这与国内外文献 的报道相似[4，7]，26例其他脑神经系统疾患检测均为阴性。说明IFA法具有诊 断价值。
, 百拇医药
参考文献：
[1] 肖波，彭永，肖剑峰，等.急性疱疹病毒性脑炎的治疗[J].中 风与神经疾病杂志，1998，15(1)：46-47.
[2] Editorial. Acute diagnosis of herpes simplex encephalitis[J]. La ncet, 1991,337:205-206.
[3] 孙颖，戴橄，吴洁如，等.长沙地区孕妇CMV感染状况及其临床追踪观察[J ].湖南医科大学学报，1994,19(1)：33-35.
[4] 王得新，冯子敬，张浩燕，等.巨细胞病毒致神经系统感染的证据[J]. 中国神经精神疾病杂志，1992,18(1)：24-26.
[5] 孙红斌.神经系统疾病理论与实践[M].成都：四川科技出版社，1996:15 6-157.
[6] Nahmias AJ, Whitley RJ, Visintine AN, et al. Herpes simplex Vi rus encephalitis: Laboratory evalutions and cheir diagnostic significance[J]. J in fect Disease 1982,145:829-836.
[7] 孟家眉.神经内科临床新进展[M].北京：北京出版社，1994:287-295., 百拇医药
单位：刘水平(微生物学教研室 长沙 410078)；肖扬名(微生物学教研室 长沙 410078)；夏忠弟(微生物学教研室 长沙 410078)；周爱东(微生物学教研室 长沙 410078)
关键词：脑炎；病毒性；单纯疱疹；荧光抗体技术
湖南医科大学学报000217 [摘要] 目的：探讨长沙地区病毒性脑炎与疱疹病毒 感染的关系。方法：应用间接免疫荧光技术(IFA)检测病毒性脑炎患者脑脊液或血清中疱疹 病毒特异性IgG，IgM。结果：921例病毒性脑炎患者中有133例(14.4%)诊断为单纯疱疹病毒 性脑炎，10岁以下年龄为发病高峰，9例(0.98%)诊断为巨细胞病毒性脑炎，12例(1.3%)为 水痘-带状疱疹病毒性脑炎。结论：长沙地区疱疹病毒性脑炎病原以单纯疱疹病毒最常见； IFA法对疱疹病毒性脑炎具有诊断价值。
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[中图分类号] R373.31 [文献标识码] A [文章编号] 1000-5625(2000)02-0147-02
Study on the etiology of herpes viral encephalitis in Changsha area
LIU Shui-ping， XIAO Yang-ming, XIA Zhong-di, et al
Department of Microbiology, Hunan Medical University(Changsha, 410078)
[Abstract] Objective: To study the relationship between herpes viral infection and viral encephalitis. Methods： The cerebral spinal flu id(CSF) and sera of the patients with viral encephalitis were detected for herpe s virus-specific IgG and IgM with indirect fluorescent antibody assay (IFA). Re s ults： One hundred and thirty-three(14.4%) cases of 921 patients with viral enc ephalitis were diagnosed a s herpes simplex viral encephalitis, of which the maximum morbidity is under the age of 10, 9(0.98%) cases as cytomegaloviral encephalitis and 12(1.3%) cases as varicella-zoster viral encephalitis. Conclusion： Herpes simplex viruses are t h e common causative agents of viral encephalitis in Changsha area, and IFA is val uable for the diagnosis of herpes viral encephalitis.
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[Key words] encephalitis,viral; herpes simplex; fluorescent antibody technique
病毒性脑炎是临床常见的中枢神经系统感染性疾病，病原有多种，以疱疹病毒最 为常见[1]。由于该病早期临床表现不典型，容易漏诊、误诊，导致病人死亡或残 废。近年来，特异性抗病毒药物无环鸟苷等的临床应用，疱疹病毒性脑炎的死亡率大为降低 [2]。因此，确诊其病原，以帮助临床早期诊断和治疗尤为重要。本研究用间接免 疫 荧光技术(IFA)对湖南省长沙地区921例临床诊断为病毒性脑炎患者的脑脊液或血清中单纯疱 疹病毒I型(HSV-1)，巨细胞病毒(CMV)，水痘一带状疱疹病毒(VZV)特异性IgG，IgM进行检 测，探讨长沙地区病毒性脑炎与疱疹病毒感染的关系。
1 资料与方法
1.1 一般资料 921例病毒性脑炎患者为1990年12月～1997年12月湖南医科 大学 附属湘雅医院、第二附属医院住院或门诊病人，根据临床综合病史、症状体征，CSF，EEG ，CT和/或MRI等资料确诊；其中男631例，女290例，年龄9月～72岁。全年发病无明显季节性。其他脑神经系统疾患26例(新型隐球菌脑炎8例，癫痫12例，结核性脑膜炎6例)。病人入院10d内或门诊病人取脑脊液或/和血清，其中有133例病人住院2～4周后第2次取脑脊液或/和血清供病毒抗体检测。
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1.2 方法
1.2.1 三种病毒抗原片的制备 人胚肺成纤维细胞感染CMV或VZV，HeLa细胞感染H SV-1，当 细胞病变程度为+++～++++时，胰酶-EDTA消化细胞，加0.01 mol.L-1PBS(pH7.4) 吹 打，制成适量 浓度的细胞悬液(约105个/ml) ，涂片、干燥后4℃冷丙酮固定10 min，即为病毒抗原片 。
1.2.2 病毒特异性抗体检测 用IFA法按文献[3]进行。病人脑脊 液从原液、血清从1∶8开始倍比稀释，第二抗体为FITC标记的羊抗人IgG，IgM。加第一抗 体及第二抗体后孵育条件均为置湿盒37℃ 1 h，每次孵育后用0.01 mol.L-1PBS(pH 7.4)洗3次，每次5 min， 最后用蒸馏水漂洗1次，吹干后加甘油-PBS封片，在Nikon-114荧光显微镜下观察 特异性荧光。实验设阳性血清、阴性血清、PBS及正常细胞对照。
, 百拇医药
1.2.3 病毒抗体阳性结果判断 参考王得新等[4]方法，凡符合 下列情况者判为病毒性抗体阳性： ①脑脊液、血清病毒IgM阳性；②双份脑脊液、双份血清IgG抗体滴度4倍或4倍以 上升高；③单份血清标本IgG抗体滴度与脑脊液的IgG抗体滴度比值≤40。
2 结 果
在921例病毒性脑炎病人中，154例(16.7%)诊断为疱疹病毒性脑炎，以单纯疱疹 病毒脑炎检出率最高 (附表)。133例单纯疱疹病毒性脑炎患者 中～10岁48(36 .1%)例，～20 岁17(12.8%)例，～30岁20(15.0%)例，～40岁16(12.0%)例，>50岁32(24.1%)例。
附表 长沙地区921例病毒性脑炎病人3种疱疹病毒抗体诊断为 阳性结果(例数)
n
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HSV-1(%)
CMV(%)
VZV(%)
合 计(%)
病毒性脑炎
921
133(14.4)
9(0.98)
12(1.3)
154(16.7 )
新型隐球菌脑炎
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疱疹病毒为一组具有包膜、中等大小的双股DNA病毒。该组病毒可通过粘膜、胎盘、 器官移 植以及输血等多种途径感染人体。在人群中感染率高，且易形成潜伏感染。潜伏的病毒可被 某些机体内外因素激活，导致多种疾病。已有的研究表明，该组病毒中有4种即HSV，VZ V，CMV和EBV等能侵袭中枢神经系统，导致疱疹病毒性脑炎[1]。HSV引起的单纯疱疹性脑炎(HSE)是非流行性脑炎中最常见的类型，约占病毒性脑炎的2%～19 %和散发性坏死脑炎的20%～75%[5]。HSV有Ⅰ，Ⅱ两型，95%的单纯疱疹病毒脑炎由 HSV-Ⅰ引起。HSV-Ⅰ经口腔鼻粘膜感染人体，经 嗅神经和三叉神经进入颅内，潜伏于神经节内，在一定激发因素激活下致使神经节变性坏死 ，引起坏死性脑炎。一般认为，婴幼儿、儿童HSE多为HSV原发感染，由于其免疫系统发育和 特异性免疫之不足，导致HSE的发病率高。成年人HSE则多为潜伏病毒活化或再感染所致。
, http://www.100md.com
人类巨细胞病毒(HCMV)感染非常普遍，以先天性感染、器官移植、AIDS病人感染最严重。HC MV先天性感染是引起先天性畸形的重要原因之一。VZV是引起 婴幼儿水痘和成人带状疱疹的病原，感染后可潜伏于脊后根神经节或脑感觉神经节的神经细 胞内。当机体免疫功能低下时，潜伏的病毒被激活，可引起机体严重机会性感染，如侵犯到 大脑，导致CMV脑炎[4]或VZV脑膜炎或脑炎。
疱疹病毒性脑炎预后较差，早期诊断是治疗成功 的关键。疱疹病毒性脑炎的确诊依赖于病原学检测，最有说服力的诊断方法是从脑组织或脑 脊液中分离到疱疹病毒，但从脑组织取材诊断的方法只能在死后或做活检，而后者是一种损 伤 性手术。从脑脊液中分离病毒的方法，一般分离率很低，仅4%左右，分离阴性不能排除疱疹 性脑炎[6]。PCR-DNA法敏感性高，特异性好且快速简便。但由于疱疹病毒在人群 中 感染率高，初次感染后很难被宿主完全清除，且DNA可渗入宿主细胞，因此，用PCR-DNA检 测 脑炎患者CSF中的疱疹病毒DNA在排除假阳性后也并非有绝对病原学联系。用IFA技术检测疱 疹病毒抗体，敏感性与特异性均高[7]。本研究用IFA法检测3种疱疹病毒性脑炎 ， 结果显示：①HSE可发生于任何年龄组，以10岁以下年龄为发病高峰，这符合HSV感染特征 ；②3种疱疹病毒脑炎检出率为16.7%，HSE检出率为14.4%，说明HSV为长沙地区乃至全国 疱疹病毒性脑炎的主要病原，CMV和VZV所致脑炎也不容忽视。这与国内外文献 的报道相似[4，7]，26例其他脑神经系统疾患检测均为阴性。说明IFA法具有诊 断价值。
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参考文献：
[1] 肖波，彭永，肖剑峰，等.急性疱疹病毒性脑炎的治疗[J].中 风与神经疾病杂志，1998，15(1)：46-47.
[2] Editorial. Acute diagnosis of herpes simplex encephalitis[J]. La ncet, 1991,337:205-206.
[3] 孙颖，戴橄，吴洁如，等.长沙地区孕妇CMV感染状况及其临床追踪观察[J ].湖南医科大学学报，1994,19(1)：33-35.
[4] 王得新，冯子敬，张浩燕，等.巨细胞病毒致神经系统感染的证据[J]. 中国神经精神疾病杂志，1992,18(1)：24-26.
[5] 孙红斌.神经系统疾病理论与实践[M].成都：四川科技出版社，1996:15 6-157.
[6] Nahmias AJ, Whitley RJ, Visintine AN, et al. Herpes simplex Vi rus encephalitis: Laboratory evalutions and cheir diagnostic significance[J]. J in fect Disease 1982,145:829-836.
[7] 孟家眉.神经内科临床新进展[M].北京：北京出版社，1994:287-295., 百拇医药