表皮生长因子受体在结直肠癌的表达及临床病理意义*
作者：戴起宝 许东坡 高凌云 郑 伟
单位：福建医科大学 戴起宝 许东坡 附属第一医院肿瘤外科(福州 350005)； 高凌云 郑 伟 病理解剖学教研室
关键词：表皮生长因子受体；结肠直肠肿瘤；免疫组织化学
福建医科大学学报990109 目的 探讨表皮生长因子受体(EGFR)在结直肠癌中的表达情况及其与病理特征和预后的关系。 方法 采用免疫组化SP法对有随访资料的55例结直肠癌标本进行EGFR检测,结合图像分析观察判定结果。 结果 结直肠癌EGFR表达的阳性率为69.09 %(38/55),EGFR的表达与肿瘤的浸润深度、淋巴结转移、Duke's分期和生存期有关 (P均<0.05),而与分化程度无关(P>0.05)。 结论 EGFR在结直肠癌的扩散和转移过程中可能产生一定的作用，并可作为预后判断的重要指标。
Expression of Epidermal Growth Factor Receptor in Colorectal Carcinomas and its Clinicopathological Significance
, http://www.100md.com
Dai Qibao1, Xu Dongpo1, Gao Lingyun2, et al
(1.Department of Tumor Surgery, First Affiliated Hospital,2.Department of Pathology, Fujian Medical University, Fuzhou, 350005)
Objective To study the expression of epidermal growth factor receptor(EGFR) in colorectal carcinomas, and its clincal and pathological significance. Methods EGFR was determined immunohistochemically in 55 specimens of colorectal carcinomas which had been followed-up regularly. The results were observed and judged through image analysis. Results The positive rate of EGFR in colorectal carcinomas was 69.09%(38/55). The expression of EGFR was concerned with infiltrative depth，lymphatic metastasis、Duke's stage and survival period of tumour(P<0.05 respectively)，but was irrelative to differential degrees(P>0.05). Conclusion EGFR might play a definite role in the process of diffusion and metastasis of colorectal carcinomas, and be used as an important index for the assessment of prognosis.
, 百拇医药
Key words epidermal growth factor receptor; colorectal carcinomas; immunohistochemistry
表皮生长因子受体(EGFR)作为原癌基因的表达产物是一种细胞膜受体,它是由1186个氨基酸组成、分子量为170 kD的跨膜糖蛋白,具有酪氨酸蛋白激酶活性。许多肿瘤组织均呈现EGFR过度表达，它对肿瘤生长的促进作用日益受到重视[1,2]。笔者采用免疫组化方法检测结直肠癌组织中EGFR 的表达,并应用图像分析法判定结果,探讨EGFR与结直肠癌的病理特征及预后的关系。
1 材料与方法
1.1 组织标本 选用我院1986～1993年有完整随访资料的结直肠癌石蜡标本55例,常规作厚4～5 μm切片,每例分别行HE和EGFR染色。患者男性40 例，女性15例,年龄29～77岁，平均52岁。直肠癌20例,结肠癌35例。高、中、低+未分化癌和粘液腺癌分别为29，11，11和4例,Duke's A、B、C、D期分别为4，31，16，4例。
, http://www.100md.com
1.2 试剂与方法 EGFR一抗(鼠抗人)由北京中山公司提供, 二抗试剂盒、SP及DAB由福州迈新公司提供。EGFR工作浓度为1∶50,EGFR 免疫组化染色采用美国Zymed公司1986年建立的SP法。以PBS 代替第一抗体作为阴性对照,以已知的乳腺癌阳性标本作为阳性对照。图像分析采用澳大利亚(Video Pro32)彩色图像分析仪。
1.3 统计处理 采用中国医学百科全书—统计学分册软件包及 Kaplan-Meier生存率曲线。
2 结 果
EGFR阳性棕色颗粒分布于胞膜及胞浆中(图1)。对每例标本测量4个不同高倍视野的灰度值后取平均值，再结合显微镜下观察结果予以分级。EGFR阴性17例(30.91%),阳性28例(50.91%),强阳性10例(18.18%)。EGFR表达与结直肠癌患者的年龄、性别、病变部位及肿瘤分化程度无关(P均>0.05); 而与浸润深度、淋巴结转移、Duke's分期及生存期有关(P均<0.05)。EGFR 表达情况与结直肠癌病理特征及生存率的关系见附表及图2。
, 百拇医药
附表 EGFR表达与结直肠癌病理特征及生存期的关系 分 组
n
阳性数
阳性率(%)
分化程度
高分化
29
18
62.07
中分化
11
9
81.82
, http://www.100md.com
低+未分化
15
11
73.33
浸润深度*
粘膜
4
1
25.00
肌层
16
14
87.50
, http://www.100md.com
全层
35
23
65.71
淋巴结转移*
有
20
18
90.00
无
35
20
57.14
, http://www.100md.com
Dukes分期*
A
4
1
25.00
B
31
19
61.29
C
16
14
87.50
, 百拇医药
D
4
4
100.00
生存期(年)*
<3
17
15
88.24
3～5
7
6
85.71
, http://www.100md.com
>5
31
17
54.84
*：与阴性数比较, P<0.05.
图1结直肠乳头状腺癌EGFR阳性表达 ×200
图2 EGFR表达与结直肠癌生存曲线图
阴性--- 阳性——
3 讨 论
, 百拇医药 肿瘤的发生发展与生长因子及其受体、癌基因及抗癌基因改变有关。表皮生长因子(EGF)受体在结构和功能上与某些癌基因(如C-erbB-2)十分类似、关系密切。EGF与靶细胞上的EGFR结合后,激活了受体上的酪氨酸蛋白激酶,产生一系列生物学效应,从而促进细胞的分裂增殖。研究发现人的多种上皮来源的肿瘤细胞呈现EGFR的过度表达,表明EGFR 与细胞的恶性转化密切相关。
Mayer等[3]采用免疫组化方法检测80例大肠癌,EGFR阳性表达<50%者预后明显好于EGFR表达>50%者。Nakae等[4]研究显示按Duke's 分期的大肠癌中,EGFR阳性表达率D>C>B>A,说明EGFR与大肠癌进展程度成正相关。庄小强等[5]亦有类似研究报道。刘光明等[6]采用125I进行放射配体结合试验,结果表明结直肠癌细胞膜表面EGFR 数量明显高于癌旁正常组织,提示EGFR在肿瘤的发生发展过程中起着重要的生长调节作用。
, http://www.100md.com
本研究显示结直肠癌EGFR阳性表达率为69.09%, 与国内外同类研究近似[4,5]。本组采用彩色图像分析仪测量切片标本的灰度值以判定染色结果，较人工计数染色细胞百分比更为客观、精确，国内鲜见类似报道[7]。分析表明EGFR的表达与患者的年龄、性别、病变部位、分化程度关系不大。然而，在肠壁受累的深浅、淋巴结转移的有无、临床病期的早晚以及存活时间的长短诸方面，EGFR阳性者与阴性者相比差异有显著性 (P均<0.05)，即浸润程度越深者、淋巴结转移者、Duke's分期越晚者,生存期越短者EGFR阳性率越高。作为重要的生物学特性，上述病理特征表明，EGFR阳性的结直肠癌患者具有更活跃的细胞分裂增殖能力, 更富于侵袭性的浸润、扩散、转移能力，因此其预后往往不佳。从K-P生存率曲线图亦可看出EGFR表达阳性患者生存率明显低于阴性者，提示EGFR可作为结直肠癌高度恶性的生物学指标,并可为判断患者预后提供重要参考。
鉴于EGFR与肿瘤的发生发展及预后有密切关系, 近年来国外学者正致力于以EGFR为“靶子”进行肿瘤免疫学治疗，特别是运用基因工程进行抗体研究,力求使其成为一种安全、特异、有效的治疗方法，为人类治疗肿瘤开辟新的途径。
, http://www.100md.com
*：福建省卫生厅科研基金资助项目(94357)
参考文献
[1]Steele RJ, Kelly P,Ellul B,et al. Epidermal growth factor receptor expression in colorectal cancer. Br J Surg,1990;77:1352
[2]姚 宏，赵玛丽，平苏萍，等. 表皮生长因子受体在大肠癌及癌前病变组织中的研究. 实用肿瘤杂志, 1995;10:77
[3]Mayer A,Takimoto M,Fritz E,et al. The prognostic significance of proliferating cell nuclear antigen epidermal growth factor receptor and mdr gene expression in colorectal cancer. Carcer, 1993;71:2454
, 百拇医药
[4]Nakae S, Shimada E,Urakawa T,et al. Study of c-erbB-2 protein and epidermal growth factor receptor expression and DNA ploidy pattern in colorectal carcinoma. J Surg Oncol, 1993;54:246
[5]庄小强，王晓怀，赖日权，等. 大肠癌c-myc蛋白和表皮生长因子受体的表达及其与预后的关系. 实用肿瘤学杂志, 1996;1:16
[6]刘光明,姜若兰. 人类结(直)肠癌细胞膜上表皮生长因子受体的研究. 中华肿瘤杂志, 1995;17:89
[7]郑智勇,吴文钰. 图像分析仪与定量诊断病理学. 诊断病理学杂志, 1996;4:246
(收稿：1998-10-21 修回：1999-01-14), 百拇医药
单位：福建医科大学 戴起宝 许东坡 附属第一医院肿瘤外科(福州 350005)； 高凌云 郑 伟 病理解剖学教研室
关键词：表皮生长因子受体；结肠直肠肿瘤；免疫组织化学
福建医科大学学报990109 目的 探讨表皮生长因子受体(EGFR)在结直肠癌中的表达情况及其与病理特征和预后的关系。 方法 采用免疫组化SP法对有随访资料的55例结直肠癌标本进行EGFR检测,结合图像分析观察判定结果。 结果 结直肠癌EGFR表达的阳性率为69.09 %(38/55),EGFR的表达与肿瘤的浸润深度、淋巴结转移、Duke's分期和生存期有关 (P均<0.05),而与分化程度无关(P>0.05)。 结论 EGFR在结直肠癌的扩散和转移过程中可能产生一定的作用，并可作为预后判断的重要指标。
Expression of Epidermal Growth Factor Receptor in Colorectal Carcinomas and its Clinicopathological Significance
, http://www.100md.com
Dai Qibao1, Xu Dongpo1, Gao Lingyun2, et al
(1.Department of Tumor Surgery, First Affiliated Hospital,2.Department of Pathology, Fujian Medical University, Fuzhou, 350005)
Objective To study the expression of epidermal growth factor receptor(EGFR) in colorectal carcinomas, and its clincal and pathological significance. Methods EGFR was determined immunohistochemically in 55 specimens of colorectal carcinomas which had been followed-up regularly. The results were observed and judged through image analysis. Results The positive rate of EGFR in colorectal carcinomas was 69.09%(38/55). The expression of EGFR was concerned with infiltrative depth，lymphatic metastasis、Duke's stage and survival period of tumour(P<0.05 respectively)，but was irrelative to differential degrees(P>0.05). Conclusion EGFR might play a definite role in the process of diffusion and metastasis of colorectal carcinomas, and be used as an important index for the assessment of prognosis.
, 百拇医药
Key words epidermal growth factor receptor; colorectal carcinomas; immunohistochemistry
表皮生长因子受体(EGFR)作为原癌基因的表达产物是一种细胞膜受体,它是由1186个氨基酸组成、分子量为170 kD的跨膜糖蛋白,具有酪氨酸蛋白激酶活性。许多肿瘤组织均呈现EGFR过度表达，它对肿瘤生长的促进作用日益受到重视[1,2]。笔者采用免疫组化方法检测结直肠癌组织中EGFR 的表达,并应用图像分析法判定结果,探讨EGFR与结直肠癌的病理特征及预后的关系。
1 材料与方法
1.1 组织标本 选用我院1986～1993年有完整随访资料的结直肠癌石蜡标本55例,常规作厚4～5 μm切片,每例分别行HE和EGFR染色。患者男性40 例，女性15例,年龄29～77岁，平均52岁。直肠癌20例,结肠癌35例。高、中、低+未分化癌和粘液腺癌分别为29，11，11和4例,Duke's A、B、C、D期分别为4，31，16，4例。
, http://www.100md.com
1.2 试剂与方法 EGFR一抗(鼠抗人)由北京中山公司提供, 二抗试剂盒、SP及DAB由福州迈新公司提供。EGFR工作浓度为1∶50,EGFR 免疫组化染色采用美国Zymed公司1986年建立的SP法。以PBS 代替第一抗体作为阴性对照,以已知的乳腺癌阳性标本作为阳性对照。图像分析采用澳大利亚(Video Pro32)彩色图像分析仪。
1.3 统计处理 采用中国医学百科全书—统计学分册软件包及 Kaplan-Meier生存率曲线。
2 结 果
EGFR阳性棕色颗粒分布于胞膜及胞浆中(图1)。对每例标本测量4个不同高倍视野的灰度值后取平均值，再结合显微镜下观察结果予以分级。EGFR阴性17例(30.91%),阳性28例(50.91%),强阳性10例(18.18%)。EGFR表达与结直肠癌患者的年龄、性别、病变部位及肿瘤分化程度无关(P均>0.05); 而与浸润深度、淋巴结转移、Duke's分期及生存期有关(P均<0.05)。EGFR 表达情况与结直肠癌病理特征及生存率的关系见附表及图2。
, 百拇医药
附表 EGFR表达与结直肠癌病理特征及生存期的关系 分 组
n
阳性数
阳性率(%)
分化程度
高分化
29
18
62.07
中分化
11
9
81.82
, http://www.100md.com
低+未分化
15
11
73.33
浸润深度*
粘膜
4
1
25.00
肌层
16
14
87.50
, http://www.100md.com
全层
35
23
65.71
淋巴结转移*
有
20
18
90.00
无
35
20
57.14
, http://www.100md.com
Dukes分期*
A
4
1
25.00
B
31
19
61.29
C
16
14
87.50
, 百拇医药
D
4
4
100.00
生存期(年)*
<3
17
15
88.24
3～5
7
6
85.71
, http://www.100md.com
>5
31
17
54.84
*：与阴性数比较, P<0.05.
图1结直肠乳头状腺癌EGFR阳性表达 ×200
图2 EGFR表达与结直肠癌生存曲线图
阴性--- 阳性——
3 讨 论
, 百拇医药 肿瘤的发生发展与生长因子及其受体、癌基因及抗癌基因改变有关。表皮生长因子(EGF)受体在结构和功能上与某些癌基因(如C-erbB-2)十分类似、关系密切。EGF与靶细胞上的EGFR结合后,激活了受体上的酪氨酸蛋白激酶,产生一系列生物学效应,从而促进细胞的分裂增殖。研究发现人的多种上皮来源的肿瘤细胞呈现EGFR的过度表达,表明EGFR 与细胞的恶性转化密切相关。
Mayer等[3]采用免疫组化方法检测80例大肠癌,EGFR阳性表达<50%者预后明显好于EGFR表达>50%者。Nakae等[4]研究显示按Duke's 分期的大肠癌中,EGFR阳性表达率D>C>B>A,说明EGFR与大肠癌进展程度成正相关。庄小强等[5]亦有类似研究报道。刘光明等[6]采用125I进行放射配体结合试验,结果表明结直肠癌细胞膜表面EGFR 数量明显高于癌旁正常组织,提示EGFR在肿瘤的发生发展过程中起着重要的生长调节作用。
, http://www.100md.com
本研究显示结直肠癌EGFR阳性表达率为69.09%, 与国内外同类研究近似[4,5]。本组采用彩色图像分析仪测量切片标本的灰度值以判定染色结果，较人工计数染色细胞百分比更为客观、精确，国内鲜见类似报道[7]。分析表明EGFR的表达与患者的年龄、性别、病变部位、分化程度关系不大。然而，在肠壁受累的深浅、淋巴结转移的有无、临床病期的早晚以及存活时间的长短诸方面，EGFR阳性者与阴性者相比差异有显著性 (P均<0.05)，即浸润程度越深者、淋巴结转移者、Duke's分期越晚者,生存期越短者EGFR阳性率越高。作为重要的生物学特性，上述病理特征表明，EGFR阳性的结直肠癌患者具有更活跃的细胞分裂增殖能力, 更富于侵袭性的浸润、扩散、转移能力，因此其预后往往不佳。从K-P生存率曲线图亦可看出EGFR表达阳性患者生存率明显低于阴性者，提示EGFR可作为结直肠癌高度恶性的生物学指标,并可为判断患者预后提供重要参考。
鉴于EGFR与肿瘤的发生发展及预后有密切关系, 近年来国外学者正致力于以EGFR为“靶子”进行肿瘤免疫学治疗，特别是运用基因工程进行抗体研究,力求使其成为一种安全、特异、有效的治疗方法，为人类治疗肿瘤开辟新的途径。
, http://www.100md.com
*：福建省卫生厅科研基金资助项目(94357)
参考文献
[1]Steele RJ, Kelly P,Ellul B,et al. Epidermal growth factor receptor expression in colorectal cancer. Br J Surg,1990;77:1352
[2]姚 宏，赵玛丽，平苏萍，等. 表皮生长因子受体在大肠癌及癌前病变组织中的研究. 实用肿瘤杂志, 1995;10:77
[3]Mayer A,Takimoto M,Fritz E,et al. The prognostic significance of proliferating cell nuclear antigen epidermal growth factor receptor and mdr gene expression in colorectal cancer. Carcer, 1993;71:2454
, 百拇医药
[4]Nakae S, Shimada E,Urakawa T,et al. Study of c-erbB-2 protein and epidermal growth factor receptor expression and DNA ploidy pattern in colorectal carcinoma. J Surg Oncol, 1993;54:246
[5]庄小强，王晓怀，赖日权，等. 大肠癌c-myc蛋白和表皮生长因子受体的表达及其与预后的关系. 实用肿瘤学杂志, 1996;1:16
[6]刘光明,姜若兰. 人类结(直)肠癌细胞膜上表皮生长因子受体的研究. 中华肿瘤杂志, 1995;17:89
[7]郑智勇,吴文钰. 图像分析仪与定量诊断病理学. 诊断病理学杂志, 1996;4:246
(收稿：1998-10-21 修回：1999-01-14), 百拇医药