泌宁颗粒剂质量控制方法研究
作者：刘斌 石任兵 周静 龚慕辛
单位：刘斌(北京中医药大学中药学院 北京 100029)‘石任兵(北京中医药大学中药学院 北京 100029)；周静(北京永安医药总公司 北京 100007)；龚慕辛(北京联合大学中医药学院 北京 100013)
关键词：泌宁颗粒剂；栀子甙；高效液相色谱；薄层色谱
北京中医药大学学报000114
摘 要：采用薄层色谱法鉴别了泌宁颗粒剂中的苍术、川黄柏、大黄及关木通；建立了高效液相色谱法测定制剂中栀子甙含量的方法；测定了3批样品中栀子甙的含量。结果表明该方法操作简便，灵敏度高，重现性良好。栀子甙的线性范围为1.012～3.036 μg (r=0.9992)，平均回收率为102.25% (RSD=0.98%)。
分类号：R284.1
, 百拇医药
Study on Quality Control of MiNing Granules
Liu Bin,Shi Renbing,Zhou Jing,et al.
(Beijing University of Traditional Chinese Medicine,Beijing 100029)
Abstract：Ingredients in MiNing granules including Cangzhu (Rhizoma Atractylodis),Chuanhuangbai (Cortex Phellodendri Chinese),Dahuang (Radix et Rhizoma Rhei) and Guanmutong (Caulis Aristolochiae Manshuriensis) and the contents of Geniposide in three batches of samples were analyzed respectively through TLC and HPLC.The results showed that,the method was easy,sensitive and repetitive.The linear range of Geniposide was 1.012μg～3.036μg (r=0.9992) and the average recovery was 102.25% (RSD=0.98%).
, 百拇医药
KEY WORDS：MiNing Granule; Geniposide; HPLC；TLC▲
泌宁颗粒剂由栀子、大黄、川黄柏、关木通等8味中药组成，具有清热利水、泻火通淋之功效，用于治疗下焦湿热引起的尿急、尿频、尿道灼热疼痛等急慢性泌尿系感染。为控制产品内在质量，保证疗效，我们对其进行了质量控制方法的研究。栀子为该方中主药，栀子甙为其主要成分，故确定栀子甙含量为泌宁颗粒剂质量控制的定量标准。文献中记载的栀子甙含量测定方法主要有薄层扫描法[1，2]和高效液相色谱法[3，4]。但由于制剂中其他成分的干扰，上述诸法所采用的测定条件均不能直接用于泌宁颗粒剂的质量控制。笔者经过反复试验，建立了高效液相色谱法测定泌宁颗粒剂中栀子甙含量的方法，并用建立的方法测定了3批样品中栀子甙的含量。结果表明，该方法操作简便，灵敏度高，重现性好，可用于泌宁颗粒剂的质量控制。此外，还利用薄层色谱法对制剂中的苍术、川黄柏、大黄及关木通进行了定性鉴别。
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1 仪器与试药
HP1050高效液相色谱仪,1/10万电子分析天平(日本岛津)；定量毛细管 (Drummond Scientific Co.USA)；硅胶G板(青岛海洋化工厂);中性氧化铝(100～200目，上海五四化学试剂厂)。
栀子甙、大黄素、盐酸小檗碱对照品，大黄、川黄柏、苍术、关木通对照药材，均购自中国药品生物制品检定所；泌宁颗粒剂、阴性对照样品，由北京联合大学中医药学院中药制剂教研室提供。其他药品及试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 定性鉴别
2.1.1 苍术的鉴别：取泌宁颗粒2g，加正己烷10 mL，超声提取15 min，过滤，滤液浓缩定容至5mL，作为样品液。另取除去苍术制成的阴性对照品2g，同法制备阴性对照液。再取苍术对照药材2g，粉碎过40目筛，同法制备阳性药材对照液。吸取上述阴性对照液10 μL，阳性药材对照液4μL和样品液10 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90 ℃)—醋酸乙酯(35∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷5%对二甲氨基苯甲醛的10%硫酸乙醇液显色，105 ℃加热至斑点显色清晰，自然光下观察。样品液色谱中，在与苍术对照液色谱相应位置显相同的污绿色斑点，而阴性对照液色谱无此斑点。见图1。
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图1 苍术TLC图谱
1 样品液
2 阴性对照液
3 阳性药材对照液
2.1.2 川黄柏的鉴别：取泌宁颗粒2 g，加甲醇40 mL，超声提取30 min，过滤，滤液浓缩至约2 mL，通过中性氧化铝柱(Al2O3 5 g ，柱长13 cm，内径8 mm)，以甲醇100 mL洗脱，收集洗脱液，回收甲醇至干，残留物用2 mL甲醇溶解，作为样品液。另取除去川黄柏制成的阴性对照品2 g，同法制备阴性对照液。再取川黄柏对照药材2 g，粉碎过40目筛，加水50 mL，煮提40 min，过滤，滤液蒸干，残留物用甲醇20 mL溶解，过滤，取滤液作为阳性药材对照液。同时取盐酸小檗碱对照品适量，加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液，作为对照品溶液。精密吸取上述阴性对照液4 μL 、阳性药材对照液1 μL 、盐酸小檗碱对照液1 μL和样品液2 μL ，分别点于同一硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯—氯仿—甲醇—浓氨液—二乙胺(8∶2∶2∶1∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，置365 nm紫外灯下观察。样品液色谱中，在与阳性药材对照液及盐酸小檗碱对照液色谱相应位置显相同的亮黄色荧光斑点，而阴性对照液色谱中无此斑点。见图2。
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图2 川黄柏TLC图谱
1 样品液
2 阴性对照液
3 阳性药材对照液
4 盐酸小檗碱对照液
2.1.3 大黄的鉴别：取泌宁颗粒2 g，加甲醇40 mL，超声提取30 min，过滤，滤液回收甲醇至干，残留物用乙醚溶解，过滤，滤液回收乙醚至干，残留物加甲醇3 mL溶解，作为样品液。另取除去大黄的阴性样品2 g，同法制备阴性对照液。再取大黄对照药材2 g，粉碎过40目筛，加甲醇40 mL，超声提取30 min，过滤，滤液回收甲醇至干，加20 mL水分散，用乙醚萃取3次(20、20、15 mL)，合并乙醚萃取液，回收乙醚至干，残留物加甲醇3 mL溶解，作为阳性药材对照液。同时取大黄素对照品适量，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作为对照品溶液。精密吸取上述阴性对照液4 μL 、阳性药材对照液2 μL 、大黄素对照液1 μL和样品液2 μL，分别点于同一硅胶G板上，以石油醚(30～60 ℃)—甲酸乙酯—甲酸(15∶5∶1)的上层液进行两次展开(上行展开，展距分别为5 cm和8 cm)，取出，晾干，置365 nm紫外灯下观察。样品液色谱中，在与阳性药材对照液色谱相应位置上显相同的5个橙黄色荧光斑点；与大黄素对照液色谱相应位置上显相同的橙黄色荧光斑点；薄层板经氨熏后，置自然光下检识，斑点变为红色。见图3。
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图3 大黄TLC图谱
1 样品液
2 阴性对照液
3 阳性药材对照液
4 大黄素对照液
2.1.4 关木通的鉴别：取泌宁颗粒2 g，加95%乙醇50 mL，超声提取25 min，过滤，滤液回收乙醇至干，残留物用甲醇4 mL溶解过滤，滤液通过中性氧化铝柱(柱长7 cm，内径6 mm)，用20 mL甲醇洗脱，洗脱液浓缩至5 mL，作为样品液。另取除去关木通的阴性样品2 g，同法制备阴性对照液。再取关木通对照药材2 g，粉碎过40目筛，加水50 mL，煮提40 min，过滤，滤液蒸干，残留物用甲醇10 mL溶解，过滤，滤液回收甲醇至约2 mL，通过中性氧化铝柱(柱长7 cm，内径 6 mm)，用20 mL甲醇洗脱，洗脱液回收甲醇至约5 mL，作为阳性药材对照液。精密吸取上述阴性对照液8 μL、阳性药材对照液6 μL、样品液6 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯—醋酸乙酯—水—甲酸(20∶10∶1∶1)的上层液展开，取出，晾干，置365 nm紫外灯下观察。样品液色谱中，在与阳性药材对照液色谱相应位置显相同的天蓝色及蓝绿色荧光斑点，而阴性对照液色谱中无此荧光斑点。见图4。
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图4 关木通TLC图谱
1 样品液
2 阴性对照液
3 阳性药材对照液
2.2 栀子甙含量测定2.2.1 供试品提取条件的筛选
(1)提取溶剂的选择：取同一批样品5份，精密称定，分别加入50%甲醇、75%乙醇、95%乙醇、水、10%乙腈10 mL，超声提取30 min，过滤，取续滤液2 mL，置10 mL容量瓶中，用相应溶剂稀释定容后，微孔滤膜过滤，进样20 μL，测定峰面积，计算含量。结果表明用水、50%甲醇、10%乙腈提取，栀子甙含量差异不大，但用水和10%乙腈提取样品后，过滤比较困难。故选择50%甲醇为提取溶剂。
(2)提取方法的选择：取同一批样品3份，精密称定，加50%甲醇10 mL，分别冷浸24 h，回流提取1 h和超声提取30 min，过滤，取续滤液2 mL，置10 mL容量瓶中，定容。微孔滤膜过滤,进样15 μL，测定峰面积，计算含量。测定结果表明，3种提取方法的提取效率差别不大，为方便操作，选择超声提取方法。
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(3)提取时间的选择：取同一批样品6份，精密称定，加50%甲醇10 mL，分别超声提取10、20、30、40、50、60 min。过滤，取续滤液2 mL，置10 mL容量瓶中定容。微孔滤膜过滤，进样15 μL，测定峰面积，计算含量。测定结果表明超声提取50 min即可提取完全。
2.2.2 测定溶液的制备
(1)供试品溶液的制备：取泌宁颗粒0.5 g，精密称定，加50%甲醇10 mL，超声提取50 min，过滤，取续滤液2 mL，置10 mL容量瓶中，用50%甲醇溶解定容至刻度，微孔滤膜过滤后备用。
(2) 对照品溶液的配制：精密称取栀子甙对照品2.53 mg，置2 mL容量瓶中，用10%乙腈水溶液溶解定容。精密吸取1 mL，再定容至5 mL，备用。
2.2.3 测定方法的考察
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(1)系统适应性实验：色谱柱：YWG-C18色谱柱(250 mm×4 mm)；流动相：10%乙腈水溶液；测定波长：240 nm；流速：1.2 mL/min；衰减：7；柱温：室温；在此条件下，样品中栀子甙得到满意分离，栀子甙的理论塔板数大于5 000，而阴性样品未见干扰。见图5。
t/min
图5 HPLC色谱图
A 阴性对照液 B 样品液 C 栀子甙对照品液
(2)线性关系考察：精密吸取栀子甙对照品溶液4、6、8、10、12 μL 进样，测定峰面积。以对照品含量为横坐标，峰面积为纵坐标作图，得一直线，回归方程为Y=1061.66X+172.0,r=0.9992。结果表明，栀子甙在1.012～3.036 μg范围内线性关系良好。
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(3)精密度考察： 取同一样品连续进样5次，测定峰面积，RSD=0.46%；取同一样品分别于同一日早、中、晚各进样1次，测定峰面积，RSD=0.95%；取同一样品连续3 d在同一时间进样，测定峰面积，RSD=1.25%。
(4)重现性考察：对同一批样品重复测定5次，栀子甙含量的相对标准偏差RSD=2.05%。
(5)回收率试验：取同一样品5份，每份约0.25 g，精密称定，分别加入一定量的栀子甙对照品，依供试品制备项下方法制备供试液，测定含量，计算平均回收率为102.25%，RSD=0.98%。见表1。
表1 样品回收率试验结果 (mg) 样品中
栀子甙量
加入栀
子甙量
, 百拇医药
测定总量
回收率/%
2.94
2.76
5.79
102.93
2.94
2.87
5.94
104.22
3.01
2.85
5.94
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102.70
2.97
2.82
5.98
103.65
2.92
2.94
5.80
97.76
2.2.4 样品测定
精密吸取供试品溶液15 μL，对照品溶液6、10 μL，进样，测定峰面积，计算含量。结果见表2。
表2 样品含量测定结果(n=3) 批号
, 百拇医药
含量/%
RSD/%
990330
1.164
1.13
990331
1.160
1.09
990401
1.186
0.71
3 讨论
(1)鉴别大黄时，曾以苯—甲酸乙酯—甲酸(20∶3∶1)为展开剂展开，近原点的3个斑点分离效果很好，但近前沿的2个斑点重叠成1个斑点。用《中华人民共和国药典》(1995年版，一部)鉴别大黄的溶剂系统石油醚(30～60 ℃)—甲酸乙酯—甲酸(15∶5∶1)的上层液展开，结果层析斑点的Rf过小，分离效果不好；经用上述系统两次展开后，大黄的5个层析斑点完全分开且圆整。
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(2)《中华人民共和国药典》(1995年版，一部)在鉴别关木通时，以马兜铃酸为对照品，进行TLC检查。泌宁颗粒剂由于方中大黄成分的干扰，难以检出。改用正文所述方法，分离效果较好。但鉴别的斑点属关木通中的哪类成分，目前尚不清楚，有待进一步研究。
(3)鉴别川黄柏时，我们曾采用正丁醇—36%醋酸—水(7∶1∶2)的上层溶液进行展开，发现样品中盐酸小檗碱斑点的Rf值远远大于盐酸小檗碱对照品及药材中盐酸小檗碱斑点的Rf值，且斑点拖尾严重。为了探明原因，我们将盐酸小檗碱对照品、川黄柏对照药材、样品、样品+川黄柏对照药材、样品+盐酸小檗碱分别点于同一硅胶G薄层板上，展开后发现，在样品、样品+川黄柏对照药材、样品+盐酸小檗碱三者的层析图谱中，盐酸小檗碱的Rf值基本一致，远远高于盐酸小檗碱对照品和川黄柏对照药材，而在前三者的层析图谱中，在与盐酸小檗碱对照品相应位置上没有斑点。我们分析造成这种情况的原因可能是盐酸小檗碱与制剂中其他成分发生了作用，导致其极性降低，Rf值增大。■
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作者简介：刘斌,男,31岁,医学硕士,讲师
参考文献：
[1]苏 健，王宝琴.复方栀子冲剂栀子甙薄层扫描测定.中成药,1993，15(1)：16～17
[2]周立红，钟述华.栀子及其口服液中栀子甙的含量测定.中草药,1994，25 (12):627～628
[3]狄留庆，郭 戎，谢 辉，等.高效液相色谱法测定加味逍遥丸中栀子甙和芍药甙.中国中药杂志，1997，22(11):671～673
[4]聂凌云，曹 红，刘文尧，等.反相高效液相色谱法测定复方茵陈注射液中栀子甙的含量.药物分析杂志，1997，17(6):412～414
(收稿日期：1999-08-15), 百拇医药
单位：刘斌(北京中医药大学中药学院 北京 100029)‘石任兵(北京中医药大学中药学院 北京 100029)；周静(北京永安医药总公司 北京 100007)；龚慕辛(北京联合大学中医药学院 北京 100013)
关键词：泌宁颗粒剂；栀子甙；高效液相色谱；薄层色谱
北京中医药大学学报000114
摘 要：采用薄层色谱法鉴别了泌宁颗粒剂中的苍术、川黄柏、大黄及关木通；建立了高效液相色谱法测定制剂中栀子甙含量的方法；测定了3批样品中栀子甙的含量。结果表明该方法操作简便，灵敏度高，重现性良好。栀子甙的线性范围为1.012～3.036 μg (r=0.9992)，平均回收率为102.25% (RSD=0.98%)。
分类号：R284.1
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Study on Quality Control of MiNing Granules
Liu Bin,Shi Renbing,Zhou Jing,et al.
(Beijing University of Traditional Chinese Medicine,Beijing 100029)
Abstract：Ingredients in MiNing granules including Cangzhu (Rhizoma Atractylodis),Chuanhuangbai (Cortex Phellodendri Chinese),Dahuang (Radix et Rhizoma Rhei) and Guanmutong (Caulis Aristolochiae Manshuriensis) and the contents of Geniposide in three batches of samples were analyzed respectively through TLC and HPLC.The results showed that,the method was easy,sensitive and repetitive.The linear range of Geniposide was 1.012μg～3.036μg (r=0.9992) and the average recovery was 102.25% (RSD=0.98%).
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KEY WORDS：MiNing Granule; Geniposide; HPLC；TLC▲
泌宁颗粒剂由栀子、大黄、川黄柏、关木通等8味中药组成，具有清热利水、泻火通淋之功效，用于治疗下焦湿热引起的尿急、尿频、尿道灼热疼痛等急慢性泌尿系感染。为控制产品内在质量，保证疗效，我们对其进行了质量控制方法的研究。栀子为该方中主药，栀子甙为其主要成分，故确定栀子甙含量为泌宁颗粒剂质量控制的定量标准。文献中记载的栀子甙含量测定方法主要有薄层扫描法[1，2]和高效液相色谱法[3，4]。但由于制剂中其他成分的干扰，上述诸法所采用的测定条件均不能直接用于泌宁颗粒剂的质量控制。笔者经过反复试验，建立了高效液相色谱法测定泌宁颗粒剂中栀子甙含量的方法，并用建立的方法测定了3批样品中栀子甙的含量。结果表明，该方法操作简便，灵敏度高，重现性好，可用于泌宁颗粒剂的质量控制。此外，还利用薄层色谱法对制剂中的苍术、川黄柏、大黄及关木通进行了定性鉴别。
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1 仪器与试药
HP1050高效液相色谱仪,1/10万电子分析天平(日本岛津)；定量毛细管 (Drummond Scientific Co.USA)；硅胶G板(青岛海洋化工厂);中性氧化铝(100～200目，上海五四化学试剂厂)。
栀子甙、大黄素、盐酸小檗碱对照品，大黄、川黄柏、苍术、关木通对照药材，均购自中国药品生物制品检定所；泌宁颗粒剂、阴性对照样品，由北京联合大学中医药学院中药制剂教研室提供。其他药品及试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 定性鉴别
2.1.1 苍术的鉴别：取泌宁颗粒2g，加正己烷10 mL，超声提取15 min，过滤，滤液浓缩定容至5mL，作为样品液。另取除去苍术制成的阴性对照品2g，同法制备阴性对照液。再取苍术对照药材2g，粉碎过40目筛，同法制备阳性药材对照液。吸取上述阴性对照液10 μL，阳性药材对照液4μL和样品液10 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90 ℃)—醋酸乙酯(35∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷5%对二甲氨基苯甲醛的10%硫酸乙醇液显色，105 ℃加热至斑点显色清晰，自然光下观察。样品液色谱中，在与苍术对照液色谱相应位置显相同的污绿色斑点，而阴性对照液色谱无此斑点。见图1。
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图1 苍术TLC图谱
1 样品液
2 阴性对照液
3 阳性药材对照液
2.1.2 川黄柏的鉴别：取泌宁颗粒2 g，加甲醇40 mL，超声提取30 min，过滤，滤液浓缩至约2 mL，通过中性氧化铝柱(Al2O3 5 g ，柱长13 cm，内径8 mm)，以甲醇100 mL洗脱，收集洗脱液，回收甲醇至干，残留物用2 mL甲醇溶解，作为样品液。另取除去川黄柏制成的阴性对照品2 g，同法制备阴性对照液。再取川黄柏对照药材2 g，粉碎过40目筛，加水50 mL，煮提40 min，过滤，滤液蒸干，残留物用甲醇20 mL溶解，过滤，取滤液作为阳性药材对照液。同时取盐酸小檗碱对照品适量，加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液，作为对照品溶液。精密吸取上述阴性对照液4 μL 、阳性药材对照液1 μL 、盐酸小檗碱对照液1 μL和样品液2 μL ，分别点于同一硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯—氯仿—甲醇—浓氨液—二乙胺(8∶2∶2∶1∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，置365 nm紫外灯下观察。样品液色谱中，在与阳性药材对照液及盐酸小檗碱对照液色谱相应位置显相同的亮黄色荧光斑点，而阴性对照液色谱中无此斑点。见图2。
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图2 川黄柏TLC图谱
1 样品液
2 阴性对照液
3 阳性药材对照液
4 盐酸小檗碱对照液
2.1.3 大黄的鉴别：取泌宁颗粒2 g，加甲醇40 mL，超声提取30 min，过滤，滤液回收甲醇至干，残留物用乙醚溶解，过滤，滤液回收乙醚至干，残留物加甲醇3 mL溶解，作为样品液。另取除去大黄的阴性样品2 g，同法制备阴性对照液。再取大黄对照药材2 g，粉碎过40目筛，加甲醇40 mL，超声提取30 min，过滤，滤液回收甲醇至干，加20 mL水分散，用乙醚萃取3次(20、20、15 mL)，合并乙醚萃取液，回收乙醚至干，残留物加甲醇3 mL溶解，作为阳性药材对照液。同时取大黄素对照品适量，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作为对照品溶液。精密吸取上述阴性对照液4 μL 、阳性药材对照液2 μL 、大黄素对照液1 μL和样品液2 μL，分别点于同一硅胶G板上，以石油醚(30～60 ℃)—甲酸乙酯—甲酸(15∶5∶1)的上层液进行两次展开(上行展开，展距分别为5 cm和8 cm)，取出，晾干，置365 nm紫外灯下观察。样品液色谱中，在与阳性药材对照液色谱相应位置上显相同的5个橙黄色荧光斑点；与大黄素对照液色谱相应位置上显相同的橙黄色荧光斑点；薄层板经氨熏后，置自然光下检识，斑点变为红色。见图3。
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图3 大黄TLC图谱
1 样品液
2 阴性对照液
3 阳性药材对照液
4 大黄素对照液
2.1.4 关木通的鉴别：取泌宁颗粒2 g，加95%乙醇50 mL，超声提取25 min，过滤，滤液回收乙醇至干，残留物用甲醇4 mL溶解过滤，滤液通过中性氧化铝柱(柱长7 cm，内径6 mm)，用20 mL甲醇洗脱，洗脱液浓缩至5 mL，作为样品液。另取除去关木通的阴性样品2 g，同法制备阴性对照液。再取关木通对照药材2 g，粉碎过40目筛，加水50 mL，煮提40 min，过滤，滤液蒸干，残留物用甲醇10 mL溶解，过滤，滤液回收甲醇至约2 mL，通过中性氧化铝柱(柱长7 cm，内径 6 mm)，用20 mL甲醇洗脱，洗脱液回收甲醇至约5 mL，作为阳性药材对照液。精密吸取上述阴性对照液8 μL、阳性药材对照液6 μL、样品液6 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯—醋酸乙酯—水—甲酸(20∶10∶1∶1)的上层液展开，取出，晾干，置365 nm紫外灯下观察。样品液色谱中，在与阳性药材对照液色谱相应位置显相同的天蓝色及蓝绿色荧光斑点，而阴性对照液色谱中无此荧光斑点。见图4。
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图4 关木通TLC图谱
1 样品液
2 阴性对照液
3 阳性药材对照液
2.2 栀子甙含量测定2.2.1 供试品提取条件的筛选
(1)提取溶剂的选择：取同一批样品5份，精密称定，分别加入50%甲醇、75%乙醇、95%乙醇、水、10%乙腈10 mL，超声提取30 min，过滤，取续滤液2 mL，置10 mL容量瓶中，用相应溶剂稀释定容后，微孔滤膜过滤，进样20 μL，测定峰面积，计算含量。结果表明用水、50%甲醇、10%乙腈提取，栀子甙含量差异不大，但用水和10%乙腈提取样品后，过滤比较困难。故选择50%甲醇为提取溶剂。
(2)提取方法的选择：取同一批样品3份，精密称定，加50%甲醇10 mL，分别冷浸24 h，回流提取1 h和超声提取30 min，过滤，取续滤液2 mL，置10 mL容量瓶中，定容。微孔滤膜过滤,进样15 μL，测定峰面积，计算含量。测定结果表明，3种提取方法的提取效率差别不大，为方便操作，选择超声提取方法。
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(3)提取时间的选择：取同一批样品6份，精密称定，加50%甲醇10 mL，分别超声提取10、20、30、40、50、60 min。过滤，取续滤液2 mL，置10 mL容量瓶中定容。微孔滤膜过滤，进样15 μL，测定峰面积，计算含量。测定结果表明超声提取50 min即可提取完全。
2.2.2 测定溶液的制备
(1)供试品溶液的制备：取泌宁颗粒0.5 g，精密称定，加50%甲醇10 mL，超声提取50 min，过滤，取续滤液2 mL，置10 mL容量瓶中，用50%甲醇溶解定容至刻度，微孔滤膜过滤后备用。
(2) 对照品溶液的配制：精密称取栀子甙对照品2.53 mg，置2 mL容量瓶中，用10%乙腈水溶液溶解定容。精密吸取1 mL，再定容至5 mL，备用。
2.2.3 测定方法的考察
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(1)系统适应性实验：色谱柱：YWG-C18色谱柱(250 mm×4 mm)；流动相：10%乙腈水溶液；测定波长：240 nm；流速：1.2 mL/min；衰减：7；柱温：室温；在此条件下，样品中栀子甙得到满意分离，栀子甙的理论塔板数大于5 000，而阴性样品未见干扰。见图5。
t/min
图5 HPLC色谱图
A 阴性对照液 B 样品液 C 栀子甙对照品液
(2)线性关系考察：精密吸取栀子甙对照品溶液4、6、8、10、12 μL 进样，测定峰面积。以对照品含量为横坐标，峰面积为纵坐标作图，得一直线，回归方程为Y=1061.66X+172.0,r=0.9992。结果表明，栀子甙在1.012～3.036 μg范围内线性关系良好。
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(3)精密度考察： 取同一样品连续进样5次，测定峰面积，RSD=0.46%；取同一样品分别于同一日早、中、晚各进样1次，测定峰面积，RSD=0.95%；取同一样品连续3 d在同一时间进样，测定峰面积，RSD=1.25%。
(4)重现性考察：对同一批样品重复测定5次，栀子甙含量的相对标准偏差RSD=2.05%。
(5)回收率试验：取同一样品5份，每份约0.25 g，精密称定，分别加入一定量的栀子甙对照品，依供试品制备项下方法制备供试液，测定含量，计算平均回收率为102.25%，RSD=0.98%。见表1。
表1 样品回收率试验结果 (mg) 样品中
栀子甙量
加入栀
子甙量
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测定总量
回收率/%
2.94
2.76
5.79
102.93
2.94
2.87
5.94
104.22
3.01
2.85
5.94
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102.70
2.97
2.82
5.98
103.65
2.92
2.94
5.80
97.76
2.2.4 样品测定
精密吸取供试品溶液15 μL，对照品溶液6、10 μL，进样，测定峰面积，计算含量。结果见表2。
表2 样品含量测定结果(n=3) 批号
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含量/%
RSD/%
990330
1.164
1.13
990331
1.160
1.09
990401
1.186
0.71
3 讨论
(1)鉴别大黄时，曾以苯—甲酸乙酯—甲酸(20∶3∶1)为展开剂展开，近原点的3个斑点分离效果很好，但近前沿的2个斑点重叠成1个斑点。用《中华人民共和国药典》(1995年版，一部)鉴别大黄的溶剂系统石油醚(30～60 ℃)—甲酸乙酯—甲酸(15∶5∶1)的上层液展开，结果层析斑点的Rf过小，分离效果不好；经用上述系统两次展开后，大黄的5个层析斑点完全分开且圆整。
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(2)《中华人民共和国药典》(1995年版，一部)在鉴别关木通时，以马兜铃酸为对照品，进行TLC检查。泌宁颗粒剂由于方中大黄成分的干扰，难以检出。改用正文所述方法，分离效果较好。但鉴别的斑点属关木通中的哪类成分，目前尚不清楚，有待进一步研究。
(3)鉴别川黄柏时，我们曾采用正丁醇—36%醋酸—水(7∶1∶2)的上层溶液进行展开，发现样品中盐酸小檗碱斑点的Rf值远远大于盐酸小檗碱对照品及药材中盐酸小檗碱斑点的Rf值，且斑点拖尾严重。为了探明原因，我们将盐酸小檗碱对照品、川黄柏对照药材、样品、样品+川黄柏对照药材、样品+盐酸小檗碱分别点于同一硅胶G薄层板上，展开后发现，在样品、样品+川黄柏对照药材、样品+盐酸小檗碱三者的层析图谱中，盐酸小檗碱的Rf值基本一致，远远高于盐酸小檗碱对照品和川黄柏对照药材，而在前三者的层析图谱中，在与盐酸小檗碱对照品相应位置上没有斑点。我们分析造成这种情况的原因可能是盐酸小檗碱与制剂中其他成分发生了作用，导致其极性降低，Rf值增大。■
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作者简介：刘斌,男,31岁,医学硕士,讲师
参考文献：
[1]苏 健，王宝琴.复方栀子冲剂栀子甙薄层扫描测定.中成药,1993，15(1)：16～17
[2]周立红，钟述华.栀子及其口服液中栀子甙的含量测定.中草药,1994，25 (12):627～628
[3]狄留庆，郭 戎，谢 辉，等.高效液相色谱法测定加味逍遥丸中栀子甙和芍药甙.中国中药杂志，1997，22(11):671～673
[4]聂凌云，曹 红，刘文尧，等.反相高效液相色谱法测定复方茵陈注射液中栀子甙的含量.药物分析杂志，1997，17(6):412～414
(收稿日期：1999-08-15), 百拇医药