不同产地知母中芒果甙、新芒果甙的含量测定
作者：陈万生 李力 乔传卓 戴富宝
单位：陈万生(第二军医大学 药学院，上海 200433)；李力(第二军医大学 药学院，上海 200433)；乔传卓(第二军医大学 药学院，上海 200433)；戴富宝(第二军医大学 药学院，上海 200433)
关键词：知母；芒果甙；新芒果甙；高效液相色谱法；含量测定▲
中国中药杂志000208 摘 要：目的：探讨生长环境对知母品质的影响。方法：高效液相色谱法考察测定不同产地、同一生长期知母不同部位中芒果甙等双苯吡酮类成分。结果：本法测定知母根茎中芒果甙及新芒果甙含量快速、准确、重现性好；芒果甙、新芒果甙含量及两者含量之比在各产地间变异较大。根、叶中芒果甙含量较高。结论：多数产地知母根茎、根、叶中芒果甙含量较高，知母入药可不去根，叶可作为芒果的一个天然来源。
知母为百合科植物知母Anemarrhena asphodeloides Bunge的根茎，具有滋阴降火、润燥、滑肠的功效，含有皂甙、木脂素及黄酮类等多种成分；芒果甙是知母清热作用的有效成分，它还具有祛痰镇咳、强心、利尿、抗忧郁、抗炎、抗病毒等作用[1]，孟强骅还发现芒果甙(0.1 μl)具有免疫抑制作用而不影响细胞活动[2]，洪永福的研究还发现知母中含有另一种新双苯吡酮类化合物新芒果甙[3]。知母虽为单一品种，但分布较广，经验认为各地产之药材品质差异较大，现代生药学研究资料表明，药用植物种内的变异和生长环境因素是影响生药品质的重要因素，中药作用的物质基础是其所含有的化学成分，为探讨生长环境对知母品质的影响，本文选择芒果甙等双苯吡酮类成分，建立高效液相色谱法考察测定了不同产地、同一生长期知母不同部位中该类成分含量的变化。
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1 仪器与试剂
1.1 仪器：高效液相色谱仪 Waters 510；紫外检测器 Waters 490；数据处理机 Waters 740；进样器Hamilton(25 μl)。
1.2 样品：知母根茎、根及叶由作者采集并鉴定，产地及采集时间见表1。芒果甙、新芒果甙标准品由本室洪永福教授提供。
表1 不同产地知母根茎中黄酮类成分含量 产地
采集时间
年-月-日
芒果甙
/%
新芒果甙
, 百拇医药
/%
比值
山东省平度市
1992-05-08
0.60
2.75
1∶5
山西省稷山县
1992-04-22
1.23
1.33
1∶1
天津蓟县
, 百拇医药
1992-05-20
2.31
0.54
4∶1
河南省济源市
1992-04-20
1.75
0.35
5∶1
内蒙古乌兰浩特市
1992-05-18
1.33
, 百拇医药 0.71
2∶1
黑龙江省哈尔滨市
1992-05-24
1.59
0.41
4∶1
甘肃省西峰市
1992-04-28
2.38
0.48
5∶1
山东省知母栽培品
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1995-04-18
0.61
2.80
1∶5
1.3 试剂：冰醋酸(AR)，二氧六环(AR)，甲醇(AR)，重蒸馏水。
2 方法与结果
2.1 色谱条件：色谱柱为Lichrosorb Rp-C1810 μm (4.6 mm×250 mm)，检测波长为320 nm，检测器灵敏度为0.50，流动相为甲醇-5%醋酸液(30∶70)，流速为0.8 ml.min-1，进样量为10.0 μl。
2.2 标准液制备及标准曲线制备：标准品一定量置10 ml容量瓶以甲醇-二氧六环(1∶1)混合液溶解并定容。芒果甙浓度为0.445 mg.ml-1，新芒果甙为0.103 mg.ml-1。
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分别精取芒果甙标准液0.5，1.0，1.5，2.0，2.5 ml置10 ml容量瓶中，以甲醇-二氧六环(1∶1)混合液稀释并定容，各进样10 μl进行定量分析；新芒果甙标准液分别进样2.0，4.0，6.0，8.0，10.0μl进行定量分析，数据处理机给出峰面积值，以标准品进样量(μg)为纵坐标(Y)，峰面积为横坐标(X)，得回归方程：芒果甙Y1=0.0135+2.0648×10-7X1(0.22～1.11 μg),r=0.9998；新芒果甙Y2=0.0086+3.769×10-7X2(0.206～1.032 μg),r=0.9997。
2.3 样品液制备：精取知母根、根茎、叶粉末(过20目筛)0.5 g，置索氏提取器中以甲醇提取5 h，提取液回收甲醇至干，残渣以甲醇-二氧六环(1∶1)混合液溶解，洗涤不溶物，两部分液合并，定容至25.0 ml，取此液1.0 ml，以甲醇-二氧六环(1∶1)混合液稀释至10.0 ml，每个样本制备3份，即为供试液。
, 百拇医药
2.4 方法精密度试验：选用哈尔滨产知母根茎样品液进行试验，每次进样10.0 μl，连续进样7次，测定芒果甙峰面积值(A)，分别为1402730，1544727，1412923，1470645，1506384，1492789，1473693，平均值为1472270，RSD=3.4%。
2.5 回收率测定：精密量取哈尔滨产知母(移植于本校药圃6 a)根茎粉末0.1 g，共3份，分别加入芒果甙标准液(0.512 mg.ml-1)2，4，6 ml及新芒果甙标准液(0.175 mg.ml-1)，1，2，3 ml，按样品液制备及测定项下条件操作，重复3次，芒果甙加样回收率为98.7%，RSD=2.2%，新芒果甙加样回收率为100.2%，RSD=2.47%。
2.6 样品测定：以供试液进样10.0 μl，知母根茎、根、叶的色谱图见图1，含量测定结果见表1、表2，百分含量计算公式如下：
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式中：G为由标准曲线求得相当于标准品的量(μg)；W为生药样品量(g)。
图1 知母HPLC图谱
A.根茎(山东平度) B.根茎(乌兰浩特)
C.根(乌兰浩特) D.叶(乌兰浩特) 1.新芒果甙 2.芒果甙
表2 不同产地知母根、叶中芒果甙含量 % 产地
根
叶
河南省济源市
3.03
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0.27
山西省稷山县
2.15
2.09
甘肃省西峰市
1.78
0.48
内蒙古乌兰浩特市
3.16
1.78
黑龙江省哈尔滨市
1.11
3.39
, 百拇医药
3 讨论
知母中芒果甙的分析方法，文献报道的有TLC-洗脱比色法[4]以及TLC薄层扫描法[5]，本文首先建立了HPLC法，在本实验条件下，能将知母根茎中芒果甙、新芒果甙与其它成分很好地分离开，芒果甙、新芒果甙色谱峰保留时间为14.0 min以及7.8 min，峰形对称，不拖尾，该法具有快速、准确、重现性好等优点。相同采收期、不同产地知母根茎中芒果甙含量变异很大，天津、甘肃产知母根茎中含量最高，可达2.31%，2.38%，而山东产知母仅有0.6%，支持了传统上认为河北知母质优的说法，我国知母主产河北、山西、内蒙古，而三地产知母根茎中芒果甙含量相差可达两倍以上，进一步提示我们知母商品流通时须注明产地，以利于合理用药。
产地不同,新芒果甙含量不同,多数产地含量甚微，而山东平度产知母根茎中含量很高，高达2.75%，大大高于其中芒果甙含量，对移栽本校药圃3 a后的山东知母根茎成分的进一步考察表明，栽培后山东知母仍然保留原来高含量新芒果甙、低含量芒果甙特点。表2表明，根、叶中皆有较大的芒果甙分布，各产地差异也很大，且大部分产地根中芒果甙含量要比其根茎中含量高，乌兰浩特知母根中的含量是根茎的2.4倍，河南、山西产知母根中的含量为根茎的1.7倍以上，甘肃、哈尔滨产知母根中芒果甙含量虽比其根茎低，但相差不多，提示我们，知母去根的做法在某种程度上是一种浪费。山西、哈尔滨、乌兰浩特产知母叶中芒果甙含量很高，它们虽不入药，但可以考虑将之作为芒果甙的一个天然来源加以利用。
, 百拇医药
参考文献：
[1]郑民实，陆仲毅.芒果甙与异芒果甙的抗单纯疱疹病毒作用.中国药理学报，1989，10(1)：85.
[2]孟强骅，叶天星，杨嗣坤.体外抗体应答系统用于研究中药及化学合成药的免疫调节效用.第二军医大学学报，1983，4(增刊)：75.
[3]洪永福，韩公羽，郭学敏.西陵知母中新芒果甙的分离与结构鉴定.药学学报，1997，32(6)：473.
[4]洪永福，韩公羽.不同采集期知母根茎中芒果甙含量变化的初步研究.中草药，1985，16(4)：31.
[5]王 强，孙有略.知母中芒果甙的含量测定.中国药科大学学报，1991，22(6)：383.
收稿日期：1999-04-07, 百拇医药
单位：陈万生(第二军医大学 药学院，上海 200433)；李力(第二军医大学 药学院，上海 200433)；乔传卓(第二军医大学 药学院，上海 200433)；戴富宝(第二军医大学 药学院，上海 200433)
关键词：知母；芒果甙；新芒果甙；高效液相色谱法；含量测定▲
中国中药杂志000208 摘 要：目的：探讨生长环境对知母品质的影响。方法：高效液相色谱法考察测定不同产地、同一生长期知母不同部位中芒果甙等双苯吡酮类成分。结果：本法测定知母根茎中芒果甙及新芒果甙含量快速、准确、重现性好；芒果甙、新芒果甙含量及两者含量之比在各产地间变异较大。根、叶中芒果甙含量较高。结论：多数产地知母根茎、根、叶中芒果甙含量较高，知母入药可不去根，叶可作为芒果的一个天然来源。
知母为百合科植物知母Anemarrhena asphodeloides Bunge的根茎，具有滋阴降火、润燥、滑肠的功效，含有皂甙、木脂素及黄酮类等多种成分；芒果甙是知母清热作用的有效成分，它还具有祛痰镇咳、强心、利尿、抗忧郁、抗炎、抗病毒等作用[1]，孟强骅还发现芒果甙(0.1 μl)具有免疫抑制作用而不影响细胞活动[2]，洪永福的研究还发现知母中含有另一种新双苯吡酮类化合物新芒果甙[3]。知母虽为单一品种，但分布较广，经验认为各地产之药材品质差异较大，现代生药学研究资料表明，药用植物种内的变异和生长环境因素是影响生药品质的重要因素，中药作用的物质基础是其所含有的化学成分，为探讨生长环境对知母品质的影响，本文选择芒果甙等双苯吡酮类成分，建立高效液相色谱法考察测定了不同产地、同一生长期知母不同部位中该类成分含量的变化。
, http://www.100md.com
1 仪器与试剂
1.1 仪器：高效液相色谱仪 Waters 510；紫外检测器 Waters 490；数据处理机 Waters 740；进样器Hamilton(25 μl)。
1.2 样品：知母根茎、根及叶由作者采集并鉴定，产地及采集时间见表1。芒果甙、新芒果甙标准品由本室洪永福教授提供。
表1 不同产地知母根茎中黄酮类成分含量 产地
采集时间
年-月-日
芒果甙
/%
新芒果甙
, 百拇医药
/%
比值
山东省平度市
1992-05-08
0.60
2.75
1∶5
山西省稷山县
1992-04-22
1.23
1.33
1∶1
天津蓟县
, 百拇医药
1992-05-20
2.31
0.54
4∶1
河南省济源市
1992-04-20
1.75
0.35
5∶1
内蒙古乌兰浩特市
1992-05-18
1.33
, 百拇医药 0.71
2∶1
黑龙江省哈尔滨市
1992-05-24
1.59
0.41
4∶1
甘肃省西峰市
1992-04-28
2.38
0.48
5∶1
山东省知母栽培品
, http://www.100md.com
1995-04-18
0.61
2.80
1∶5
1.3 试剂：冰醋酸(AR)，二氧六环(AR)，甲醇(AR)，重蒸馏水。
2 方法与结果
2.1 色谱条件：色谱柱为Lichrosorb Rp-C1810 μm (4.6 mm×250 mm)，检测波长为320 nm，检测器灵敏度为0.50，流动相为甲醇-5%醋酸液(30∶70)，流速为0.8 ml.min-1，进样量为10.0 μl。
2.2 标准液制备及标准曲线制备：标准品一定量置10 ml容量瓶以甲醇-二氧六环(1∶1)混合液溶解并定容。芒果甙浓度为0.445 mg.ml-1，新芒果甙为0.103 mg.ml-1。
, http://www.100md.com
分别精取芒果甙标准液0.5，1.0，1.5，2.0，2.5 ml置10 ml容量瓶中，以甲醇-二氧六环(1∶1)混合液稀释并定容，各进样10 μl进行定量分析；新芒果甙标准液分别进样2.0，4.0，6.0，8.0，10.0μl进行定量分析，数据处理机给出峰面积值，以标准品进样量(μg)为纵坐标(Y)，峰面积为横坐标(X)，得回归方程：芒果甙Y1=0.0135+2.0648×10-7X1(0.22～1.11 μg),r=0.9998；新芒果甙Y2=0.0086+3.769×10-7X2(0.206～1.032 μg),r=0.9997。
2.3 样品液制备：精取知母根、根茎、叶粉末(过20目筛)0.5 g，置索氏提取器中以甲醇提取5 h，提取液回收甲醇至干，残渣以甲醇-二氧六环(1∶1)混合液溶解，洗涤不溶物，两部分液合并，定容至25.0 ml，取此液1.0 ml，以甲醇-二氧六环(1∶1)混合液稀释至10.0 ml，每个样本制备3份，即为供试液。
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2.4 方法精密度试验：选用哈尔滨产知母根茎样品液进行试验，每次进样10.0 μl，连续进样7次，测定芒果甙峰面积值(A)，分别为1402730，1544727，1412923，1470645，1506384，1492789，1473693，平均值为1472270，RSD=3.4%。
2.5 回收率测定：精密量取哈尔滨产知母(移植于本校药圃6 a)根茎粉末0.1 g，共3份，分别加入芒果甙标准液(0.512 mg.ml-1)2，4，6 ml及新芒果甙标准液(0.175 mg.ml-1)，1，2，3 ml，按样品液制备及测定项下条件操作，重复3次，芒果甙加样回收率为98.7%，RSD=2.2%，新芒果甙加样回收率为100.2%，RSD=2.47%。
2.6 样品测定：以供试液进样10.0 μl，知母根茎、根、叶的色谱图见图1，含量测定结果见表1、表2，百分含量计算公式如下：
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式中：G为由标准曲线求得相当于标准品的量(μg)；W为生药样品量(g)。
图1 知母HPLC图谱
A.根茎(山东平度) B.根茎(乌兰浩特)
C.根(乌兰浩特) D.叶(乌兰浩特) 1.新芒果甙 2.芒果甙
表2 不同产地知母根、叶中芒果甙含量 % 产地
根
叶
河南省济源市
3.03
, http://www.100md.com
0.27
山西省稷山县
2.15
2.09
甘肃省西峰市
1.78
0.48
内蒙古乌兰浩特市
3.16
1.78
黑龙江省哈尔滨市
1.11
3.39
, 百拇医药
3 讨论
知母中芒果甙的分析方法，文献报道的有TLC-洗脱比色法[4]以及TLC薄层扫描法[5]，本文首先建立了HPLC法，在本实验条件下，能将知母根茎中芒果甙、新芒果甙与其它成分很好地分离开，芒果甙、新芒果甙色谱峰保留时间为14.0 min以及7.8 min，峰形对称，不拖尾，该法具有快速、准确、重现性好等优点。相同采收期、不同产地知母根茎中芒果甙含量变异很大，天津、甘肃产知母根茎中含量最高，可达2.31%，2.38%，而山东产知母仅有0.6%，支持了传统上认为河北知母质优的说法，我国知母主产河北、山西、内蒙古，而三地产知母根茎中芒果甙含量相差可达两倍以上，进一步提示我们知母商品流通时须注明产地，以利于合理用药。
产地不同,新芒果甙含量不同,多数产地含量甚微，而山东平度产知母根茎中含量很高，高达2.75%，大大高于其中芒果甙含量，对移栽本校药圃3 a后的山东知母根茎成分的进一步考察表明，栽培后山东知母仍然保留原来高含量新芒果甙、低含量芒果甙特点。表2表明，根、叶中皆有较大的芒果甙分布，各产地差异也很大，且大部分产地根中芒果甙含量要比其根茎中含量高，乌兰浩特知母根中的含量是根茎的2.4倍，河南、山西产知母根中的含量为根茎的1.7倍以上，甘肃、哈尔滨产知母根中芒果甙含量虽比其根茎低，但相差不多，提示我们，知母去根的做法在某种程度上是一种浪费。山西、哈尔滨、乌兰浩特产知母叶中芒果甙含量很高，它们虽不入药，但可以考虑将之作为芒果甙的一个天然来源加以利用。
, 百拇医药
参考文献：
[1]郑民实，陆仲毅.芒果甙与异芒果甙的抗单纯疱疹病毒作用.中国药理学报，1989，10(1)：85.
[2]孟强骅，叶天星，杨嗣坤.体外抗体应答系统用于研究中药及化学合成药的免疫调节效用.第二军医大学学报，1983，4(增刊)：75.
[3]洪永福，韩公羽，郭学敏.西陵知母中新芒果甙的分离与结构鉴定.药学学报，1997，32(6)：473.
[4]洪永福，韩公羽.不同采集期知母根茎中芒果甙含量变化的初步研究.中草药，1985，16(4)：31.
[5]王 强，孙有略.知母中芒果甙的含量测定.中国药科大学学报，1991，22(6)：383.
收稿日期：1999-04-07, 百拇医药