长期骨髓培养、白细胞介素2、干扰素α2a体外净化慢性粒细胞白血病骨髓的研究*
作者：陈伦华 李秀珍 陈济民 敖绪斌 仲照东 高清平 谢燕 陈友华 夏虹
单位：湖北医科大学附属第一医院血液科， 武汉 430060
关键词：长期骨髓培养；白细胞介素2；干扰素α；白血病，髓细胞性；慢性；骨髓净化
同济医科大学学报990212 摘要 用长期骨髓培养(LTBMC)和白细胞介素2(IL-2，1 000 U/ml)，干扰素α2a(IFN-α2a，1 000 U/ml)不同的组合方案，对10例慢性粒细胞白血病(CML)骨髓进行体外净化培养2周。结果发现：①单用LTBMC体系其净化效果差；②加入IL-2后，对CML的CFU-GM以及ph'(+)细胞有明显的杀伤作用(P<0.01, P<0.05)对正常的CFU-GM则无影响；③IFN-α2a在LTBMC体系中抑制ph'(+)细胞生长而不影响CML和正常的CFU-GM；④LTBMC、IL-2、IFN-α2a三者净化CML骨髓具有协同作用。结果提示：LTBMC、IL-2、IFN-α2a联合净化效果好，可用于临床净化CML骨髓。
, 百拇医药
中图法分类号 R733.72
Study on Purging Chronic Myeloid Leukemia Marrow with the Combination of
Long-Term Bone Marrow Culture, Interleuk-2 and Interferon-α2a
Chen Lunhua, Li Xiuzhen, Chen Jimin et al
Department of Hematology, The First Affiliated Hospital of Hubei Medical University, WuHan 430060
Abstract Bone marrow cells from 10 patients with chronic myeloid leukemia (CML) were purged with different combination of long-term bone marrow culture (LTBMC), interleukin-2(IL-2,1 000 U/ml) and interferon-α2a(IFN-α2a，1 000 U/ml) for two weeks in vitro. It was found that: ①The purging effect of single LTBMC was poor; ②Significant killing effects on CFU-GM of CML and ph'(+) cells were found after addition of IL-2 in LTBMC (P<0.01, P<0.05). IL-2 could not affect the CFU-GM of normal control; ③IFN-α2a could inhibit the growth of ph'(+) cells without affecting CFU-GM of CML and normal in LTBMC system. ④ LTBMC, IL-2 and IFN-α2a might exert a synergetically purging effect on ph'(+) CML cells. These results suggest that purging bone marrow with combination of LTBMC, IL-2 and IFN-α2a might have good purging effect, and could be used for purging CML marrow in clinical practice.
, 百拇医药
Key words long-term bone marrow culture; interleukin-2; interferon-α; leukemia, myeloid, chronic; bone marrow purging
自体骨髓移植(auto-BMT)比异基因骨髓移植(allo-BMT)的复发率高，其原因在于自体骨髓缺乏移植物抗白血病效应和自体骨髓中有残存的白血病细胞。体外骨髓净化清除残留的白血病细胞是提高auto-BMT疗效的关键技术之一，许多研究[1，2]发现净化的自体骨髓移植具有较长的无病生存期。为此我们对长期骨髓培养(LTBMC)联合白细胞介素2(IL-2)和干扰素α2a(IFN-α2a)净化慢性粒细胞白血病(CML)骨髓进行了实验研究。
1 材料与方法
1.1 标本来源
, 百拇医药
10例CML患者全部为本院门诊及住院患者，其中男性6例，女性4例，中位年龄33岁(16～65岁)，全部为慢性期，取材前4例先后用白消安或羟基眠治疗，2例初治，另4例用羟基脲和干扰素α2a治疗，其中3例达血液学完全缓解。4例正常人作为对照。
1.2 骨髓细胞分离、净化培养方法
取CML患者骨髓3～5 ml，肝素抗凝(50 U/ml)，加等体积的IMDM培养基稀释后，用等量的淋巴细胞分层液(γ=1.077 g/cm3)于1 800 r/min×20 min分离骨髓单个核细胞，吸取中间层有核细胞，用IMDM培养基洗涤2次后制成单个核细胞(MNC)悬液。长期液体培养体系参照文献[3]略加改动、总体系10 ml，包括IMDM培养基(sigma)、胎牛血清125 ml/L、小牛血清125 ml/L、琥珀酰氢化可的松5×10-7 mol/L、青霉素100 u/ml、饱和湿度、50 ml/L CO2条件培养14 d，每周半量换液。
, 百拇医药
1.3 实验分组
分为4组：①单纯长期骨髓培养(LTBMC)净化体系组；②LTBMC+IL-2组；③LTBMC+IFN-α2a组；④LTBMC+IL-2+ IFN-α2a组。IFN-α2a(罗氏公司馈赠)和IL-2剂量均为1 000 U/ml，半量换液时不追加IFN-α2a及IL-2。
1.4 CFU-GM培养
取净化前骨髓单个核细胞、净化后的非贴壁细胞，接种于含IMDM培养基、胎牛血清200 ml/L、人AB血清100 ml/L、GM-CSF 50 U/ml、琼脂3 g/L的培养体系接种细胞数为1×105/ml，用33 mm平皿(1 ml/皿)在50 ml/L CO2、饱和湿度条件下作半固体培养9 d，计数50个以上有核细胞组成的粒/巨噬细胞集落。
, 百拇医药
1.5 染色体核型制备
参照文献[4]将长期培养开始的MNC和2周后的非贴壁细胞接种于10 ml含200 ml/L小牛血清的RPMI-1640培养基，有核细胞浓度为(0.1～1.0)×106/ml，37 ℃培养24～48 h，终止前2 h加入秋水仙素(终浓度25 μg/L)，收集细胞常规法制片，Giemsa染色，油镜下观察分裂相，在分裂相多时计数20个，少于20个者则全部计数。
1.6 统计学处理
依资料的性质分别进行t检验和Nemenyi秩和检验。
2 结 果
2.1 净化培养和联合培养2周CFU-GM的变化
结果见表1。
, 百拇医药
表1 联合LTBMC、IL-2、IFN-α2a净化培养2周CFU-GM/105 MNC 的变化(
±s) 组别
n
培养前
LTBMC
LTBMC+IFN-α2a
LTBMC+IL-2
LTBMC+IL-2+IFN-α2a
CML
10
, 百拇医药
298.1±87.2
148.6±40.3
132.0±33.1
105.4±21.2▲
94.6±24.3*
Normal
4
257.7±43.2
62.8±15.7
50.8±12.6
59.4±16.3
, 百拇医药
57.4±17.8
与LTBMC组比较 ▲ P<0.01；与LTBMC+IFN-α2a组相比较 ▲ P<0.05；
与LTBMC组、LTBMC+IFN-α2a组比较 * P<0.01
此结果显示CML患者骨髓中CFU-GM较正常人组略高，但无统计学意义；净化培养后，IL-2对CML的CFU-GM杀伤作用明显，而对正常骨髓的CFU-GM无影响；IFN-α2a在该培养体系中对正常人和CML骨髓的CFU-GM均无影响。
2.2 净化培养和联合培养2周，ph'染色体的变化
10例中有2例资料不全，其余8例的结果见表2。
, 百拇医药
表2 联合LTBMC、IL-2、IFN-α2a净化培养2周时，ph'染色体阳性率变化(%) 病 例 号
1
2
3
4
5
6
9
10
(1)净化培养前
85
75
, http://www.100md.com
90
80
100
60
65
100
(2)LTBMC
60
60
78
55
80
30
, 百拇医药 50
80
(3)△ LTBMC+IL-2
45
50
60
35
60
0
46
45
(4)△△ LTBMC+IFN-α2a
, http://www.100md.com
45
40
40
26
56
25
40
50
(5)*△△ LTBMC+IL-2+IFN-α2a
30
24
42
, 百拇医药 0
45
0
40
30
与(1)比较 △P<0.05; △△P<0.01;与(2)比较*P<0.05
此结果显示IL-2和IFN-α2a在LTBMC体系中均有降低ph'染色体阳性分裂相的作用且具有协同效应。
3 讨 论
自70年代建立长期骨髓培养体系以来，国外已成功地将这种技术用于白血病的体外骨髓净化。Udomosakdi等[5]的研究证实长期骨髓培养(LTBMC)体系中培养10 d后，ph'(+)长期培养起始细胞(LTC-IC)可降到原来的1/30，而正常的LTC-IC则保持原有水平。因此有学者[2]利用LTBMC 10 d后的净化骨髓对CML进行自体骨髓移植，可使患者骨髓造血重建，并使部分患者维持ph'(-)造血达2年以上，从而延长患者的生存期。LTBMC净化CML骨髓的详细机制尚不清楚。一般认为[6]ph'(+)干细胞在许多CML患者骨髓中和共存的正常细胞相比处于低水平，而ph'(+)干细胞对基质的粘附能力差，经过长期培养后，ph'(+)细胞被选择性净化。LTBMC虽可选择性地净化CML骨髓中ph'(+)细胞，但在培养过程中，随着时间延长，正常的造血干细胞亦受损较大，至3～4周后，剩下的正常干细胞数量往往不能满足auto-BMT的需要，而且随着培养时间的延长，污染机会会增多，干细胞自我更新能力亦下降[7]。因此联合净化、增强净化效果、缩短净化培养时间是其研究发展方向。
, 百拇医药
我们的结果说明：在单纯的LTBMC体系中净化培养2周后，CML的CFU-GM下降50 %而正常对照的CFU-GM下降75 %；ph'染色体阳性分裂相改变无统计学意义。这可能与我们培养时间较短以及LTBMC主要作用于ph'(+)干细胞有关。当ph'(+)干细胞减少后，共存的正常干细胞生长抑制被解除，进入细胞增殖周期，使CML的CFU-GM下降较正常对照组慢，而ph'(+)细胞数尚可通过中晚期的ph'(+)祖细胞维持。
IL-2是T细胞的自分泌或旁分泌因子，实验表明[8，9]自体骨髓和IL-2共同培养后，可激活产生一系列具有抗肿瘤活性的细胞和细胞因子，如LAK细胞、IFN-γ、TNF等。它们单独或协同作用于白血病细胞以净化骨髓，而且输注体内后可重建骨髓造血，产生移植物抗白血病效应。我们的结果显示：IL-2在LTBMC体系中和CML骨髓MNC培养2周后，其ph'(+)分裂相明显减少(P<0.05)，而且明显杀伤CML的CFU-GM，对正常的CFU-GM则无影响。
, 百拇医药
IFN由于能够使部分CML患者获得细胞遗传学缓解，延长慢性期，在临床上已被作为CML治疗的首选药。许多研究表明IFN-γ在体内外均可抑制ph'(+)细胞，而且被用于骨髓净化后进行auto-BMT，IFN-α在体外净化CML骨髓的报道少见。IFN对ph'(+)细胞的详细作用机制尚不清楚。我们的实验结果表明：在LTBMC体系中培养2周后，IFN-α2a对CML和正常人的CFU-GM均无影响，但明显抑制ph'染色体阳性分裂相(P<0.01)，说明IFN-α2a 亦可净化MCL骨髓。
IL-2和IFN-α2a在LTBMC体系中具有不同的作用特点，可能与它们各自的作用机制不同以及作用时间有关。联合LTBMC、IL-2、IFN-α2a三者净化CML骨髓，CML的CFU-GM、ph'染色体阳性率的改变均明显优于单用LTBMC的净化效果(P<0.01, P<0.05)说明三者联合净化CML骨髓具有协同作用。可用于临床净化CML骨髓，对auto-BMT治疗CML具有重大意义。
, 百拇医药
Eaves等[10]发现CML患者骨髓中可以观察到增殖活跃的造血细胞较正常人多。我们的结果显示：CML骨髓的CFU-GM较正常人的略高但是0.1
*湖北省卫生厅资助项目(WT-97415)
作者简介：陈伦华，男，1968年生，医学硕士
参考文献
1 Simonsson B, Oberg G, Kollander A et al. Intensive treatment in order to minimize the ph-positive clone in chronic myelogenic leukemia (CML). Bone Marrow Transplant, 1994, 14 (suppl 3):S55
, 百拇医药
2 Barnett M J, Eaves C J, phillips G L et al. Autografting with cultured marrow in chronic myeloid leukemia: results of a pilot Study. Blood, 1994, 84:724
3 Gartner S, Kaplan H S. Long-term culture of human bone marrow cells. Proc Natl Acad Sci USA, 1980, 77:4 756
4 李成文，严文伟，韩俊岭等. 慢性粒细胞白血病骨髓体外净化长期液体培养的观察. 中华血液学杂志，1993，14(4)：188
5 Udomosakdi C, Eaves C J, Swolin B et al. Rapid decline of chronic myeloid leukemic cells in long-term culture due to a defect at the leukemic stem cell level. Proc Natl Acd Sci USA, 1992, 89:6 192
, http://www.100md.com
6 Eaves A C, Eaves C J, phillips G L et al. Culture purging in leukemia: past, present and future. Leukemia-Lymphoma, 1993, 11(Suppl 1):259
7 Carter R F, Kruth S A, Valli V E et al. Long term culture of canine marrow cytogenitic evaluation of lymphoma and leukemia. Exp Hematology, 1990, 18:995
8 Charak B S, Choudhary G D, Tefft M et al. Interleukin-2 in bone marrow transplantation: preclinical studies. Bone Marrow Transplant, 1992, 10:103
, 百拇医药
9 Charak B S, Malloy B, Agah R et al. A novel approach to purging of leukemia by activation of bone marrow with interleukin-2. Bone Marrow Transplant, 1990,6:193
10 Eaves A C, Cashman J D, Gaboury L A et al. Unregulated proliferation of primitive chronic myeloid leukemia progenitors in the presence of normal marrow adherent cells. Proc Natl Acad Sci USA, 1986, 83:5 306
收稿日期：1998-10-12, 百拇医药
单位：湖北医科大学附属第一医院血液科， 武汉 430060
关键词：长期骨髓培养；白细胞介素2；干扰素α；白血病，髓细胞性；慢性；骨髓净化
同济医科大学学报990212 摘要 用长期骨髓培养(LTBMC)和白细胞介素2(IL-2，1 000 U/ml)，干扰素α2a(IFN-α2a，1 000 U/ml)不同的组合方案，对10例慢性粒细胞白血病(CML)骨髓进行体外净化培养2周。结果发现：①单用LTBMC体系其净化效果差；②加入IL-2后，对CML的CFU-GM以及ph'(+)细胞有明显的杀伤作用(P<0.01, P<0.05)对正常的CFU-GM则无影响；③IFN-α2a在LTBMC体系中抑制ph'(+)细胞生长而不影响CML和正常的CFU-GM；④LTBMC、IL-2、IFN-α2a三者净化CML骨髓具有协同作用。结果提示：LTBMC、IL-2、IFN-α2a联合净化效果好，可用于临床净化CML骨髓。
, 百拇医药
中图法分类号 R733.72
Study on Purging Chronic Myeloid Leukemia Marrow with the Combination of
Long-Term Bone Marrow Culture, Interleuk-2 and Interferon-α2a
Chen Lunhua, Li Xiuzhen, Chen Jimin et al
Department of Hematology, The First Affiliated Hospital of Hubei Medical University, WuHan 430060
Abstract Bone marrow cells from 10 patients with chronic myeloid leukemia (CML) were purged with different combination of long-term bone marrow culture (LTBMC), interleukin-2(IL-2,1 000 U/ml) and interferon-α2a(IFN-α2a，1 000 U/ml) for two weeks in vitro. It was found that: ①The purging effect of single LTBMC was poor; ②Significant killing effects on CFU-GM of CML and ph'(+) cells were found after addition of IL-2 in LTBMC (P<0.01, P<0.05). IL-2 could not affect the CFU-GM of normal control; ③IFN-α2a could inhibit the growth of ph'(+) cells without affecting CFU-GM of CML and normal in LTBMC system. ④ LTBMC, IL-2 and IFN-α2a might exert a synergetically purging effect on ph'(+) CML cells. These results suggest that purging bone marrow with combination of LTBMC, IL-2 and IFN-α2a might have good purging effect, and could be used for purging CML marrow in clinical practice.
, 百拇医药
Key words long-term bone marrow culture; interleukin-2; interferon-α; leukemia, myeloid, chronic; bone marrow purging
自体骨髓移植(auto-BMT)比异基因骨髓移植(allo-BMT)的复发率高，其原因在于自体骨髓缺乏移植物抗白血病效应和自体骨髓中有残存的白血病细胞。体外骨髓净化清除残留的白血病细胞是提高auto-BMT疗效的关键技术之一，许多研究[1，2]发现净化的自体骨髓移植具有较长的无病生存期。为此我们对长期骨髓培养(LTBMC)联合白细胞介素2(IL-2)和干扰素α2a(IFN-α2a)净化慢性粒细胞白血病(CML)骨髓进行了实验研究。
1 材料与方法
1.1 标本来源
, 百拇医药
10例CML患者全部为本院门诊及住院患者，其中男性6例，女性4例，中位年龄33岁(16～65岁)，全部为慢性期，取材前4例先后用白消安或羟基眠治疗，2例初治，另4例用羟基脲和干扰素α2a治疗，其中3例达血液学完全缓解。4例正常人作为对照。
1.2 骨髓细胞分离、净化培养方法
取CML患者骨髓3～5 ml，肝素抗凝(50 U/ml)，加等体积的IMDM培养基稀释后，用等量的淋巴细胞分层液(γ=1.077 g/cm3)于1 800 r/min×20 min分离骨髓单个核细胞，吸取中间层有核细胞，用IMDM培养基洗涤2次后制成单个核细胞(MNC)悬液。长期液体培养体系参照文献[3]略加改动、总体系10 ml，包括IMDM培养基(sigma)、胎牛血清125 ml/L、小牛血清125 ml/L、琥珀酰氢化可的松5×10-7 mol/L、青霉素100 u/ml、饱和湿度、50 ml/L CO2条件培养14 d，每周半量换液。
, 百拇医药
1.3 实验分组
分为4组：①单纯长期骨髓培养(LTBMC)净化体系组；②LTBMC+IL-2组；③LTBMC+IFN-α2a组；④LTBMC+IL-2+ IFN-α2a组。IFN-α2a(罗氏公司馈赠)和IL-2剂量均为1 000 U/ml，半量换液时不追加IFN-α2a及IL-2。
1.4 CFU-GM培养
取净化前骨髓单个核细胞、净化后的非贴壁细胞，接种于含IMDM培养基、胎牛血清200 ml/L、人AB血清100 ml/L、GM-CSF 50 U/ml、琼脂3 g/L的培养体系接种细胞数为1×105/ml，用33 mm平皿(1 ml/皿)在50 ml/L CO2、饱和湿度条件下作半固体培养9 d，计数50个以上有核细胞组成的粒/巨噬细胞集落。
, 百拇医药
1.5 染色体核型制备
参照文献[4]将长期培养开始的MNC和2周后的非贴壁细胞接种于10 ml含200 ml/L小牛血清的RPMI-1640培养基，有核细胞浓度为(0.1～1.0)×106/ml，37 ℃培养24～48 h，终止前2 h加入秋水仙素(终浓度25 μg/L)，收集细胞常规法制片，Giemsa染色，油镜下观察分裂相，在分裂相多时计数20个，少于20个者则全部计数。
1.6 统计学处理
依资料的性质分别进行t检验和Nemenyi秩和检验。
2 结 果
2.1 净化培养和联合培养2周CFU-GM的变化
结果见表1。
, 百拇医药
表1 联合LTBMC、IL-2、IFN-α2a净化培养2周CFU-GM/105 MNC 的变化(
±s) 组别n
培养前
LTBMC
LTBMC+IFN-α2a
LTBMC+IL-2
LTBMC+IL-2+IFN-α2a
CML
10
, 百拇医药
298.1±87.2
148.6±40.3
132.0±33.1
105.4±21.2▲
94.6±24.3*
Normal
4
257.7±43.2
62.8±15.7
50.8±12.6
59.4±16.3
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57.4±17.8
与LTBMC组比较 ▲ P<0.01；与LTBMC+IFN-α2a组相比较 ▲ P<0.05；
与LTBMC组、LTBMC+IFN-α2a组比较 * P<0.01
此结果显示CML患者骨髓中CFU-GM较正常人组略高，但无统计学意义；净化培养后，IL-2对CML的CFU-GM杀伤作用明显，而对正常骨髓的CFU-GM无影响；IFN-α2a在该培养体系中对正常人和CML骨髓的CFU-GM均无影响。
2.2 净化培养和联合培养2周，ph'染色体的变化
10例中有2例资料不全，其余8例的结果见表2。
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表2 联合LTBMC、IL-2、IFN-α2a净化培养2周时，ph'染色体阳性率变化(%) 病 例 号
1
2
3
4
5
6
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10
(1)净化培养前
85
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, http://www.100md.com
90
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100
60
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(2)LTBMC
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60
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(3)△ LTBMC+IL-2
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(4)△△ LTBMC+IFN-α2a
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(5)*△△ LTBMC+IL-2+IFN-α2a
30
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42
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45
0
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与(1)比较 △P<0.05; △△P<0.01;与(2)比较*P<0.05
此结果显示IL-2和IFN-α2a在LTBMC体系中均有降低ph'染色体阳性分裂相的作用且具有协同效应。
3 讨 论
自70年代建立长期骨髓培养体系以来，国外已成功地将这种技术用于白血病的体外骨髓净化。Udomosakdi等[5]的研究证实长期骨髓培养(LTBMC)体系中培养10 d后，ph'(+)长期培养起始细胞(LTC-IC)可降到原来的1/30，而正常的LTC-IC则保持原有水平。因此有学者[2]利用LTBMC 10 d后的净化骨髓对CML进行自体骨髓移植，可使患者骨髓造血重建，并使部分患者维持ph'(-)造血达2年以上，从而延长患者的生存期。LTBMC净化CML骨髓的详细机制尚不清楚。一般认为[6]ph'(+)干细胞在许多CML患者骨髓中和共存的正常细胞相比处于低水平，而ph'(+)干细胞对基质的粘附能力差，经过长期培养后，ph'(+)细胞被选择性净化。LTBMC虽可选择性地净化CML骨髓中ph'(+)细胞，但在培养过程中，随着时间延长，正常的造血干细胞亦受损较大，至3～4周后，剩下的正常干细胞数量往往不能满足auto-BMT的需要，而且随着培养时间的延长，污染机会会增多，干细胞自我更新能力亦下降[7]。因此联合净化、增强净化效果、缩短净化培养时间是其研究发展方向。
, 百拇医药
我们的结果说明：在单纯的LTBMC体系中净化培养2周后，CML的CFU-GM下降50 %而正常对照的CFU-GM下降75 %；ph'染色体阳性分裂相改变无统计学意义。这可能与我们培养时间较短以及LTBMC主要作用于ph'(+)干细胞有关。当ph'(+)干细胞减少后，共存的正常干细胞生长抑制被解除，进入细胞增殖周期，使CML的CFU-GM下降较正常对照组慢，而ph'(+)细胞数尚可通过中晚期的ph'(+)祖细胞维持。
IL-2是T细胞的自分泌或旁分泌因子，实验表明[8，9]自体骨髓和IL-2共同培养后，可激活产生一系列具有抗肿瘤活性的细胞和细胞因子，如LAK细胞、IFN-γ、TNF等。它们单独或协同作用于白血病细胞以净化骨髓，而且输注体内后可重建骨髓造血，产生移植物抗白血病效应。我们的结果显示：IL-2在LTBMC体系中和CML骨髓MNC培养2周后，其ph'(+)分裂相明显减少(P<0.05)，而且明显杀伤CML的CFU-GM，对正常的CFU-GM则无影响。
, 百拇医药
IFN由于能够使部分CML患者获得细胞遗传学缓解，延长慢性期，在临床上已被作为CML治疗的首选药。许多研究表明IFN-γ在体内外均可抑制ph'(+)细胞，而且被用于骨髓净化后进行auto-BMT，IFN-α在体外净化CML骨髓的报道少见。IFN对ph'(+)细胞的详细作用机制尚不清楚。我们的实验结果表明：在LTBMC体系中培养2周后，IFN-α2a对CML和正常人的CFU-GM均无影响，但明显抑制ph'染色体阳性分裂相(P<0.01)，说明IFN-α2a 亦可净化MCL骨髓。
IL-2和IFN-α2a在LTBMC体系中具有不同的作用特点，可能与它们各自的作用机制不同以及作用时间有关。联合LTBMC、IL-2、IFN-α2a三者净化CML骨髓，CML的CFU-GM、ph'染色体阳性率的改变均明显优于单用LTBMC的净化效果(P<0.01, P<0.05)说明三者联合净化CML骨髓具有协同作用。可用于临床净化CML骨髓，对auto-BMT治疗CML具有重大意义。
, 百拇医药
Eaves等[10]发现CML患者骨髓中可以观察到增殖活跃的造血细胞较正常人多。我们的结果显示：CML骨髓的CFU-GM较正常人的略高但是0.1
*湖北省卫生厅资助项目(WT-97415)
作者简介：陈伦华，男，1968年生，医学硕士
参考文献
1 Simonsson B, Oberg G, Kollander A et al. Intensive treatment in order to minimize the ph-positive clone in chronic myelogenic leukemia (CML). Bone Marrow Transplant, 1994, 14 (suppl 3):S55
, 百拇医药
2 Barnett M J, Eaves C J, phillips G L et al. Autografting with cultured marrow in chronic myeloid leukemia: results of a pilot Study. Blood, 1994, 84:724
3 Gartner S, Kaplan H S. Long-term culture of human bone marrow cells. Proc Natl Acad Sci USA, 1980, 77:4 756
4 李成文，严文伟，韩俊岭等. 慢性粒细胞白血病骨髓体外净化长期液体培养的观察. 中华血液学杂志，1993，14(4)：188
5 Udomosakdi C, Eaves C J, Swolin B et al. Rapid decline of chronic myeloid leukemic cells in long-term culture due to a defect at the leukemic stem cell level. Proc Natl Acd Sci USA, 1992, 89:6 192
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收稿日期：1998-10-12, 百拇医药