Beagle狗肌注蒿甲醚眼底毒性研究
作者：石笑春 乌增炎
单位：石笑春 乌增炎(中国人民解放军军事医学科学院毒物药物研究所 北京 100850)
关键词：蒿甲醚；眼底镜检查；视盘；脉络膜色素毯
解放军药学学报990414 摘 要 目的：观察长期肌注不同剂量蒿甲醚对Beagle狗的眼底毒性。方法：采用Krawitz眼底镜直接观察法。结果：用Beagle狗蒿甲醚6、19mg.kg-1，qd,im，连续15d，对眼底视盘、脉络膜色素毯及血管等均无明显影响。蒿甲醚32mg.kg-1组，第7d给药后出现3/4动物死亡。对濒死动物进行眼底检查，仍未发现明显的毒性影响。其中，活存的一只动物于15d给药后及停药后28d眼底检查，眼底视盘、色素毯及眼底血管与给药前相似，均无异常发现，也未见眼底血管出血及渗出物。结论：与青蒿素及青蒿琥酯相比较，蒿甲醚是一种对眼和视觉系统安全性较高的青蒿素类衍生物。
, 百拇医药
中图分类号 R965.3
FUNDUS TOXICITY STUDY ON ARTEMETHER IN BEAGLE DOGS
Shi Xiaochun，Wu Zengyan
(Institute of Pharmacology and Toxicology, Academy of Military Medical Sciences, Beijing 100850)
Abstract AIM To study the fundus toxicity induced by Artemether, one of the derivatives of Qinghaosu,in Beagle dogs.METHODS The direct method of ophthalmoscopic examination was performed at the end of medication and the time of moribund.RESULTS No obvious finding in disc、colorful tapetal and retinal bood vessels were observed after Artemether 6 and 19 mg.kg-1 im.once daily for 15 consecutive days in treated animals. No obvious toxic effect on fundus was found in moribund animals treated with dose of 32 mg.kg-1.CONCLUSION Compare with Qinghaosu and Artesunate, Artemether is a lower toxic derivative of Qinghaosu in eye and vision system in dogs.
, 百拇医药
Key words Artemether; Ophthalmoscopic examination; disc; colorful tapetal; retinal blood vessel
蒿甲醚是含过氧基团的倍半萜内酯类全新结构抗疟药-青蒿素的衍生物，具有高效、快速杀灭疟原虫且与氯喹无交叉耐药性等特点。但纵观新药研究的历史，药物对视觉系统的毒性尚不容忽视。就抗疟药而言，已知的经典抗疟药氯喹、奎宁、阿的平等均能引起程度不同的眼毒[1]，青蒿素及其衍生物-青蒿琥酯在高剂量时，也能引起视网膜、脉络膜损伤[2、3]。为探讨蒿甲醚对视觉系统的安全性，我们建立了对清醒状态狗进行眼底检查的方法，并对长期肌注给药的Beagle狗进行了眼底观察，结合病理组织学检查结果，对该药的视觉系统安全性作出评估，为临床使用提供了安全性资料。
1 材料和方法
1.1 动物 Beagle狗，年龄8～13个月，体重9.5～13.5kg，(世界卫生组织赠送健康纯种狗，由军事医学科学院实验动物中心繁殖提供, 合格证号：医动字第8910D01)。
, 百拇医药
1.2 药物 20%蒿甲醚花生油注射液(昆明制药厂，批号 780114-1)；无菌花生油(昆明制药厂，批号 861005)。临用前，蒿甲醚花生油注射液置于70℃水浴溶解，用花生油稀释成所需浓度。
1.3 仪器 医用手持检眼镜(苏州医疗仪器厂)。
1.4 给药方案 设蒿甲醚6、19、32mg.kg-1剂量组(分别相当于临床剂量的2、6和10倍)、花生油溶剂对照组及空白对照组各一组,每组4只动物，♀♂各半。
上述各组动物, 除空白对照组外, 均以0.16ml.kg-1qd,im，连续15d。每只动物均于给药前、给药结束时或中毒濒死状态时进行眼底镜检查。存活动物于给药结束时活杀，每组♀♂各留1只，于停药后28d进行眼底镜检查，观察病变的发展或恢复情况。
, 百拇医药
1.5 眼底镜检查方法 将动物置于安静的暗室内，清醒状态下自然站立于狗台上。一位与动物亲近的实验者用左手轻轻托住动物下颌，右手扶住动物头顶。动物在暗室内瞳孔自然放大，检查者便可采用 Krawitz 眼底镜直接法[4]进行眼底检查。一般先检查右眼。检查者右手持镜站在狗的右前方30-45cm处,将棱镜设置到“0”，打开眼底镜光源后，将检眼镜放置于检查者的右眼前，光束直接对向受检狗眼附近。右眼视线随着光束直接进入瞳孔，找到眼底色毯。检查者一边注视色毯一边向受检狗眼接近，当检眼镜离狗眼近达2.5～4cm时，则可见到视盘。视盘是眼底最明显的特征，呈粉红色，圆形或卵圆形不等。视网膜动脉从视盘处发出3支主杆，呈倒“Y”形，伴有分枝。动静脉相伴而引，静脉颜色比动脉稍暗。
检查时所见到的眼底色素毯为脉络膜色素毯。色素毯以视盘为界可分两部分：视盘上方为透明毯，一般为绿色；视盘下方为暗毯，一般为黄棕色，但具体颜色根据动物品系及皮色的不同而有差别。在检查过程中，应随时调节转盘，增减棱镜镜片，以便使视盘及脉络膜血管清晰可见。
, 百拇医药
检查左眼时，检查者以左手持镜站在狗的左侧，用左眼检查之，方法步骤如同前述。给药后发现眼底异常，随时进行眼底照相。
2 结 果
空白对照组4只动物双眼眼底在给药前、给药后15d，2只狗于停药后28d用眼底镜直接法检查，见眼底视盘呈粉红色，形态呈圆形或卵圆形，未见异常。视网膜动脉从视盘处发出3支主杆，呈倒“Y”形，血管周围未见出血和渗出物。所有受检狗眼底脉络膜色素毯清晰可见，透明毯及暗毯除颜色因随动物毛色深浅有差别外，其余均未见异常。
蒿甲醚6、19mg.kg-1及溶剂对照组动物, 在给药前、第15d给药后及停药后28d进行眼底检查，眼底视盘、脉络膜色素毯及血管均未发现异常，也未见眼底出血和渗出物。蒿甲醚32mg.kg-1组第7d给药后，3只动物处于濒死状态，眼底检查除静脉血柱较正常时充盈外，余未见异常，也未见出血及渗出物，视盘及眼底脉络膜色素均未见明显异常。该组活存1只动物，第15d给药后及停药后28d眼底检查，均未发现异常，视盘、血管及脉络膜色素毯等均与给药前相似，也未见眼底出血及渗出物。
, 百拇医药
3 讨 论
蒿甲醚32mg.kg-1为临床用量的10倍，对Beagle狗是致死剂量。在动物濒死状态下，除眼底静脉血柱较正常时充盈外，未发现对眼底视盘、脉络膜色素和血管的明显异常，也未见眼底出血及渗出物。可以认为，该高剂量组3只动物眼底静脉血柱轻度扩张，可能与濒死状态下静脉淤血有关。高剂量组1只存活动物，于15d给药后及停药后28d眼底检查，均无异常发现。该剂量组4只动物(包括濒死3只动物)的病理组织学检查，也未发现眼组织及视神经的异常改变[5]，表明该药在致死剂量下，对Beagle狗眼和视觉系统均无损伤。以往对青蒿素类药物的研究，尚无眼底检查结果。病理检查表明，猴肌注青蒿素96mg.kg-1(相当于临床剂量的8倍)，连续14d，个别动物出现视网膜、脉络膜充血。狗静注青蒿琥酯45mg.kg-1(相当于临床剂量19倍)，连续14d，出现眼球脉络膜血管扩张、淤血；90mg.kg-1致死剂量组出现视网膜剥离，剥离处有渗出物填充。
, 百拇医药
本研究结果表明，蒿甲醚在致死剂量下，对Beagle狗仍未造成眼底和视神经损害，与青蒿素本身及其另一衍生物青蒿琥酯相比较，蒿甲醚是一种对眼和视觉系统安全性较高的青蒿素类衍生物。
本研究将动物置于有亲近人员在场的暗室内，平和、黑暗的环境使动物产生安全感，变得安静、训服，瞳孔自然放大，用普通医用检眼镜便可直接进行眼底检查。与以往全麻状态下眼底检查的方法相比，更为简便易行。在新药安全性评价中，应用该方法对长期毒性试验狗进行眼毒性研究，值得推广。
作者单位：石笑春，女，副研究员
参考文献
1 石笑春，秦伯益. 在新药评价中应重视药物对视觉系统的影响.国外医学参考资料眼科学分册
，1980；(2):8
, 百拇医药
2 宁殿玺，徐在海，滕翕和等.青蒿酯钠静脉注射对犬的亚急性毒性.中国药理学与毒理学杂志
，1987；1(2):135
3 王德文，关明臣，刘雪桐.恒河猴肌注青蒿素亚急性毒性病理学研究.解放军医学杂志，1983；8:257
4 Krawitz, L. Clinical Examination of the canine and Feline Eye.J Am Vet Med Assoc
,1965;147(1):23
5 邬伯安,徐在海,石笑春等.蒿甲醚对Beagle狗的长期毒性.中国临床药理学杂志，1987；3(3):
156
(1999-06-23收稿 1999-08-02修回), 百拇医药
单位：石笑春 乌增炎(中国人民解放军军事医学科学院毒物药物研究所 北京 100850)
关键词：蒿甲醚；眼底镜检查；视盘；脉络膜色素毯
解放军药学学报990414 摘 要 目的：观察长期肌注不同剂量蒿甲醚对Beagle狗的眼底毒性。方法：采用Krawitz眼底镜直接观察法。结果：用Beagle狗蒿甲醚6、19mg.kg-1，qd,im，连续15d，对眼底视盘、脉络膜色素毯及血管等均无明显影响。蒿甲醚32mg.kg-1组，第7d给药后出现3/4动物死亡。对濒死动物进行眼底检查，仍未发现明显的毒性影响。其中，活存的一只动物于15d给药后及停药后28d眼底检查，眼底视盘、色素毯及眼底血管与给药前相似，均无异常发现，也未见眼底血管出血及渗出物。结论：与青蒿素及青蒿琥酯相比较，蒿甲醚是一种对眼和视觉系统安全性较高的青蒿素类衍生物。
, 百拇医药
中图分类号 R965.3
FUNDUS TOXICITY STUDY ON ARTEMETHER IN BEAGLE DOGS
Shi Xiaochun，Wu Zengyan
(Institute of Pharmacology and Toxicology, Academy of Military Medical Sciences, Beijing 100850)
Abstract AIM To study the fundus toxicity induced by Artemether, one of the derivatives of Qinghaosu,in Beagle dogs.METHODS The direct method of ophthalmoscopic examination was performed at the end of medication and the time of moribund.RESULTS No obvious finding in disc、colorful tapetal and retinal bood vessels were observed after Artemether 6 and 19 mg.kg-1 im.once daily for 15 consecutive days in treated animals. No obvious toxic effect on fundus was found in moribund animals treated with dose of 32 mg.kg-1.CONCLUSION Compare with Qinghaosu and Artesunate, Artemether is a lower toxic derivative of Qinghaosu in eye and vision system in dogs.
, 百拇医药
Key words Artemether; Ophthalmoscopic examination; disc; colorful tapetal; retinal blood vessel
蒿甲醚是含过氧基团的倍半萜内酯类全新结构抗疟药-青蒿素的衍生物，具有高效、快速杀灭疟原虫且与氯喹无交叉耐药性等特点。但纵观新药研究的历史，药物对视觉系统的毒性尚不容忽视。就抗疟药而言，已知的经典抗疟药氯喹、奎宁、阿的平等均能引起程度不同的眼毒[1]，青蒿素及其衍生物-青蒿琥酯在高剂量时，也能引起视网膜、脉络膜损伤[2、3]。为探讨蒿甲醚对视觉系统的安全性，我们建立了对清醒状态狗进行眼底检查的方法，并对长期肌注给药的Beagle狗进行了眼底观察，结合病理组织学检查结果，对该药的视觉系统安全性作出评估，为临床使用提供了安全性资料。
1 材料和方法
1.1 动物 Beagle狗，年龄8～13个月，体重9.5～13.5kg，(世界卫生组织赠送健康纯种狗，由军事医学科学院实验动物中心繁殖提供, 合格证号：医动字第8910D01)。
, 百拇医药
1.2 药物 20%蒿甲醚花生油注射液(昆明制药厂，批号 780114-1)；无菌花生油(昆明制药厂，批号 861005)。临用前，蒿甲醚花生油注射液置于70℃水浴溶解，用花生油稀释成所需浓度。
1.3 仪器 医用手持检眼镜(苏州医疗仪器厂)。
1.4 给药方案 设蒿甲醚6、19、32mg.kg-1剂量组(分别相当于临床剂量的2、6和10倍)、花生油溶剂对照组及空白对照组各一组,每组4只动物，♀♂各半。
上述各组动物, 除空白对照组外, 均以0.16ml.kg-1qd,im，连续15d。每只动物均于给药前、给药结束时或中毒濒死状态时进行眼底镜检查。存活动物于给药结束时活杀，每组♀♂各留1只，于停药后28d进行眼底镜检查，观察病变的发展或恢复情况。
, 百拇医药
1.5 眼底镜检查方法 将动物置于安静的暗室内，清醒状态下自然站立于狗台上。一位与动物亲近的实验者用左手轻轻托住动物下颌，右手扶住动物头顶。动物在暗室内瞳孔自然放大，检查者便可采用 Krawitz 眼底镜直接法[4]进行眼底检查。一般先检查右眼。检查者右手持镜站在狗的右前方30-45cm处,将棱镜设置到“0”，打开眼底镜光源后，将检眼镜放置于检查者的右眼前，光束直接对向受检狗眼附近。右眼视线随着光束直接进入瞳孔，找到眼底色毯。检查者一边注视色毯一边向受检狗眼接近，当检眼镜离狗眼近达2.5～4cm时，则可见到视盘。视盘是眼底最明显的特征，呈粉红色，圆形或卵圆形不等。视网膜动脉从视盘处发出3支主杆，呈倒“Y”形，伴有分枝。动静脉相伴而引，静脉颜色比动脉稍暗。
检查时所见到的眼底色素毯为脉络膜色素毯。色素毯以视盘为界可分两部分：视盘上方为透明毯，一般为绿色；视盘下方为暗毯，一般为黄棕色，但具体颜色根据动物品系及皮色的不同而有差别。在检查过程中，应随时调节转盘，增减棱镜镜片，以便使视盘及脉络膜血管清晰可见。
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检查左眼时，检查者以左手持镜站在狗的左侧，用左眼检查之，方法步骤如同前述。给药后发现眼底异常，随时进行眼底照相。
2 结 果
空白对照组4只动物双眼眼底在给药前、给药后15d，2只狗于停药后28d用眼底镜直接法检查，见眼底视盘呈粉红色，形态呈圆形或卵圆形，未见异常。视网膜动脉从视盘处发出3支主杆，呈倒“Y”形，血管周围未见出血和渗出物。所有受检狗眼底脉络膜色素毯清晰可见，透明毯及暗毯除颜色因随动物毛色深浅有差别外，其余均未见异常。
蒿甲醚6、19mg.kg-1及溶剂对照组动物, 在给药前、第15d给药后及停药后28d进行眼底检查，眼底视盘、脉络膜色素毯及血管均未发现异常，也未见眼底出血和渗出物。蒿甲醚32mg.kg-1组第7d给药后，3只动物处于濒死状态，眼底检查除静脉血柱较正常时充盈外，余未见异常，也未见出血及渗出物，视盘及眼底脉络膜色素均未见明显异常。该组活存1只动物，第15d给药后及停药后28d眼底检查，均未发现异常，视盘、血管及脉络膜色素毯等均与给药前相似，也未见眼底出血及渗出物。
, 百拇医药
3 讨 论
蒿甲醚32mg.kg-1为临床用量的10倍，对Beagle狗是致死剂量。在动物濒死状态下，除眼底静脉血柱较正常时充盈外，未发现对眼底视盘、脉络膜色素和血管的明显异常，也未见眼底出血及渗出物。可以认为，该高剂量组3只动物眼底静脉血柱轻度扩张，可能与濒死状态下静脉淤血有关。高剂量组1只存活动物，于15d给药后及停药后28d眼底检查，均无异常发现。该剂量组4只动物(包括濒死3只动物)的病理组织学检查，也未发现眼组织及视神经的异常改变[5]，表明该药在致死剂量下，对Beagle狗眼和视觉系统均无损伤。以往对青蒿素类药物的研究，尚无眼底检查结果。病理检查表明，猴肌注青蒿素96mg.kg-1(相当于临床剂量的8倍)，连续14d，个别动物出现视网膜、脉络膜充血。狗静注青蒿琥酯45mg.kg-1(相当于临床剂量19倍)，连续14d，出现眼球脉络膜血管扩张、淤血；90mg.kg-1致死剂量组出现视网膜剥离，剥离处有渗出物填充。
, 百拇医药
本研究结果表明，蒿甲醚在致死剂量下，对Beagle狗仍未造成眼底和视神经损害，与青蒿素本身及其另一衍生物青蒿琥酯相比较，蒿甲醚是一种对眼和视觉系统安全性较高的青蒿素类衍生物。
本研究将动物置于有亲近人员在场的暗室内，平和、黑暗的环境使动物产生安全感，变得安静、训服，瞳孔自然放大，用普通医用检眼镜便可直接进行眼底检查。与以往全麻状态下眼底检查的方法相比，更为简便易行。在新药安全性评价中，应用该方法对长期毒性试验狗进行眼毒性研究，值得推广。
作者单位：石笑春，女，副研究员
参考文献
1 石笑春，秦伯益. 在新药评价中应重视药物对视觉系统的影响.国外医学参考资料眼科学分册
，1980；(2):8
, 百拇医药
2 宁殿玺，徐在海，滕翕和等.青蒿酯钠静脉注射对犬的亚急性毒性.中国药理学与毒理学杂志
，1987；1(2):135
3 王德文，关明臣，刘雪桐.恒河猴肌注青蒿素亚急性毒性病理学研究.解放军医学杂志，1983；8:257
4 Krawitz, L. Clinical Examination of the canine and Feline Eye.J Am Vet Med Assoc
,1965;147(1):23
5 邬伯安,徐在海,石笑春等.蒿甲醚对Beagle狗的长期毒性.中国临床药理学杂志，1987；3(3):
156
(1999-06-23收稿 1999-08-02修回), 百拇医药