白细胞介素-Ⅱ和LAK细胞对放疗后鼻咽癌患者细胞免疫功能的影响
作者：曾春林 孙安涛 杜娟
单位：曾春林(湖南省肿瘤医院 长沙 410006)；孙安涛(湖南省肿瘤医院 长沙 410006)；杜娟(湖南省肿瘤医院 长沙 410006)
关键词：鼻咽肿瘤/放射疗法；免疫，细胞/分析；白细胞介素2/治疗；杀伤细胞，淋巴因子激活/治疗
湖南医学000204【摘 要】目的探讨白细胞介素-Ⅱ(IL-2)和LAK细胞对鼻咽癌(NPC)放疗后患者细胞免疫功能的影响。方法27例放疗后获CR的患者分成2组：A组(治疗组)，17例接受IL-2和LAK细胞治疗；B组(对照组)，10例仅予一般治疗。检测两组治疗前后NK活性和CD+4/CD+8值的变化。 结果A组治疗后NK活性和CD+4/CD+8比值均明显提高(P<0.05)，B组则无明显变化。结论IL-2和LAK细胞治疗可增加NPC放疗后患者的NK活性，对T细胞亚群有调节作用。
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【中图分类号】 R739.63，R730.51 【文献标识码】 A 【文章编号】 1001-9421(2000)02-0088-02
Effects of IL-2/LAK Cells on Cellular Immuno-function in Patients
with Nasopharyngeal Carcinoma After Radiotherapy
ZENG Chunlin SUN Antao DU Juan
(Department of Radiation Oncology,Hunan Tumor Hospital,Changsha,410006,China)
【Abstract】ObjectiveTo evaluate the effects of IL-2/LAK cells on the cellular immuno-function in patients with nasopharyngeal carcinoma(NPC) after radiotherapy.MethodsTwenty-seven patients in complete remission(CR) after radiotherapy were divided into two groups:seventeen patients of Group A were treated with IL-2/LAK cells;while ten patients of Group B(control) with general measures.The blood natural Killer (NK) activity and CD+4/CD+8 ratio changes in two groups were detected before and after treatment.ResultsAfter treatment,the NK activity and CD+4/CD+8 ratio increased sngnificantly in Group A and were much higher than those of in Group B (P<0.05),whereas no distinct difference was found Group B.ConclusionThis treatment can increase NK activity and regulate T cell subsets in NPC patients after radiotherapy.
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【Key words】 nasopharyngeal neoplasms/radiotherapy; immunity,cellular/analysis; interleukin-2/therapy; killer cells,lymphokine-activated/therapy
鼻咽癌(NPC)是我国常见的癌瘤之一，放射治疗为其主要治疗手段。长期以来，其5年生存率在50%左右，其原因与原发灶复发和远处转移有关[1]。这种结果与患者细胞免疫功能的关系，少有研究。白细胞介素-Ⅱ(IL-2)加淋巴细胞激活的杀伤细胞(LAK)可调节机体免疫应答[2，3]，但其是否能提高NPC放疗后细胞免疫功能，却少见文献报道。本院1998年6月至1999年9月对病理确诊为NPC且放疗后达完全缓解(CR)的患者27例，采用IL-2和LAK治疗，其结果报道如下。
1 材料和方法
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1.1 一般资料 本组27例，随机分为两组。A组17例，男10例、女7例、中位年龄41.5(24～62)岁；B组10例，男6例、女4例，中位年龄39(33～68)岁。临床Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ期，A组分别为2，11和4例；B组分别为1，7和2例。两组病例治疗前都接受NPC根治性放疗，剂量为6～7周总量60～70 GY。
1.2 LAK细胞的制备 血站购进白细胞悬液，经淋巴细胞分离液(上海产)分离后的淋巴细胞，用含10%的AB血清和IL-2 1!000 u/ml(北京四环制药厂和上海华新公司产品)的RPMl-1640培养基调细胞浓度至2×106/ml，置37 ℃，5% CO2潮湿环境下培养7 d，洗涤、去上清后，用含IL-2的生理盐水100 ml配制成LAK细胞悬液，每瓶含LAK细胞5×109，细胞活性≥95%，IL-2 40万u。
1.3 治疗方法 治疗组LAK细胞输注前、后4 d，每天静脉滴注IL-2 40万u，第5天开始每天输注LAK细胞悬液1瓶，连续10 d。治疗前后抽血测细胞免疫功能、对照组同时抽血。
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1.4 测定方法 ①自然杀伤细胞(NK)活性测定采用LDH释放法[4]。②T淋巴细胞亚群测定按北京中山生物试剂公司的试剂盒和说明书方法测CD+3，CD+4和CD+8亚群。
2 结果
2.1 LAK细胞治疗前、后NK活性测定 2组患者治疗前NK活性无差别，治疗后A组NK活性明显提高(P<0.01)，B组则无明显变化(P>0.05)，见表1。
表1 A，B两组治疗前、后NK活性变化(
±s) 组别
n
疗前
, 百拇医药
疗后
A组
17
29.60±15.75
39.12±15.38
B组
10
24.30±10.8
25.86±12.58
2.2 T细胞亚群测定 表2显示，A组治疗后CD+3，CD+4稍为升高，CD+8比例则降低，但无统计学意义(P>0.05)。CD+4/CD+8比率由治疗前(1.30±0.15)上升到治疗后的(1.46±0.19)，且有统计学意义(P<0.05)。而B组T细胞亚群治疗前、后的变化均无统计学意义。表2 A，B两组治疗前、后T细胞亚群的变化 组别
, http://www.100md.com
n
时间
CD+3
CD+4
CD+8
CD+4/CD+8
A
17
疗前
57.43±6.95
, http://www.100md.com
40.76±4.59
30.11±3.57
1.30±0.15
疗后
59.29±7.20
41.50±4.59
29.33±4.29
1.46±0.19
B
10
疗前
56.6±7.10
, 百拇医药
34.2±4.43
35.1±3.41
0.95±0.1
疗后
58.01±15.05
36.6±5.30
38.7±2.45
0.97±0.13
3 讨论
肿瘤及放疗均损伤机体的细胞免疫功能。对NPC患者放疗后采取积极治疗措施，能迅速提高其受损细胞免疫功能，对减少复发和转移有重大的临床意义。
IL-2和LAK细胞能在杀灭残留肿瘤细胞的同时，对机体具有免疫调节作用。它可促使T，B细胞分化成熟，亦能诱导干扰素、肿瘤坏死因子[5]。本文治疗组治疗后的CD+3，CD+4无明显变化，但CD+8比率下降，以及CD+4/CD+8比值明显升高，支持IL-2和LAK细胞具有调节NPC患者免疫功能的观点。NK细胞也是构成机体抗肿瘤免疫功能的重要因素，Thompson[6]报告IL-2治疗后的患者NK细胞活性显著增加。本试验使用IL-2和LAK细胞治疗后，患者的NK活性较前显著提高，而未经治疗的对照组则无明显变化，提示该疗法对放疗后的NPC患者的NK活性亦有正向调节作用。
, 百拇医药
本文的结果证明，IL-2和LAK细胞的治疗，能够提高患者的NK细胞活性，调节T细胞亚群之间的失衡，这些免疫指标的变化与降低肿瘤复发、减少转移有无直接关系，因本研究观察时间短，目前尚难定论，有待进一步研究。
【作者简介】 曾春林(1954～)，男，湖南桃源人，1991～1992赴日本留学，主要从事放射肿瘤学和放射病理学研究。
【参 考 文 献】
[1] 谢良喜，陈志坚，李德锐.早期鼻咽癌66例放射治疗结果和预后因素分析[J].中华放射肿瘤学杂志，1999，8(3)：176
[2] Herberman RB.Interleukin-2 therapy of human cancer:potential benefits versus toxicity[J].J Clin Onkol,1989,7:1
, 百拇医药
[3] Sosman JA,Hank JA,Sondel PM,et al.In vivo activation of lymphokine activated killer activity with interleukin-2:prospects for combinations therapies[J].Semin Oncol,1989,17:22
[4] 陈丙莺.简易自然杀伤试验—LDH释放改良法[J].上海免疫学杂志，1989，9(4)：218
[5] Chong A,Scuder P.Tumour targets stimulate IL-2 activated killer cells to produce Interferon-γ and tumor necrosis factor[J].J Immunol,1989,142:2123
[6] Thompson JA.Influence of dose and duration of infusion of IL-2 on toxicity and immunomodulation[J].J Clin Oncol,1988,6:669
【收稿日期】 2000-01-05, http://www.100md.com
单位：曾春林(湖南省肿瘤医院 长沙 410006)；孙安涛(湖南省肿瘤医院 长沙 410006)；杜娟(湖南省肿瘤医院 长沙 410006)
关键词：鼻咽肿瘤/放射疗法；免疫，细胞/分析；白细胞介素2/治疗；杀伤细胞，淋巴因子激活/治疗
湖南医学000204【摘 要】目的探讨白细胞介素-Ⅱ(IL-2)和LAK细胞对鼻咽癌(NPC)放疗后患者细胞免疫功能的影响。方法27例放疗后获CR的患者分成2组：A组(治疗组)，17例接受IL-2和LAK细胞治疗；B组(对照组)，10例仅予一般治疗。检测两组治疗前后NK活性和CD+4/CD+8值的变化。 结果A组治疗后NK活性和CD+4/CD+8比值均明显提高(P<0.05)，B组则无明显变化。结论IL-2和LAK细胞治疗可增加NPC放疗后患者的NK活性，对T细胞亚群有调节作用。
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【中图分类号】 R739.63，R730.51 【文献标识码】 A 【文章编号】 1001-9421(2000)02-0088-02
Effects of IL-2/LAK Cells on Cellular Immuno-function in Patients
with Nasopharyngeal Carcinoma After Radiotherapy
ZENG Chunlin SUN Antao DU Juan
(Department of Radiation Oncology,Hunan Tumor Hospital,Changsha,410006,China)
【Abstract】ObjectiveTo evaluate the effects of IL-2/LAK cells on the cellular immuno-function in patients with nasopharyngeal carcinoma(NPC) after radiotherapy.MethodsTwenty-seven patients in complete remission(CR) after radiotherapy were divided into two groups:seventeen patients of Group A were treated with IL-2/LAK cells;while ten patients of Group B(control) with general measures.The blood natural Killer (NK) activity and CD+4/CD+8 ratio changes in two groups were detected before and after treatment.ResultsAfter treatment,the NK activity and CD+4/CD+8 ratio increased sngnificantly in Group A and were much higher than those of in Group B (P<0.05),whereas no distinct difference was found Group B.ConclusionThis treatment can increase NK activity and regulate T cell subsets in NPC patients after radiotherapy.
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【Key words】 nasopharyngeal neoplasms/radiotherapy; immunity,cellular/analysis; interleukin-2/therapy; killer cells,lymphokine-activated/therapy
鼻咽癌(NPC)是我国常见的癌瘤之一，放射治疗为其主要治疗手段。长期以来，其5年生存率在50%左右，其原因与原发灶复发和远处转移有关[1]。这种结果与患者细胞免疫功能的关系，少有研究。白细胞介素-Ⅱ(IL-2)加淋巴细胞激活的杀伤细胞(LAK)可调节机体免疫应答[2，3]，但其是否能提高NPC放疗后细胞免疫功能，却少见文献报道。本院1998年6月至1999年9月对病理确诊为NPC且放疗后达完全缓解(CR)的患者27例，采用IL-2和LAK治疗，其结果报道如下。
1 材料和方法
, http://www.100md.com
1.1 一般资料 本组27例，随机分为两组。A组17例，男10例、女7例、中位年龄41.5(24～62)岁；B组10例，男6例、女4例，中位年龄39(33～68)岁。临床Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ期，A组分别为2，11和4例；B组分别为1，7和2例。两组病例治疗前都接受NPC根治性放疗，剂量为6～7周总量60～70 GY。
1.2 LAK细胞的制备 血站购进白细胞悬液，经淋巴细胞分离液(上海产)分离后的淋巴细胞，用含10%的AB血清和IL-2 1!000 u/ml(北京四环制药厂和上海华新公司产品)的RPMl-1640培养基调细胞浓度至2×106/ml，置37 ℃，5% CO2潮湿环境下培养7 d，洗涤、去上清后，用含IL-2的生理盐水100 ml配制成LAK细胞悬液，每瓶含LAK细胞5×109，细胞活性≥95%，IL-2 40万u。
1.3 治疗方法 治疗组LAK细胞输注前、后4 d，每天静脉滴注IL-2 40万u，第5天开始每天输注LAK细胞悬液1瓶，连续10 d。治疗前后抽血测细胞免疫功能、对照组同时抽血。
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1.4 测定方法 ①自然杀伤细胞(NK)活性测定采用LDH释放法[4]。②T淋巴细胞亚群测定按北京中山生物试剂公司的试剂盒和说明书方法测CD+3，CD+4和CD+8亚群。
2 结果
2.1 LAK细胞治疗前、后NK活性测定 2组患者治疗前NK活性无差别，治疗后A组NK活性明显提高(P<0.01)，B组则无明显变化(P>0.05)，见表1。
表1 A，B两组治疗前、后NK活性变化(
±s) 组别n
疗前
, 百拇医药
疗后
A组
17
29.60±15.75
39.12±15.38
B组
10
24.30±10.8
25.86±12.58
2.2 T细胞亚群测定 表2显示，A组治疗后CD+3，CD+4稍为升高，CD+8比例则降低，但无统计学意义(P>0.05)。CD+4/CD+8比率由治疗前(1.30±0.15)上升到治疗后的(1.46±0.19)，且有统计学意义(P<0.05)。而B组T细胞亚群治疗前、后的变化均无统计学意义。表2 A，B两组治疗前、后T细胞亚群的变化 组别
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n
时间
CD+3
CD+4
CD+8
CD+4/CD+8
A
17
疗前
57.43±6.95
, http://www.100md.com
40.76±4.59
30.11±3.57
1.30±0.15
疗后
59.29±7.20
41.50±4.59
29.33±4.29
1.46±0.19
B
10
疗前
56.6±7.10
, 百拇医药
34.2±4.43
35.1±3.41
0.95±0.1
疗后
58.01±15.05
36.6±5.30
38.7±2.45
0.97±0.13
3 讨论
肿瘤及放疗均损伤机体的细胞免疫功能。对NPC患者放疗后采取积极治疗措施，能迅速提高其受损细胞免疫功能，对减少复发和转移有重大的临床意义。
IL-2和LAK细胞能在杀灭残留肿瘤细胞的同时，对机体具有免疫调节作用。它可促使T，B细胞分化成熟，亦能诱导干扰素、肿瘤坏死因子[5]。本文治疗组治疗后的CD+3，CD+4无明显变化，但CD+8比率下降，以及CD+4/CD+8比值明显升高，支持IL-2和LAK细胞具有调节NPC患者免疫功能的观点。NK细胞也是构成机体抗肿瘤免疫功能的重要因素，Thompson[6]报告IL-2治疗后的患者NK细胞活性显著增加。本试验使用IL-2和LAK细胞治疗后，患者的NK活性较前显著提高，而未经治疗的对照组则无明显变化，提示该疗法对放疗后的NPC患者的NK活性亦有正向调节作用。
, 百拇医药
本文的结果证明，IL-2和LAK细胞的治疗，能够提高患者的NK细胞活性，调节T细胞亚群之间的失衡，这些免疫指标的变化与降低肿瘤复发、减少转移有无直接关系，因本研究观察时间短，目前尚难定论，有待进一步研究。
【作者简介】 曾春林(1954～)，男，湖南桃源人，1991～1992赴日本留学，主要从事放射肿瘤学和放射病理学研究。
【参 考 文 献】
[1] 谢良喜，陈志坚，李德锐.早期鼻咽癌66例放射治疗结果和预后因素分析[J].中华放射肿瘤学杂志，1999，8(3)：176
[2] Herberman RB.Interleukin-2 therapy of human cancer:potential benefits versus toxicity[J].J Clin Onkol,1989,7:1
, 百拇医药
[3] Sosman JA,Hank JA,Sondel PM,et al.In vivo activation of lymphokine activated killer activity with interleukin-2:prospects for combinations therapies[J].Semin Oncol,1989,17:22
[4] 陈丙莺.简易自然杀伤试验—LDH释放改良法[J].上海免疫学杂志，1989，9(4)：218
[5] Chong A,Scuder P.Tumour targets stimulate IL-2 activated killer cells to produce Interferon-γ and tumor necrosis factor[J].J Immunol,1989,142:2123
[6] Thompson JA.Influence of dose and duration of infusion of IL-2 on toxicity and immunomodulation[J].J Clin Oncol,1988,6:669
【收稿日期】 2000-01-05, http://www.100md.com