血管紧张素原、血管紧张素Ⅱ的Ⅰ型受体基因多态性及其与原发性高血压的关系
作者：韩雪莲 李锡明
单位：韩雪莲(南京大学医学院附属鼓楼医院血液科 南京，210008)；李锡明(南京大学医学院附属鼓楼医院心脏科)
关键词：血管紧张素原；受体，血管紧张素；基因频率；多态性；原发性高血压
临床心血管病杂志000411 摘要 目的：观察血管紧张素原(AGT)M235T、血管紧张素Ⅱ的Ⅰ型受体(AT1R)A1166C基因多态性在正常人群及原发性高血压(EH)患者中的分布。方法：采用聚合酶链反应(PCR)及限制性片段长度多态性分析(RFLP)方法。结果：正常人群(对照组，80例)及EH(95例)患者AGT M235T的频率分别为0.813、0.832；AT1R A1166C频率分别为0.050、0.053。两种基因多态性在EH患者与对照组间无显著性差异，但AGT M235T在<60岁的EH患者中频率显著高于≥60岁的患者和<60岁对照组，而AT1R A1166C无此差异。结论：两种基因多态性因人种不同而不同。AGT M235T与EH早期发病有关，而AT1R A1166C对于EH的发生无重要作用。
, 百拇医药
Angiotensinogen and angiotensin Ⅱ type Ⅰ receptor gene polymorphisms in essential hypertension in Chinese
HAN Xue-lian
(Department of Hematology, Gulou Hospital,School of
Medicine,Nanjing University,Nanjing 210008)
LI Xi-ming
(Department of Cardiology,Gulou Hospital,School of Medicine,Nanjing University)
, 百拇医药
Abstract Objective:To investigate whether the angiotensinogen(AGT) M235T and the angiotensin Ⅱ type Ⅰ receptor (AT1R) A1166C polymorphisms might be implicated in essential hypertension (EH) in Chinese of Nanjing area.Method:95 patients with documented EH and 80 normal controls were studied by PCR and RFLP.Result:The frequencies of the AGT M235T allele were 0.832、0.813 and the frequencies of the AT1R 1166C allele were 0.053、0.050 in EH patients and controls respectively.The frequencies of the AGT M235T was significantly higher in the EH (<60 years) than the EH patients (≥60 years) (χ2=4.4,P<0.05)and the controls (<60 years) (χ2=12.55,P<0.01).No statistical significance was found between the frequencies of the AT1R A1166C in the EH patients and the controls.And no correlation between the AGT M235T and AT1R 1166C alleles was detected.Conclusion:The results suggested that AGT M235T was associated with EH occured in younger patients,but there was no relationship between the AT1R A1166C polymorphisms and EH.
, 百拇医药
Key words Angiotensinogen Angiotensin receptor Gene frequency Polymorphisms Essential hypertension
原发性高血压(EH)是公认的与遗传有关的疾病，寻找EH的相关基因，观察其与EH的发生、发展之间的关系，是当前研究的一个重要方面。血管紧张素原(AGT)及血管紧张素Ⅱ的Ⅰ型受体(AT1R)是重要的心血管调节系统肾素-血管紧张素系统(RAS)的关键成分。目前认为AGT M235T和AT1R1166C两种基因多态性的频率因人种不同而不同〔1，2〕。我国有关这方面的报道还比较少，本文应用PCR-RFLP方法分析中国南京地区人群该两种基因频率分布，及其与EH的关系。
1 对象与方法
1.1 病例选择
EH组：95例，男59例，女36例，年龄30～80(51.7±12.3)岁；体重指数(BMI)(24.3±10.6) kg/m2，血胆固醇(TC) (4.4±1.2) mmol/L,甘油三酯(TG) (1.8±0.7) mmol/L。具有明确的EH史〔经不同时间测量3次舒张压(DBP)≥95 mmHg(1 mmHg=0.133 kPa)或收缩压(SBP)≥160 mmHg，或经长期抗高血压治疗〕；具有EH家族史(一级亲属中有EH患者)；排除继发性高血压。对照组：80例，男45例，女35例，年龄25～76(45.1±12.8)岁；BMI、TC、TG分别为(23.6±7.2) kg/m2、(3.9±0.8) mmol/L、(1.3±0.3) mmol/L。经体检无心血管疾病和其他重大疾病史；无长期服用某药史。
, http://www.100md.com
1.2 试剂与设备
Tag DNA聚合酶、dNTPs、Tth111Ⅰ限制性内切酶、HaeⅢ限制性内切酶均为美国Promega公司产品。DNA Marker为上海复华实业产品有限公司产品；Acr、Bis、AP、TEMED为美国Sigma公司产品；引物由中国科学院上海细胞生物所合成；PE 480型PCR扩增仪为美国Perkin Elmer Cetus公司产品。
1.3 实验方法
DNA提取方法参照文献[3]，AGT M235T PCR扩增参照文献[4]，AT1R A1166C PCR扩增参照文献[5]，酶切、电泳银染法显色参照文献[4]和图1，2。
图1 AGT M2357 T基因多态性的PCR-RFLP分析
, 百拇医药
显示3种带型：①为M/M纯合子；②、③为M/T杂合子；④～⑦为T/T杂合子
1.4 统计学处理
年龄、BMI、TC、TG以
±s表示，基因型频率及等位基因频率采用χ2检验，计量资料两组比较采用t检验。
图2 AT1R A1166C基因多态性的PCR-RFLP分析
显示2种带型：①～⑧，10为A/A纯合子；⑨为A/C杂合子
2 结果
EH组及对照组AGT M235T、AT1R A1166C基因型及等位基因频率见表1，2。经χ2检验，符合Hardy Weinberg平衡。两种基因多态性及等位基因频率在EH组与对照组间经统计学处理无显著性差异(P>0.05)。将EH组按<60岁及≥60岁分为两组，发现AGT M235T基因频率在<60岁的EH组中显著高于对照组(χ2=4.4，P<0.05)，并极显著高于≥60岁的EH患者(χ2=12.55，P<0.01)，而AT1R A1166C在3组间无显著性差异。具有AGT T/T、M/T、M/M基因型EH患者具有AT1R A/C基因型者分别为2、3、0例，具有A/A基因型者分别为49、25、1例，经χ2检验未发现两种基因多态性间具有相关性(χ2=0.52， P>0.05)。
, 百拇医药
表1 EH组与对照组AGT M235T基因型及等位基因频率 组别
例数
基因型/例数(频率)
等位基因/染色体数(频率)
M/M
M/T
T/T
M
T
EH组
95
1(0.11)
, 百拇医药
30(0.32)
64(0.67)
32(0.168)
158(0.832)
对照组
80
3(0.37)
24(0.30)
53(0.66)
30(0.187)
130(0.813)
两组间等位基因频率比较，χ2=0.23，P>0.05表2 EH组与对照组AT1R A1166C基因型及等位基因频率 组别
, 百拇医药
例数
基因型/例数(频率)
等位基因/染色体数(频率)
A/A
A/C
A
C
EH组
95
85(0.89)
10(0.11)
180(0.947)
10(0.053)
, http://www.100md.com
对照组
80
72(0.90)
8(0.10)
152(0.950)
8(0.050)
两组间等位基因频率比较，χ2=0.02，P>0.05
3 讨论
本试验分析中国南京人群中AGT M235T、AT1R A1166C基因多态性及其与EH的关系。结果发现EH与对照组AGT M235T频率分别为0.832、0.813，高于白种人报道；AT1R A1166C频率分别为0.053、0.050，明显低于白种人〔1，2，6〕；与我国及日本有关报道接近〔5，7～9〕，说明这两种基因变异频率因人种不同而不同。
, http://www.100md.com
结果还发现AGT M235T、AT1R A1166C在EH患者与正常人群间无显著差异，但在<60岁的EH患者中AGT M235T的频率显著高于<60岁对照组，并显著高于≥60岁EH组。因为遗传的作用依年龄增大而相对减弱，提示AGT M235T基因变异对于EH的早期发病可能具有重要意义。由于≥60岁的EH患者仅19例，为能肯定AGT M235T基因变异与EH的早期发病的关系，有必要进行更大样本研究。我们分析了AGT M235T与AT1R A1166C间的关系，未发现两者之间有相关性，这一定程度上是因为AT1R A1166C频率极低，还可能与样本大小、病例选择标准、病情判断标准不同以及统计分析时侧重点不同，包括有无家族史、性别、年龄等因素有关，因此，扩大病例，进行大样本研究可能会取得更加确切的结果。但仅以此似乎仍不能解释众多作者的不同结论，考虑到EH影响因素较多，因此易感基因可能也较多，综合分析多个基因，包括AGT、AT1R、ACE等基因对EH发生、发展的影响，可能会进一步揭示EH的发病机制。
参考文献
, 百拇医药
1，Jeunemaitre X,Ledru F，Battaglia S,et al.Genetic polymorphisms of renin angiotensin system and angiog-raphic extent and severity of coronary artery disease:The corgene study.Hum Genet,1997,99:66～73
2，Russ A P,Maerz W,Ruzicka V,et al.Mainterance of blood pressures by the reninangiotensin system in normal man.Nature,1982,91:329～331
3，黄俊军，周新，哈黛文，等.PCR血液模板DNA提取方法探讨.临床检验杂志，1995，13：192～193
4，Bonnardeaux A,Davies E,Jeunemaitre X,et al.Angiotensin Ⅱ type Ⅰ receptor gene polymorphisms in human essential hypertension.Hypertension,1994,24:63～69
, http://www.100md.com
5，Nakauchi Y,SuehiroT,Yamamoto M,et al.Significance of angiotensin Ⅰ converting enzyme and angiotersin Ⅱ type 1 receptor gene polymorphisms as risk factors for coronary heart disease.Atherosclerosis,1996,125:161～169
6，Caufield M,Lavender P,Farrall M,et al.Linkage of the angiotensiongen gene to essential hypertension.N Engl Med,1994,330:1629～1633
7，樊红，李少英，顾维娟，等.血管紧张素Ⅱ的Ⅰ型受体与原发性高血压的相关性研究.中华医学遗传学杂志，1998，15：101～103
8，Iwai N,Ohmichi N,Nakamura Y,et al.Molecular variants of the angiotensinogen gene and hypertension in the Japanese population.Hypertension Res,1994,17:117～121
9，项坤三，郑泰山，孙多奇，等.Ⅰ型血管紧张素Ⅱ受体基因与中国人冠心病、高血压及糖尿病的关系.中华医学遗传学杂志，1998，15：9～12
(收稿 1999-07-05), http://www.100md.com
单位：韩雪莲(南京大学医学院附属鼓楼医院血液科 南京，210008)；李锡明(南京大学医学院附属鼓楼医院心脏科)
关键词：血管紧张素原；受体，血管紧张素；基因频率；多态性；原发性高血压
临床心血管病杂志000411 摘要 目的：观察血管紧张素原(AGT)M235T、血管紧张素Ⅱ的Ⅰ型受体(AT1R)A1166C基因多态性在正常人群及原发性高血压(EH)患者中的分布。方法：采用聚合酶链反应(PCR)及限制性片段长度多态性分析(RFLP)方法。结果：正常人群(对照组，80例)及EH(95例)患者AGT M235T的频率分别为0.813、0.832；AT1R A1166C频率分别为0.050、0.053。两种基因多态性在EH患者与对照组间无显著性差异，但AGT M235T在<60岁的EH患者中频率显著高于≥60岁的患者和<60岁对照组，而AT1R A1166C无此差异。结论：两种基因多态性因人种不同而不同。AGT M235T与EH早期发病有关，而AT1R A1166C对于EH的发生无重要作用。
, 百拇医药
Angiotensinogen and angiotensin Ⅱ type Ⅰ receptor gene polymorphisms in essential hypertension in Chinese
HAN Xue-lian
(Department of Hematology, Gulou Hospital,School of
Medicine,Nanjing University,Nanjing 210008)
LI Xi-ming
(Department of Cardiology,Gulou Hospital,School of Medicine,Nanjing University)
, 百拇医药
Abstract Objective:To investigate whether the angiotensinogen(AGT) M235T and the angiotensin Ⅱ type Ⅰ receptor (AT1R) A1166C polymorphisms might be implicated in essential hypertension (EH) in Chinese of Nanjing area.Method:95 patients with documented EH and 80 normal controls were studied by PCR and RFLP.Result:The frequencies of the AGT M235T allele were 0.832、0.813 and the frequencies of the AT1R 1166C allele were 0.053、0.050 in EH patients and controls respectively.The frequencies of the AGT M235T was significantly higher in the EH (<60 years) than the EH patients (≥60 years) (χ2=4.4,P<0.05)and the controls (<60 years) (χ2=12.55,P<0.01).No statistical significance was found between the frequencies of the AT1R A1166C in the EH patients and the controls.And no correlation between the AGT M235T and AT1R 1166C alleles was detected.Conclusion:The results suggested that AGT M235T was associated with EH occured in younger patients,but there was no relationship between the AT1R A1166C polymorphisms and EH.
, 百拇医药
Key words Angiotensinogen Angiotensin receptor Gene frequency Polymorphisms Essential hypertension
原发性高血压(EH)是公认的与遗传有关的疾病，寻找EH的相关基因，观察其与EH的发生、发展之间的关系，是当前研究的一个重要方面。血管紧张素原(AGT)及血管紧张素Ⅱ的Ⅰ型受体(AT1R)是重要的心血管调节系统肾素-血管紧张素系统(RAS)的关键成分。目前认为AGT M235T和AT1R1166C两种基因多态性的频率因人种不同而不同〔1，2〕。我国有关这方面的报道还比较少，本文应用PCR-RFLP方法分析中国南京地区人群该两种基因频率分布，及其与EH的关系。
1 对象与方法
1.1 病例选择
EH组：95例，男59例，女36例，年龄30～80(51.7±12.3)岁；体重指数(BMI)(24.3±10.6) kg/m2，血胆固醇(TC) (4.4±1.2) mmol/L,甘油三酯(TG) (1.8±0.7) mmol/L。具有明确的EH史〔经不同时间测量3次舒张压(DBP)≥95 mmHg(1 mmHg=0.133 kPa)或收缩压(SBP)≥160 mmHg，或经长期抗高血压治疗〕；具有EH家族史(一级亲属中有EH患者)；排除继发性高血压。对照组：80例，男45例，女35例，年龄25～76(45.1±12.8)岁；BMI、TC、TG分别为(23.6±7.2) kg/m2、(3.9±0.8) mmol/L、(1.3±0.3) mmol/L。经体检无心血管疾病和其他重大疾病史；无长期服用某药史。
, http://www.100md.com
1.2 试剂与设备
Tag DNA聚合酶、dNTPs、Tth111Ⅰ限制性内切酶、HaeⅢ限制性内切酶均为美国Promega公司产品。DNA Marker为上海复华实业产品有限公司产品；Acr、Bis、AP、TEMED为美国Sigma公司产品；引物由中国科学院上海细胞生物所合成；PE 480型PCR扩增仪为美国Perkin Elmer Cetus公司产品。
1.3 实验方法
DNA提取方法参照文献[3]，AGT M235T PCR扩增参照文献[4]，AT1R A1166C PCR扩增参照文献[5]，酶切、电泳银染法显色参照文献[4]和图1，2。
图1 AGT M2357 T基因多态性的PCR-RFLP分析
, 百拇医药
显示3种带型：①为M/M纯合子；②、③为M/T杂合子；④～⑦为T/T杂合子
1.4 统计学处理
年龄、BMI、TC、TG以
±s表示，基因型频率及等位基因频率采用χ2检验，计量资料两组比较采用t检验。图2 AT1R A1166C基因多态性的PCR-RFLP分析
显示2种带型：①～⑧，10为A/A纯合子；⑨为A/C杂合子
2 结果
EH组及对照组AGT M235T、AT1R A1166C基因型及等位基因频率见表1，2。经χ2检验，符合Hardy Weinberg平衡。两种基因多态性及等位基因频率在EH组与对照组间经统计学处理无显著性差异(P>0.05)。将EH组按<60岁及≥60岁分为两组，发现AGT M235T基因频率在<60岁的EH组中显著高于对照组(χ2=4.4，P<0.05)，并极显著高于≥60岁的EH患者(χ2=12.55，P<0.01)，而AT1R A1166C在3组间无显著性差异。具有AGT T/T、M/T、M/M基因型EH患者具有AT1R A/C基因型者分别为2、3、0例，具有A/A基因型者分别为49、25、1例，经χ2检验未发现两种基因多态性间具有相关性(χ2=0.52， P>0.05)。
, 百拇医药
表1 EH组与对照组AGT M235T基因型及等位基因频率 组别
例数
基因型/例数(频率)
等位基因/染色体数(频率)
M/M
M/T
T/T
M
T
EH组
95
1(0.11)
, 百拇医药
30(0.32)
64(0.67)
32(0.168)
158(0.832)
对照组
80
3(0.37)
24(0.30)
53(0.66)
30(0.187)
130(0.813)
两组间等位基因频率比较，χ2=0.23，P>0.05表2 EH组与对照组AT1R A1166C基因型及等位基因频率 组别
, 百拇医药
例数
基因型/例数(频率)
等位基因/染色体数(频率)
A/A
A/C
A
C
EH组
95
85(0.89)
10(0.11)
180(0.947)
10(0.053)
, http://www.100md.com
对照组
80
72(0.90)
8(0.10)
152(0.950)
8(0.050)
两组间等位基因频率比较，χ2=0.02，P>0.05
3 讨论
本试验分析中国南京人群中AGT M235T、AT1R A1166C基因多态性及其与EH的关系。结果发现EH与对照组AGT M235T频率分别为0.832、0.813，高于白种人报道；AT1R A1166C频率分别为0.053、0.050，明显低于白种人〔1，2，6〕；与我国及日本有关报道接近〔5，7～9〕，说明这两种基因变异频率因人种不同而不同。
, http://www.100md.com
结果还发现AGT M235T、AT1R A1166C在EH患者与正常人群间无显著差异，但在<60岁的EH患者中AGT M235T的频率显著高于<60岁对照组，并显著高于≥60岁EH组。因为遗传的作用依年龄增大而相对减弱，提示AGT M235T基因变异对于EH的早期发病可能具有重要意义。由于≥60岁的EH患者仅19例，为能肯定AGT M235T基因变异与EH的早期发病的关系，有必要进行更大样本研究。我们分析了AGT M235T与AT1R A1166C间的关系，未发现两者之间有相关性，这一定程度上是因为AT1R A1166C频率极低，还可能与样本大小、病例选择标准、病情判断标准不同以及统计分析时侧重点不同，包括有无家族史、性别、年龄等因素有关，因此，扩大病例，进行大样本研究可能会取得更加确切的结果。但仅以此似乎仍不能解释众多作者的不同结论，考虑到EH影响因素较多，因此易感基因可能也较多，综合分析多个基因，包括AGT、AT1R、ACE等基因对EH发生、发展的影响，可能会进一步揭示EH的发病机制。
参考文献
, 百拇医药
1，Jeunemaitre X,Ledru F，Battaglia S,et al.Genetic polymorphisms of renin angiotensin system and angiog-raphic extent and severity of coronary artery disease:The corgene study.Hum Genet,1997,99:66～73
2，Russ A P,Maerz W,Ruzicka V,et al.Mainterance of blood pressures by the reninangiotensin system in normal man.Nature,1982,91:329～331
3，黄俊军，周新，哈黛文，等.PCR血液模板DNA提取方法探讨.临床检验杂志，1995，13：192～193
4，Bonnardeaux A,Davies E,Jeunemaitre X,et al.Angiotensin Ⅱ type Ⅰ receptor gene polymorphisms in human essential hypertension.Hypertension,1994,24:63～69
, http://www.100md.com
5，Nakauchi Y,SuehiroT,Yamamoto M,et al.Significance of angiotensin Ⅰ converting enzyme and angiotersin Ⅱ type 1 receptor gene polymorphisms as risk factors for coronary heart disease.Atherosclerosis,1996,125:161～169
6，Caufield M,Lavender P,Farrall M,et al.Linkage of the angiotensiongen gene to essential hypertension.N Engl Med,1994,330:1629～1633
7，樊红，李少英，顾维娟，等.血管紧张素Ⅱ的Ⅰ型受体与原发性高血压的相关性研究.中华医学遗传学杂志，1998，15：101～103
8，Iwai N,Ohmichi N,Nakamura Y,et al.Molecular variants of the angiotensinogen gene and hypertension in the Japanese population.Hypertension Res,1994,17:117～121
9，项坤三，郑泰山，孙多奇，等.Ⅰ型血管紧张素Ⅱ受体基因与中国人冠心病、高血压及糖尿病的关系.中华医学遗传学杂志，1998，15：9～12
(收稿 1999-07-05), http://www.100md.com