重庆市儿童哮喘α1-抗糜蛋白酶遗传缺陷基因频率及基因分析研究
作者：尹晓娟 李为明 魏红光 光丽霞
单位：第三军医大学附属新桥医院儿科，重庆 400037
关键词：儿童哮喘；α1-抗糜蛋白酶；遗传
第三军医大学学报001134
中图法分类号：R562.250.2 文献标识码：B
文章编号：1000-5404(2000)11-1032-01
Study on gene frequency of α1-antichymotrypsin deficiency and gene analysis in childhood asthma
, 百拇医药 哮喘发病具有明显的遗传倾向，国外研究显示α1-抗糜蛋白酶(α1-ACT)遗传缺陷是哮喘发病的重要因素[1]。为探讨α1-抗糜蛋白酶遗传缺陷在中国儿童哮喘发病中的作用，本研究对90例重庆市汉族儿童哮喘血浆α1-ACT含量、Bonn-1和Bochum-1变异体进行了初步探讨，取得如下结果。
1 资料与方法
1.1 资料
1.1.1研究对象选择及血样本来源 按文献[3]选择汉族哮喘儿童90例作为哮喘组，年龄0.25～12.75岁；并选择汉族健康儿童180例作为儿童对照组,年龄0.03～13.4岁；健康献血员200例作为成人对照组。518份血样用于测定血浆α1-ACT含量和表型分析，其中470份采自研究对象(哮喘组在缓解期采血)；48份血样采自3组25个汉族家庭的父母。用于基因分析的5份血样采自5例α1-ACT杂合缺失者。所有血样均用ACD液抗凝。
, 百拇医药
1.1.2 主要试剂 人血浆蛋白标准品、兔抗人α1-ACT抗血清;PCR 试剂盒，PCR Marker，AluⅠ、DdeⅠ内切酶。检测α1-ACT exon Ⅲ Pro229→Ala(CCT→GCT) 点突变引物序列：引物1为5'-TATGAGGACTCTGGGCACTTC-3',引物2为5'-ACTCCAGAGAGTCTCT-CCAC-3'；检测α1-ACT exonⅡ Leu55→Pro(CTG→CCG) 点突变引物序列：引物3为5'-CTCTACAGTGGTTTGCCTAATAAC-3'，引物4为5'-TCCATCTGGCCCTCTGAG ACT-3'。
1.2 方法
1.2.1聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦免疫固定技术检测α1-ACT表型。
1.2.2 常规火箭电泳检测血浆α1-ACT含量，确定α1-ACT杂合缺失。
, 百拇医药
1.2.3 聚合酶链反应及酶切检测技术检测Bonn-1和Bochum-1变异体。
1.2.4 临床资料 判定哮喘组α1-ACT杂合缺失与非缺失患者在如下指标是否存在差异：哮喘的初发年龄、发作住院次数、放射性过敏原吸附试验(RAST)结果。
1.3 统计学处理
用Mantel-Haenszel χ2MH检验、t检验及Fisher确切概率法进行数据处理。
2 结果
α1-ACT杂合缺失及其频率：哮喘组4例、成人对照组1例确定为α1-ACT杂合缺失；哮喘组α1-ACT杂合缺失频率为4.4%，比健康儿童对照组(0)及成人对照组(0.5%)明显增高(P<0.05)。哮喘组α1-ACT杂合缺失的基因频率为0.022, 成人对照组α1-ACT杂合缺失的基因频率为0.003, 哮喘组较成人对照组增高(P<0.05)。
, 百拇医药
α1-ACT表型分析：在蛋白水平存在遗传多态性。
基因分析：未发现Bonn-1和Bochum-1变异体。
临床资料分析：α1-ACT杂合缺失患者哮喘初发年龄早，哮喘住院次数多；RAST阳性率显著增高。
3 讨论
以上结果提示α1-ACT杂合缺失增加了儿童患哮喘的危险性，并在一定程度上影响儿童哮喘的严重性，血浆α1-ACT检测可望为儿童哮喘临床治疗提供一项有价值指标。α1-ACT遗传多态性的发现提示α1-ACT有希望成为新的遗传标记。虽然Bonn-1和Bochum-1变异体与所研究的90例汉族儿童哮喘发病无关，但由测定血浆含量确定的α1-ACT杂合缺失与该基因分析的不平行现象提示可能存在本筛查范围外的基因突变，这为进一步研究α1-ACT与疾病的相互关系拓宽了视野。
, http://www.100md.com
基金项目：国家自然科学基金资助项目(39570749)
作者简介：尹晓娟(1966-)，女，湖南省邵阳市人，硕士，主治医师，主要从事α1-抗糜蛋白酶遗传缺陷在中国人发病中的作用方面的研究，发表论文10余篇。
参考文献：
[1]Lindmark B,Svenonius E,Eriksson S.Heterozygous α1-antichymotrypsin and PiZ α1-antitrypsin deficiency, Prevalence and clinical spectrum in asthmatic children[J].Allergy,1990,45(3)：197-203.
[2]尹晓娟，李为明.α1-抗糜蛋白酶的研究进展[J].四川医学，1999,20(3):281-283.
[3]全国儿科哮喘协作组.儿童哮喘诊断标准和治疗常规[J].中华儿科杂志，1993,31(3)：222-224.
收稿日期：1999-11-01
修回日期：2000-08-25, 百拇医药
单位：第三军医大学附属新桥医院儿科，重庆 400037
关键词：儿童哮喘；α1-抗糜蛋白酶；遗传
第三军医大学学报001134
中图法分类号：R562.250.2 文献标识码：B
文章编号：1000-5404(2000)11-1032-01
Study on gene frequency of α1-antichymotrypsin deficiency and gene analysis in childhood asthma
, 百拇医药 哮喘发病具有明显的遗传倾向，国外研究显示α1-抗糜蛋白酶(α1-ACT)遗传缺陷是哮喘发病的重要因素[1]。为探讨α1-抗糜蛋白酶遗传缺陷在中国儿童哮喘发病中的作用，本研究对90例重庆市汉族儿童哮喘血浆α1-ACT含量、Bonn-1和Bochum-1变异体进行了初步探讨，取得如下结果。
1 资料与方法
1.1 资料
1.1.1研究对象选择及血样本来源 按文献[3]选择汉族哮喘儿童90例作为哮喘组，年龄0.25～12.75岁；并选择汉族健康儿童180例作为儿童对照组,年龄0.03～13.4岁；健康献血员200例作为成人对照组。518份血样用于测定血浆α1-ACT含量和表型分析，其中470份采自研究对象(哮喘组在缓解期采血)；48份血样采自3组25个汉族家庭的父母。用于基因分析的5份血样采自5例α1-ACT杂合缺失者。所有血样均用ACD液抗凝。
, 百拇医药
1.1.2 主要试剂 人血浆蛋白标准品、兔抗人α1-ACT抗血清;PCR 试剂盒，PCR Marker，AluⅠ、DdeⅠ内切酶。检测α1-ACT exon Ⅲ Pro229→Ala(CCT→GCT) 点突变引物序列：引物1为5'-TATGAGGACTCTGGGCACTTC-3',引物2为5'-ACTCCAGAGAGTCTCT-CCAC-3'；检测α1-ACT exonⅡ Leu55→Pro(CTG→CCG) 点突变引物序列：引物3为5'-CTCTACAGTGGTTTGCCTAATAAC-3'，引物4为5'-TCCATCTGGCCCTCTGAG ACT-3'。
1.2 方法
1.2.1聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦免疫固定技术检测α1-ACT表型。
1.2.2 常规火箭电泳检测血浆α1-ACT含量，确定α1-ACT杂合缺失。
, 百拇医药
1.2.3 聚合酶链反应及酶切检测技术检测Bonn-1和Bochum-1变异体。
1.2.4 临床资料 判定哮喘组α1-ACT杂合缺失与非缺失患者在如下指标是否存在差异：哮喘的初发年龄、发作住院次数、放射性过敏原吸附试验(RAST)结果。
1.3 统计学处理
用Mantel-Haenszel χ2MH检验、t检验及Fisher确切概率法进行数据处理。
2 结果
α1-ACT杂合缺失及其频率：哮喘组4例、成人对照组1例确定为α1-ACT杂合缺失；哮喘组α1-ACT杂合缺失频率为4.4%，比健康儿童对照组(0)及成人对照组(0.5%)明显增高(P<0.05)。哮喘组α1-ACT杂合缺失的基因频率为0.022, 成人对照组α1-ACT杂合缺失的基因频率为0.003, 哮喘组较成人对照组增高(P<0.05)。
, 百拇医药
α1-ACT表型分析：在蛋白水平存在遗传多态性。
基因分析：未发现Bonn-1和Bochum-1变异体。
临床资料分析：α1-ACT杂合缺失患者哮喘初发年龄早，哮喘住院次数多；RAST阳性率显著增高。
3 讨论
以上结果提示α1-ACT杂合缺失增加了儿童患哮喘的危险性，并在一定程度上影响儿童哮喘的严重性，血浆α1-ACT检测可望为儿童哮喘临床治疗提供一项有价值指标。α1-ACT遗传多态性的发现提示α1-ACT有希望成为新的遗传标记。虽然Bonn-1和Bochum-1变异体与所研究的90例汉族儿童哮喘发病无关，但由测定血浆含量确定的α1-ACT杂合缺失与该基因分析的不平行现象提示可能存在本筛查范围外的基因突变，这为进一步研究α1-ACT与疾病的相互关系拓宽了视野。
, http://www.100md.com
基金项目：国家自然科学基金资助项目(39570749)
作者简介：尹晓娟(1966-)，女，湖南省邵阳市人，硕士，主治医师，主要从事α1-抗糜蛋白酶遗传缺陷在中国人发病中的作用方面的研究，发表论文10余篇。
参考文献：
[1]Lindmark B,Svenonius E,Eriksson S.Heterozygous α1-antichymotrypsin and PiZ α1-antitrypsin deficiency, Prevalence and clinical spectrum in asthmatic children[J].Allergy,1990,45(3)：197-203.
[2]尹晓娟，李为明.α1-抗糜蛋白酶的研究进展[J].四川医学，1999,20(3):281-283.
[3]全国儿科哮喘协作组.儿童哮喘诊断标准和治疗常规[J].中华儿科杂志，1993,31(3)：222-224.
收稿日期：1999-11-01
修回日期：2000-08-25, 百拇医药