利川产黄连须中小檗碱薄层扫描法的含量测定
作者：毛爱英 汪经环
单位：毛爱英(湖北省咸宁市药品检验所 437000)；汪经环(湖北中医学院 430061)
关键词：黄连须；小檗碱；含量测定；薄层扫描
湖北中医杂志000346摘 要：本文用薄层扫描法测定了利川产黄连须中小檗碱的含量，硅胶G为固定相，苯-乙酸乙酯-甲醇-异丙醇-氨水(6∶3∶1.5∶1.5∶0.5)为展开剂，λR＝305nm，λS＝345nm，测得其平均含量为0.3325%，r＝0.9994，回收率＝100.7%。
湖北利川每年加工黄连药材时，有大量的黄连须产生。黄连须中含有一定量的小檗碱，故有望成为提取小檗碱的新资源。然而有关利川产黄连须中小檗碱含量测定的研究至今未见报道。笔者提出了用薄层扫描法测定黄连须的方法，并测定出利川产黄连须中小檗碱的平均含量为0.3325%，为开发利用新资源提供了相应的依据，现报道如下。
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1 仪器、样品及试剂
CS-9000型双波长飞点扫描仪(日本岛津公司产)；CAMAG TLC自动铺板器(瑞士CAMAG公司产)。
盐酸小檗碱对照品：由中国卫生部药品生物制品检定所提供。黄连(味连)须根(鄂西自治州利川县产，存放三年)；硅胶G(薄层层析用，青岛海洋化工厂产)；氧化铝(上海五四农场产)。除盐酸、乙醇为化学纯外，其余试剂为分析纯。
2 供试品溶液与对照品溶液的制备
2.1 供试品溶液
取黄连须根粗粉约0.8g，精密称定，以70ml甲醇-盐酸(100∶1)连续回流提取至流出提取液无色，将提取液适当浓缩，移至50ml容量瓶中，以甲醇-盐酸(100∶1)稀释至刻度。精密吸取此溶液10ml，加入已处理好的氧化铝柱(中性氧化铝10g，湿法装柱，用乙醇约60ml预洗)。用乙醇约65ml洗脱，收集活脱液，适当浓缩后，转移至5ml容量瓶中，加乙醇稀释至刻度，摇匀，供点样用。
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2.2 对照品溶液
精密称取盐酸小檗碱对照品10mg于20ml容量瓶中，用乙醇溶解，稀释至刻度，摇匀，浓度为0.5mg/ml，供点样用。
3 薄层分离方法及薄层扫描条件
3.1 薄层分离方法
制板：取硅胶G与0.3%羧甲基纤维素钠水溶液以1∶25的比例混合，充分研匀后，以自动涂布器涂布于20cm×20cm玻璃板上，涂布厚度约0.3mm，在室温下自然干燥后，置烘箱内(105℃)活化1小时，放于干燥器中备用。展开剂：苯-乙酸乙酯-甲醇-异丙醇-氨水(6∶3∶1.5∶1.5∶0.5)[1]。
展开方式：将浓氨水盛于小瓶内，置层析缸中，加入展开剂，再将已点好样的薄层板放入层析缸内，边上行展开边饱和，展距10cm，小檗碱对照品斑点Rf值约为0.4。供试品可展开分离出6个斑点，第四个斑点与对照品Rf值一致。
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3.2 薄层扫描条件
光源：D2灯；λR＝305nm；λS＝345nm；反射式锯齿形扫描；线性化器5x＝3；灵敏度：中等；狭缝：0.4mm×0.4mm。
4 线性考察
精密吸取对照品溶液1、3、5、7、9ml，点样于20cm×20cm的薄层板上，按前述条件展开，展开完毕取出晾干，按前述条件扫描，以点样量为横座标、斑点面积积分值为纵座标，绘制工作曲线，得一条不通过原点的直线。
回归方程为：Y＝3323.026X+18743.28，r＝0.9994，线性范围为0.5～4.5μg。
5 样品测定
精密吸取制备好的对照品溶液1μl(标1)、3μl(标2)及样品溶液7μl点样于同一块20cm×20cm薄层板上，点样顺序为标1、样、标2、样、标1、样、标2共七点，按前述方法及条件展开，扫描测定，共测三份，按外标二点法计算，结果见表1。
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表1 黄连须根中小檗碱含量(n＝3) 编号
药粉量
(mg)
测得小檗碱
(mg)
含量
(%)
RSD
(%)
1
801.6
2.71
0.338
, 百拇医药
0.15
2
800.8
2.68
0.335
0.23
3
800.5
2.60
0.325
1.25
6 回收率考察
精密吸取对照品溶液1μl(标1)、3μl(标2)、供试样品溶液7μl和供试品溶液7μl加对照品溶液1μl，点样于薄层板上。点样顺序：标1、样、样+标、标2、标1、样、样+标、标2共八个点在同一薄层板上，共三块板，再按前述方法及条件展开，扫描测定，结果见表2。
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表2 回收率试验(n＝3) 加入值
(μg)
测得值
(μg)
回收率
(%)
(%)
RSD(%)
0.5
0.502
100.4
0.5
, 百拇医药 0.497
99.4
100.7
1.16
0.5
0.511
102.2
7 稳定性试验
取上述对照品液3μl点样，展开，间隔时间测定峰面积，结果4小时内稳定。
8 讨论
8.1 提取方法的选择
曾试用超声波振荡法提取，每隔0.5小时更换1次新鲜溶剂，更换5次溶剂提取后仍难提取完全，且更换溶剂次数太多，易引起提取损失。该法提取效果没有连续回流提取法好[1]。
8.2 展开方式的选择
上行展开时，将盛浓氨水的小瓶置于层析缸内，边展开边饱和，小檗碱对照品斑点的Rf值可达0.4。若先用氨水饱和0.5小时，再上行展开，则小檗碱斑点Rf值在0.2～0.3之间。
参考文献：
1，《中国药典》.人民出版社，1990年版.275～276
收稿日期：1999-11-08, 百拇医药
单位：毛爱英(湖北省咸宁市药品检验所 437000)；汪经环(湖北中医学院 430061)
关键词：黄连须；小檗碱；含量测定；薄层扫描
湖北中医杂志000346摘 要：本文用薄层扫描法测定了利川产黄连须中小檗碱的含量，硅胶G为固定相，苯-乙酸乙酯-甲醇-异丙醇-氨水(6∶3∶1.5∶1.5∶0.5)为展开剂，λR＝305nm，λS＝345nm，测得其平均含量为0.3325%，r＝0.9994，回收率＝100.7%。
湖北利川每年加工黄连药材时，有大量的黄连须产生。黄连须中含有一定量的小檗碱，故有望成为提取小檗碱的新资源。然而有关利川产黄连须中小檗碱含量测定的研究至今未见报道。笔者提出了用薄层扫描法测定黄连须的方法，并测定出利川产黄连须中小檗碱的平均含量为0.3325%，为开发利用新资源提供了相应的依据，现报道如下。
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1 仪器、样品及试剂
CS-9000型双波长飞点扫描仪(日本岛津公司产)；CAMAG TLC自动铺板器(瑞士CAMAG公司产)。
盐酸小檗碱对照品：由中国卫生部药品生物制品检定所提供。黄连(味连)须根(鄂西自治州利川县产，存放三年)；硅胶G(薄层层析用，青岛海洋化工厂产)；氧化铝(上海五四农场产)。除盐酸、乙醇为化学纯外，其余试剂为分析纯。
2 供试品溶液与对照品溶液的制备
2.1 供试品溶液
取黄连须根粗粉约0.8g，精密称定，以70ml甲醇-盐酸(100∶1)连续回流提取至流出提取液无色，将提取液适当浓缩，移至50ml容量瓶中，以甲醇-盐酸(100∶1)稀释至刻度。精密吸取此溶液10ml，加入已处理好的氧化铝柱(中性氧化铝10g，湿法装柱，用乙醇约60ml预洗)。用乙醇约65ml洗脱，收集活脱液，适当浓缩后，转移至5ml容量瓶中，加乙醇稀释至刻度，摇匀，供点样用。
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2.2 对照品溶液
精密称取盐酸小檗碱对照品10mg于20ml容量瓶中，用乙醇溶解，稀释至刻度，摇匀，浓度为0.5mg/ml，供点样用。
3 薄层分离方法及薄层扫描条件
3.1 薄层分离方法
制板：取硅胶G与0.3%羧甲基纤维素钠水溶液以1∶25的比例混合，充分研匀后，以自动涂布器涂布于20cm×20cm玻璃板上，涂布厚度约0.3mm，在室温下自然干燥后，置烘箱内(105℃)活化1小时，放于干燥器中备用。展开剂：苯-乙酸乙酯-甲醇-异丙醇-氨水(6∶3∶1.5∶1.5∶0.5)[1]。
展开方式：将浓氨水盛于小瓶内，置层析缸中，加入展开剂，再将已点好样的薄层板放入层析缸内，边上行展开边饱和，展距10cm，小檗碱对照品斑点Rf值约为0.4。供试品可展开分离出6个斑点，第四个斑点与对照品Rf值一致。
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3.2 薄层扫描条件
光源：D2灯；λR＝305nm；λS＝345nm；反射式锯齿形扫描；线性化器5x＝3；灵敏度：中等；狭缝：0.4mm×0.4mm。
4 线性考察
精密吸取对照品溶液1、3、5、7、9ml，点样于20cm×20cm的薄层板上，按前述条件展开，展开完毕取出晾干，按前述条件扫描，以点样量为横座标、斑点面积积分值为纵座标，绘制工作曲线，得一条不通过原点的直线。
回归方程为：Y＝3323.026X+18743.28，r＝0.9994，线性范围为0.5～4.5μg。
5 样品测定
精密吸取制备好的对照品溶液1μl(标1)、3μl(标2)及样品溶液7μl点样于同一块20cm×20cm薄层板上，点样顺序为标1、样、标2、样、标1、样、标2共七点，按前述方法及条件展开，扫描测定，共测三份，按外标二点法计算，结果见表1。
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表1 黄连须根中小檗碱含量(n＝3) 编号
药粉量
(mg)
测得小檗碱
(mg)
含量
(%)
RSD
(%)
1
801.6
2.71
0.338
, 百拇医药
0.15
2
800.8
2.68
0.335
0.23
3
800.5
2.60
0.325
1.25
6 回收率考察
精密吸取对照品溶液1μl(标1)、3μl(标2)、供试样品溶液7μl和供试品溶液7μl加对照品溶液1μl，点样于薄层板上。点样顺序：标1、样、样+标、标2、标1、样、样+标、标2共八个点在同一薄层板上，共三块板，再按前述方法及条件展开，扫描测定，结果见表2。
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表2 回收率试验(n＝3) 加入值
(μg)
测得值
(μg)
回收率
(%)
(%)RSD(%)
0.5
0.502
100.4
0.5
, 百拇医药 0.497
99.4
100.7
1.16
0.5
0.511
102.2
7 稳定性试验
取上述对照品液3μl点样，展开，间隔时间测定峰面积，结果4小时内稳定。
8 讨论
8.1 提取方法的选择
曾试用超声波振荡法提取，每隔0.5小时更换1次新鲜溶剂，更换5次溶剂提取后仍难提取完全，且更换溶剂次数太多，易引起提取损失。该法提取效果没有连续回流提取法好[1]。
8.2 展开方式的选择
上行展开时，将盛浓氨水的小瓶置于层析缸内，边展开边饱和，小檗碱对照品斑点的Rf值可达0.4。若先用氨水饱和0.5小时，再上行展开，则小檗碱斑点Rf值在0.2～0.3之间。
参考文献：
1，《中国药典》.人民出版社，1990年版.275～276
收稿日期：1999-11-08, 百拇医药