肝癌、胃癌、大肠癌外周血T淋巴细胞丝裂原反应性和血浆IL-2、IL-6活性及IL-2受体的表达
作者：孟庆润 张军 杨帆 刘睿智 刘喜春 李璐 赵雪俭
单位：130011 长春，第一汽车集团公司肝胆外科研究所(孟庆润、张军、杨帆)；白求恩医科大学病理生理教研室(刘睿智、刘喜春、李璐、赵雪俭)
关键词：癌；白细胞介素-2；白细胞介素-6；可溶性白细胞介素-2受体
中华肝胆外科杂志/980310.htm 【摘要】 目的 探讨肝癌、胃癌、大肠癌发病机理。方法 应用生物测定法检测肝癌、胃癌、大肠癌外周血T淋巴细胞丝裂原反应性和血浆白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-6(IL-6)活性及可溶性白细胞介素-2受体(IL-2R)的表达。结果 肝癌、胃癌、大肠癌患者T淋巴细胞丝裂原反应性和血浆IL-2、IL-6活性均显著低于对照组，而IL-2R表达却均显著高于对照组。结论 肝癌、胃癌、大肠癌患者外周血T淋巴细胞功能被严重抑制，IL-2、IL-6和IL-2R可能在该病的发病机制中起一定作用。
, http://www.100md.com
The mitogenesis of lymphocytes in peripheral blood and activity of interleukin-2(IL-2), interleukin-6(IL-6), and interleukin-2 receptor (IL-2R) in plasma of patients with liver, stomach, intestinal cancer. Meng Qingrun, Zhang Jun, Yang Fan. Institute of Hepatobiliaty Surgery. FAW Group Corp. Changchun 130011
【Abstract】 Objective To explore the etiopathology of liver, stomach, and intestinal cancer. Methods The mitogenesis of lympocytes in peripheral blood and interleukin-2(IL-2), interleukin-6(IL-6) activity and experssion of interleukin-2 receptors(IL-2R) in plasma of patients with liver, stomach and intestinal cancer were determined using bioassay technique. Results The mitogenesis of T lymphocytes and activity of IL-2, IL-6 in patients with liver, stomach and intestinal cancer were markedly decreased in comparison with controls and expression of IL-2R increased significantly. Conclusion These results suggest that IL-2, IL-6 and IL-2R play a role in pathogenesis of liver, stomach and intlestinal cancer and may be used as useful laboratory parameters for judgment of patient’s condition.
, 百拇医药
【Key words】 Cancer IL-2 IL-6 Soluble IL-2R
肿瘤的发生和发展是极为复杂的过程，对其机制的探讨是当今免疫学研究最活跃的领域之一。近年来，免疫监视功能低下和细胞因子网络及其受体间调节失控在本病发病学中的作用已引起重视〔1〕。因而，本文研究肝癌、胃癌、大肠癌患者外周血T淋巴细胞丝裂原反应性和血浆IL-2、IL-6活性及IL-2受体的表达，可望进一步阐明癌症患者可能存在的免疫功能异常，为其免疫调整治疗提供依据。
材料与方法
1.研究对象 标本均来自中晚期肿瘤患者，肝癌20例(男12例，女8例)，平均年龄62.05±8.33岁；胃癌38例(男28例，女10例)，平均年龄58.03±9.02岁；大肠癌27例(男18例，女9例)，平均年龄50.11±12.80岁。对肿瘤的诊断及分期均参照《中国常见恶性肿瘤诊治规范》中有关标准确定。另取正常成人血作为对照。对照组38例(男25例，女13例)，平均年龄55.34±10.75及性别构成比与研究对象无显著性差异(P>0.05)。
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2.主要试剂 IMDM培养基为美国Gibco公司产品；小牛血清(FCS)由大连生物制品研究所提供；PHA为上海医学化验所产品；3H-TdR购自中国科学院上海原子能研究所；MH60.BSF2细胞株由白求恩医科大学免疫教研室惠赠。
3.主要方法
(1)采静脉血5 ml，肝素抗凝，无菌分离血浆，-30℃冷冻保存，待检测。
(2)外周血T细胞丝裂原反应性测定 采用微量全血培养法〔2〕测定。每份样品3复孔，淋巴细胞增殖反映性用cpm/30 μl全血表示，同时计算淋巴细胞转化刺激指数(Stimulation Index SI)。
(3)IL-2活性测定 采用淋巴母细胞化法〔3〕测定。每份样品3复孔，结果以每分钟脉冲数(cpm)表示。
, 百拇医药
(4)IL-6活性测定 采用IL-6依赖细胞增殖反应法〔4〕测定。设3复孔，并设培养液对照。结果以OD值表示。
(5)IL-2受体的测定 试剂盒购自白求恩医科大学免疫教研室。按试剂盒提供的方法测定。
(6)资料统计分析 实验数据均以平均值±标准差表示。均数的组间比较应用Student检验。
结 果
1.外周血T淋巴细胞丝裂原反应性 表1结果显示，肝癌、胃癌、大肠癌患者T细胞丝裂原反应性无论用cpm/30 μl全血表示还是用SI表示均明显低于对照组。但各组癌症患者之间比较无明显差异(P>0.05)。
2.IL-2和IL-6活性 IL-2和IL-6活性在肝癌、胃癌、大肠癌患者体内的变化情况基本一致。均明显低于对照组。但各组癌症患者之间比较无明显差异(P>0.05)。见表2。
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表1 肝癌、胃癌、大肠癌患者T淋巴细胞丝裂原反应(
±SD)
n
cpm
SI
Control(对照)
38
23904.28±3039.18
97.34±14.76
Hepatocarcinoma(肝癌)
20
, http://www.100md.com 14431.16±2060.09*
45.98±14.18*
Carcinoma of stomach(胃癌)
38
15481.31±3789.64*
50.01±17.88*
Intestinal of cancer(肠癌)
27
14861.28±4501.31*
, http://www.100md.com 44.89±14.40*
注：*P<0.01，与对照组比较表2 肝癌、胃癌、大肠癌患者血浆IL-2、IL-6活性(±SD)
n
IL-2(cpm)
IL-6(OD)
Control(对照)
38
3514.95±602.22
1.03±0.29
Hepatocarcinoma(肝癌)
, 百拇医药
20
2259.13±948.62*
0.66±0.28**
Carcinoma of stomach(胃癌)
38
2481.92±779.89*
0.60±0.11*
Intestinal of cancer(肠癌)
27
2258.26±789.99*
, http://www.100md.com
0.65±0.13*
注：*P<0.05，**P<0.01，与对照组比较 3.癌症患者血浆IL-2R的表达 表3显示，肝癌、胃癌、大肠癌患者IL-2R的表达均明显高于对照组。而各组癌症之间的比较差异不显著(P>0.05)。
表3 肝癌患者血浆IL-2R活性的变化(±SD)
n
IL-2R
Control(对照)
38
314.01±125.73
, http://www.100md.com
Hepatocarcinoma(肝癌)
20
634.80±336.01*
Carcinoma of stomach(胃癌)
38
688.98±361.67**
Intestinal of cancer(肠癌)
27
650.27±190.09**
注：*P<0.05，**P<0.01，与对照组比较讨 论
, 百拇医药
T淋巴细胞在受抗原或有丝分裂原刺激后发生的反应，代表T细胞的增殖功能；IL-2、IL-6是成熟T细胞释放的淋巴因子，是活性T细胞的一种标志，同时代表T细胞的分泌功能。已有资料证明，IL-2、IL-6在人体细胞因子免疫调节网络中具有正向调节作用，但大多数肿瘤病人免疫功能低下。已有报道〔5〕，恶性实体瘤患者外周血IL-2活性比健康人明显降低。本实验结果表明，肝癌、胃癌、大肠癌患者PHA诱导的外周血丝裂原反应和血浆IL-2、IL-6活性均明显低于对照组，但各组癌症患者之间比较无明显差异。提示肝癌、胃癌、大肠癌患者T淋巴细胞增殖功能和分泌功能均明显降低，且这种T细胞功能降低与肿瘤的部位无关。同时也表明癌症患者的细胞因子免疫调节网络可能存在明显的缺陷或紊乱。其原因目前尚不十分清楚，很可能是多种因素相互影响的结果。王江滨等〔6〕认为肿瘤患者IL-2等细胞因子水平下降，可能与肿瘤组织或抑制性T细胞、巨噬细胞释放抑制因子有关。
sIL-2R是细胞膜裂解、释放到胞外的IL-2R，能与IL-2结合并抑制IL-2活性，负性调节含量甚微。本文结果表明肝癌、胃癌、大肠癌患者血浆sIL-2R均明显增高，且与癌症的部位无关。迄今尚无证据表明，实体瘤可直接产生sIL-2R，其增高很可能是癌细胞诱发免疫反应的结果，这表明体内淋巴细胞处于活化状态〔7〕。各组癌症患者血浆sIL-2增高的意义可能在于升高的sIL-2R与IL-2结合，使IL-2R廓清加速，活性T细胞静息下来，恢复成休止期细胞；大量的sIL-2R从膜上脱落，使活化的T细胞处于衰竭状态；高水平sIL-2R可抑制淋巴细胞浸润肿瘤组织并作为一种封闭因子而与MIL-2R竞争结合周围的IL-2，抑制T细胞单克隆增殖；sIL-2R水平增高常伴CD4/CD8比值降低和NK细胞活性降低。导致机体免疫功能严重降低，使肿瘤逃避宿主免疫反应。
, 百拇医药
因此，外周血T细胞功能和血浆sIL-2R的表达，可反映癌症患者的免疫监视功能。若能合理应用IL-2和IL-6等生物反应调节剂来改善病人的细胞免疫状态，可能会取得较好的抗肿瘤效果。
注：本课题受吉林科学技术委员会资助项目
参 考 文 献
1Rovelli F, Lissoni P, Barni S, et al. Increased level of soluble IL-2 receptor in advaced solid tumors: a preliminary study. Tumori, 1988, 74:633-639.
2夏风琴，免疫学实验技术. 龚手良主编：实用基础医学实验技术. 吉林科学技术出版社,1990，170-208.
, 百拇医药 3张东吉，IL-2的诱生与检测. 杨贵贞主编：免疫生物工程纲要与技术. 吉林科学技术出版社，1993，28-51.
4吴勇，IL-6的诱生与检测. 杨贵贞主编：免疫生物工程纲要与技术. 吉林科学技术出版社,1993，143-144.
5Ret A, Klein B, Zagury D, et al. Diminished interleukin-2 activity production in cancer patients bearing solid tumors and its relationship with natural kiler cells. Immunol Lett, 1983; 6(3):(1)(7)(5).
6王江滨，谭岩，叶维法. 肝癌患者外周血IAK细胞活性测定及其影响因素的研究. 临床肝胆病杂志，1990，6(4)：183.
, 百拇医药
7Rubin L, Kurman CC, Fritz ME, et al. Soluble IL-2 receptors are released from activated human lymphoid cells in vitro. J Immunol, 1985, 135:3172.
8Diamantstein T, Osawa H, Mouzaki A, et al. Regulation of interleukin-2 receptor expression and receptor release. Mol Immunol, 1986, 23:1165.
9富宁，白细胞介素2受体. 杨贵贞主编：免疫生物工程纲要与技术. 吉林科学技术出版社,1993：52-69.
(收稿：1997-11-08；修回：1998-01-19), 百拇医药
单位：130011 长春，第一汽车集团公司肝胆外科研究所(孟庆润、张军、杨帆)；白求恩医科大学病理生理教研室(刘睿智、刘喜春、李璐、赵雪俭)
关键词：癌；白细胞介素-2；白细胞介素-6；可溶性白细胞介素-2受体
中华肝胆外科杂志/980310.htm 【摘要】 目的 探讨肝癌、胃癌、大肠癌发病机理。方法 应用生物测定法检测肝癌、胃癌、大肠癌外周血T淋巴细胞丝裂原反应性和血浆白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-6(IL-6)活性及可溶性白细胞介素-2受体(IL-2R)的表达。结果 肝癌、胃癌、大肠癌患者T淋巴细胞丝裂原反应性和血浆IL-2、IL-6活性均显著低于对照组，而IL-2R表达却均显著高于对照组。结论 肝癌、胃癌、大肠癌患者外周血T淋巴细胞功能被严重抑制，IL-2、IL-6和IL-2R可能在该病的发病机制中起一定作用。
, http://www.100md.com
The mitogenesis of lymphocytes in peripheral blood and activity of interleukin-2(IL-2), interleukin-6(IL-6), and interleukin-2 receptor (IL-2R) in plasma of patients with liver, stomach, intestinal cancer. Meng Qingrun, Zhang Jun, Yang Fan. Institute of Hepatobiliaty Surgery. FAW Group Corp. Changchun 130011
【Abstract】 Objective To explore the etiopathology of liver, stomach, and intestinal cancer. Methods The mitogenesis of lympocytes in peripheral blood and interleukin-2(IL-2), interleukin-6(IL-6) activity and experssion of interleukin-2 receptors(IL-2R) in plasma of patients with liver, stomach and intestinal cancer were determined using bioassay technique. Results The mitogenesis of T lymphocytes and activity of IL-2, IL-6 in patients with liver, stomach and intestinal cancer were markedly decreased in comparison with controls and expression of IL-2R increased significantly. Conclusion These results suggest that IL-2, IL-6 and IL-2R play a role in pathogenesis of liver, stomach and intlestinal cancer and may be used as useful laboratory parameters for judgment of patient’s condition.
, 百拇医药
【Key words】 Cancer IL-2 IL-6 Soluble IL-2R
肿瘤的发生和发展是极为复杂的过程，对其机制的探讨是当今免疫学研究最活跃的领域之一。近年来，免疫监视功能低下和细胞因子网络及其受体间调节失控在本病发病学中的作用已引起重视〔1〕。因而，本文研究肝癌、胃癌、大肠癌患者外周血T淋巴细胞丝裂原反应性和血浆IL-2、IL-6活性及IL-2受体的表达，可望进一步阐明癌症患者可能存在的免疫功能异常，为其免疫调整治疗提供依据。
材料与方法
1.研究对象 标本均来自中晚期肿瘤患者，肝癌20例(男12例，女8例)，平均年龄62.05±8.33岁；胃癌38例(男28例，女10例)，平均年龄58.03±9.02岁；大肠癌27例(男18例，女9例)，平均年龄50.11±12.80岁。对肿瘤的诊断及分期均参照《中国常见恶性肿瘤诊治规范》中有关标准确定。另取正常成人血作为对照。对照组38例(男25例，女13例)，平均年龄55.34±10.75及性别构成比与研究对象无显著性差异(P>0.05)。
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2.主要试剂 IMDM培养基为美国Gibco公司产品；小牛血清(FCS)由大连生物制品研究所提供；PHA为上海医学化验所产品；3H-TdR购自中国科学院上海原子能研究所；MH60.BSF2细胞株由白求恩医科大学免疫教研室惠赠。
3.主要方法
(1)采静脉血5 ml，肝素抗凝，无菌分离血浆，-30℃冷冻保存，待检测。
(2)外周血T细胞丝裂原反应性测定 采用微量全血培养法〔2〕测定。每份样品3复孔，淋巴细胞增殖反映性用cpm/30 μl全血表示，同时计算淋巴细胞转化刺激指数(Stimulation Index SI)。
(3)IL-2活性测定 采用淋巴母细胞化法〔3〕测定。每份样品3复孔，结果以每分钟脉冲数(cpm)表示。
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(4)IL-6活性测定 采用IL-6依赖细胞增殖反应法〔4〕测定。设3复孔，并设培养液对照。结果以OD值表示。
(5)IL-2受体的测定 试剂盒购自白求恩医科大学免疫教研室。按试剂盒提供的方法测定。
(6)资料统计分析 实验数据均以平均值±标准差表示。均数的组间比较应用Student检验。
结 果
1.外周血T淋巴细胞丝裂原反应性 表1结果显示，肝癌、胃癌、大肠癌患者T细胞丝裂原反应性无论用cpm/30 μl全血表示还是用SI表示均明显低于对照组。但各组癌症患者之间比较无明显差异(P>0.05)。
2.IL-2和IL-6活性 IL-2和IL-6活性在肝癌、胃癌、大肠癌患者体内的变化情况基本一致。均明显低于对照组。但各组癌症患者之间比较无明显差异(P>0.05)。见表2。
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表1 肝癌、胃癌、大肠癌患者T淋巴细胞丝裂原反应(
±SD)n
cpm
SI
Control(对照)
38
23904.28±3039.18
97.34±14.76
Hepatocarcinoma(肝癌)
20
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45.98±14.18*
Carcinoma of stomach(胃癌)
38
15481.31±3789.64*
50.01±17.88*
Intestinal of cancer(肠癌)
27
14861.28±4501.31*
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注：*P<0.01，与对照组比较表2 肝癌、胃癌、大肠癌患者血浆IL-2、IL-6活性(
±SD)n
IL-2(cpm)
IL-6(OD)
Control(对照)
38
3514.95±602.22
1.03±0.29
Hepatocarcinoma(肝癌)
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20
2259.13±948.62*
0.66±0.28**
Carcinoma of stomach(胃癌)
38
2481.92±779.89*
0.60±0.11*
Intestinal of cancer(肠癌)
27
2258.26±789.99*
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0.65±0.13*
注：*P<0.05，**P<0.01，与对照组比较 3.癌症患者血浆IL-2R的表达 表3显示，肝癌、胃癌、大肠癌患者IL-2R的表达均明显高于对照组。而各组癌症之间的比较差异不显著(P>0.05)。
表3 肝癌患者血浆IL-2R活性的变化(
±SD)n
IL-2R
Control(对照)
38
314.01±125.73
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Hepatocarcinoma(肝癌)
20
634.80±336.01*
Carcinoma of stomach(胃癌)
38
688.98±361.67**
Intestinal of cancer(肠癌)
27
650.27±190.09**
注：*P<0.05，**P<0.01，与对照组比较讨 论
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T淋巴细胞在受抗原或有丝分裂原刺激后发生的反应，代表T细胞的增殖功能；IL-2、IL-6是成熟T细胞释放的淋巴因子，是活性T细胞的一种标志，同时代表T细胞的分泌功能。已有资料证明，IL-2、IL-6在人体细胞因子免疫调节网络中具有正向调节作用，但大多数肿瘤病人免疫功能低下。已有报道〔5〕，恶性实体瘤患者外周血IL-2活性比健康人明显降低。本实验结果表明，肝癌、胃癌、大肠癌患者PHA诱导的外周血丝裂原反应和血浆IL-2、IL-6活性均明显低于对照组，但各组癌症患者之间比较无明显差异。提示肝癌、胃癌、大肠癌患者T淋巴细胞增殖功能和分泌功能均明显降低，且这种T细胞功能降低与肿瘤的部位无关。同时也表明癌症患者的细胞因子免疫调节网络可能存在明显的缺陷或紊乱。其原因目前尚不十分清楚，很可能是多种因素相互影响的结果。王江滨等〔6〕认为肿瘤患者IL-2等细胞因子水平下降，可能与肿瘤组织或抑制性T细胞、巨噬细胞释放抑制因子有关。
sIL-2R是细胞膜裂解、释放到胞外的IL-2R，能与IL-2结合并抑制IL-2活性，负性调节含量甚微。本文结果表明肝癌、胃癌、大肠癌患者血浆sIL-2R均明显增高，且与癌症的部位无关。迄今尚无证据表明，实体瘤可直接产生sIL-2R，其增高很可能是癌细胞诱发免疫反应的结果，这表明体内淋巴细胞处于活化状态〔7〕。各组癌症患者血浆sIL-2增高的意义可能在于升高的sIL-2R与IL-2结合，使IL-2R廓清加速，活性T细胞静息下来，恢复成休止期细胞；大量的sIL-2R从膜上脱落，使活化的T细胞处于衰竭状态；高水平sIL-2R可抑制淋巴细胞浸润肿瘤组织并作为一种封闭因子而与MIL-2R竞争结合周围的IL-2，抑制T细胞单克隆增殖；sIL-2R水平增高常伴CD4/CD8比值降低和NK细胞活性降低。导致机体免疫功能严重降低，使肿瘤逃避宿主免疫反应。
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因此，外周血T细胞功能和血浆sIL-2R的表达，可反映癌症患者的免疫监视功能。若能合理应用IL-2和IL-6等生物反应调节剂来改善病人的细胞免疫状态，可能会取得较好的抗肿瘤效果。
注：本课题受吉林科学技术委员会资助项目
参 考 文 献
1Rovelli F, Lissoni P, Barni S, et al. Increased level of soluble IL-2 receptor in advaced solid tumors: a preliminary study. Tumori, 1988, 74:633-639.
2夏风琴，免疫学实验技术. 龚手良主编：实用基础医学实验技术. 吉林科学技术出版社,1990，170-208.
, 百拇医药 3张东吉，IL-2的诱生与检测. 杨贵贞主编：免疫生物工程纲要与技术. 吉林科学技术出版社，1993，28-51.
4吴勇，IL-6的诱生与检测. 杨贵贞主编：免疫生物工程纲要与技术. 吉林科学技术出版社,1993，143-144.
5Ret A, Klein B, Zagury D, et al. Diminished interleukin-2 activity production in cancer patients bearing solid tumors and its relationship with natural kiler cells. Immunol Lett, 1983; 6(3):(1)(7)(5).
6王江滨，谭岩，叶维法. 肝癌患者外周血IAK细胞活性测定及其影响因素的研究. 临床肝胆病杂志，1990，6(4)：183.
, 百拇医药
7Rubin L, Kurman CC, Fritz ME, et al. Soluble IL-2 receptors are released from activated human lymphoid cells in vitro. J Immunol, 1985, 135:3172.
8Diamantstein T, Osawa H, Mouzaki A, et al. Regulation of interleukin-2 receptor expression and receptor release. Mol Immunol, 1986, 23:1165.
9富宁，白细胞介素2受体. 杨贵贞主编：免疫生物工程纲要与技术. 吉林科学技术出版社,1993：52-69.
(收稿：1997-11-08；修回：1998-01-19), 百拇医药