环孢菌素A体外对再生障碍性贫血患者造血祖细胞的作用
作者：张钧 杨颖 贾志凌 巩伟丽 陈书长
单位：张钧 杨颖(北京市第六医院 100007)；贾志凌 巩伟丽(北京军区陆军总医院 100700)；陈书长(北京协和医院 100050)
关键词：
首都医药000640 近年来国内外相继报告了临床应用环胞菌素A对再生障碍性贫血(AA)有较好疗效，为研究CsA的剂量与治疗作用的关系，我们观察了CsA体外对18例AA患者造血祖细胞的作用。
1 材料与方法
1.1 骨髓来源：18例AA均符合《血液病诊断及疗效标准》，其中重症AA(SAA)6例，普通型AA(CAA)12例，所有病人实验前均未接受过免疫抑制剂、细胞毒性药物及细胞因子的治疗。正常对照10例取自非血液病患者手术中取下的肋骨骨髓。
, http://www.100md.com
1.2 CFU-GM，CFU-E培养方法采用RPMI1640琼脂和McCoy′s5A甲基纤维素半固体平皿法。分别以0，100ng/ml，200ng/ml，400ng/ml，800ng/ml，浓度加入培养体系中，每个浓度同时做三个培养皿，取其平均值。
1.3 环胞菌素A：华北制药厂提供。
1.4 判断CsA效果标准：AA患者骨髓加入CsA前集落增殖数分为2类：1.集落数值为0，2.集落<1/6，正常值(24)，为重度减少；<1/3，正常值(47)为中度减少。
1.5 CsA体外的疗效判断标准：(1)有效：集落数较加入CsA前增加100%以上>正常值1/3(47)；(2)微效：集落数较加入CsA前增加50%以上>正常值1/6(24)；(3)无效：集落数小于微效标准。
1.6 统计方法：采用t检验及配对秩和检验。
, 百拇医药
2 结果
2.1 CsA体外对AA患者CFU-GM，CFU-E增殖数量较对照组明显减低(P<0.01)，说明其造血祖细胞功能明显受到抑制(见表1、表2)。
2.2 CsA体外对照组无明显促增殖作用，在CsA各浓度剂量组其CFU-GM和CFU-E与不加CsA时无明显差异，而CsA体外对AA患者CFU-GM和CFU-E具有明显促增殖作用，这种作用为剂量依赖性，当CsA浓度为100ng/ml-200ng-ml时，CFU-GM和CFU-E增殖较少，在CsA浓度加至400ng-ml-800ng/ml剂量时，其CFU-GM和CFU-E增高更明显(见表3)。
2.3 通过观察SAA和CAA两组患者发现，当浓度为400ng/ml-800ng/ml时，SAA和CAA的CFU-GM和CFU-E的增殖均高于低浓度的CsA(100ng/ml-200ng/ml)。且高浓度CsA对SAA较CAA疗效明显(见表4)。
, 百拇医药
2.4 11例骨髓造血祖细胞增殖为零的病人在CsA低浓度(100ng/ml-200ng/ml)均无效，7例中、重度减少的均有效，说明CsA对于造血组细胞损伤相对比较轻者疗效好。即使增殖为零者，提高CsA浓度至400ng/ml,800ng/ml时，亦可有部分人有效。CFU-GM有效者分别为4/11，8/11。CFU-E有效者分别为4/11，5/11。
表1 CsA体外对AA患者CFU-GM，CFU-E的增殖作用
(不同剂量CsA对CFU-GM，CFU-E增殖数量/2×10(X+S)) 组别
例数
0/ng/ml
100ng/ml
200ng/ml
, 百拇医药
400ng/ml
800ng/ml
10
144.3+53.75
144.3.+48.7
152.70+51.31
151.40+53.34
172.60+63.16
18
11.28+10.92
22.50+30.12
24.33+31.47
, 百拇医药
45.9+39.06
76.83+62.83
对照
10
141.5+48.2
142.4+45.8
146.3+42.69
152.3+48.33
159.3+50.07
AA
18
9.85+12.06
, 百拇医药
27.2+27.70
24.95+30.90
52.16+48.01
77.63+63.83
表2 正常对照与AA患者CFU-GM，CFU-E配对秩和检验结果 组别
例数
CFU-GM
例数
CFU-E
AA
18
M＝18 P＝171
, http://www.100md.com
11
M＝1 T＝190
对照
10
N=10 P=0
10
N=10 P=0
表3 CsA体外对AA患者CFU-GM，CFU-E作用(配对秩和检验) 例数
CsA(ng/ml)
0～100
0～200
0～400
, http://www.100md.com
0～800
CFU-GM
18
T+＝27.5
T+＝27.5
T+＝5
T+＝18.5
T-＝125.5
T-＝125.5
T-＝148
T-＝135.5
, 百拇医药
P<0.002
P<0.002
P<0，0003
P<0.0008
CFU-E
19
T+＝27.5
T+＝27.5
T+＝5
T+＝5
T-＝143.5
T-＝143.5
, http://www.100md.com
T-＝166
T-＝166
P<0.0001
P<0.0001
P<0.0002
P<0.0002
表4 CsA浓度(ng/ml)对患者造血组细胞增殖与疗效的关系(配对秩和检验)
CFU-GM
CFU-E
组别
例数
, 百拇医药
疗效
100
200
400
800
100
200
400
800
SAA
5
有效
1
, 百拇医药 2
4
5
2
2
3
4
微效
1
0
1
0
0
0
, 百拇医药
1
0
合计
2/5
2/5
5/5
5/5
2/5
2/5
4/5
4/5
CAA
13
, 百拇医药 有效
4
5
5
10
3
4
6
6
微效
1
0
1
0
, 百拇医药
2
1
0
1
合计
5/13
5/13
6/13
10/13
5/13
5/13
6/13
7/13
, 百拇医药
3 讨论
AA患者发病过程中有免疫异常。免疫抑制剂ATG，CsA已成为AA治疗的重要手段，临床取得 了明显疗效。但CsA剂量与疗效关系研究较少，而体外CsA对AA患者CFU-GM、CFU-E作用报告亦较少。本实验结果提示CsA体外可促进部分AA患者CFU-GM、CFU-E增殖，与文献报告结果一致。我们还观察到CsA的促增殖作用与剂量有关。剂量增大至400ng/ml或以上对其促增殖作用明显增强，提示临床上应用CsA需达到一定的血液浓度，在可能的范围内，提高剂量可增加疗效。CsA的疗效与其抑制T8及某些对造血祖细胞功能有抑制作用的细胞因子如TNF、IFN的产生有关。此外，CsA的疗效不仅依赖于剂量，还取决于患者造血祖细胞的损伤程度。损伤相对较轻者疗效好，所需CsA剂量亦少，而损害严重者疗效相对较差，产生疗效所需CsA剂量亦明显增大。也提示AA患者应用CsA前其CFU-GM、CFU-E培养结果对临床应用CsA剂量及疗效有重要参考价值。
以上实验结果说明，CsA体外对部分AA患者CFU-GM，、CFU-E有较明显促增殖作用，这种作用随CsA剂量加大而增加，大剂量CsA可能提高AA疗效，值得临床关注。, 百拇医药
单位：张钧 杨颖(北京市第六医院 100007)；贾志凌 巩伟丽(北京军区陆军总医院 100700)；陈书长(北京协和医院 100050)
关键词：
首都医药000640 近年来国内外相继报告了临床应用环胞菌素A对再生障碍性贫血(AA)有较好疗效，为研究CsA的剂量与治疗作用的关系，我们观察了CsA体外对18例AA患者造血祖细胞的作用。
1 材料与方法
1.1 骨髓来源：18例AA均符合《血液病诊断及疗效标准》，其中重症AA(SAA)6例，普通型AA(CAA)12例，所有病人实验前均未接受过免疫抑制剂、细胞毒性药物及细胞因子的治疗。正常对照10例取自非血液病患者手术中取下的肋骨骨髓。
, http://www.100md.com
1.2 CFU-GM，CFU-E培养方法采用RPMI1640琼脂和McCoy′s5A甲基纤维素半固体平皿法。分别以0，100ng/ml，200ng/ml，400ng/ml，800ng/ml，浓度加入培养体系中，每个浓度同时做三个培养皿，取其平均值。
1.3 环胞菌素A：华北制药厂提供。
1.4 判断CsA效果标准：AA患者骨髓加入CsA前集落增殖数分为2类：1.集落数值为0，2.集落<1/6，正常值(24)，为重度减少；<1/3，正常值(47)为中度减少。
1.5 CsA体外的疗效判断标准：(1)有效：集落数较加入CsA前增加100%以上>正常值1/3(47)；(2)微效：集落数较加入CsA前增加50%以上>正常值1/6(24)；(3)无效：集落数小于微效标准。
1.6 统计方法：采用t检验及配对秩和检验。
, 百拇医药
2 结果
2.1 CsA体外对AA患者CFU-GM，CFU-E增殖数量较对照组明显减低(P<0.01)，说明其造血祖细胞功能明显受到抑制(见表1、表2)。
2.2 CsA体外对照组无明显促增殖作用，在CsA各浓度剂量组其CFU-GM和CFU-E与不加CsA时无明显差异，而CsA体外对AA患者CFU-GM和CFU-E具有明显促增殖作用，这种作用为剂量依赖性，当CsA浓度为100ng/ml-200ng-ml时，CFU-GM和CFU-E增殖较少，在CsA浓度加至400ng-ml-800ng/ml剂量时，其CFU-GM和CFU-E增高更明显(见表3)。
2.3 通过观察SAA和CAA两组患者发现，当浓度为400ng/ml-800ng/ml时，SAA和CAA的CFU-GM和CFU-E的增殖均高于低浓度的CsA(100ng/ml-200ng/ml)。且高浓度CsA对SAA较CAA疗效明显(见表4)。
, 百拇医药
2.4 11例骨髓造血祖细胞增殖为零的病人在CsA低浓度(100ng/ml-200ng/ml)均无效，7例中、重度减少的均有效，说明CsA对于造血组细胞损伤相对比较轻者疗效好。即使增殖为零者，提高CsA浓度至400ng/ml,800ng/ml时，亦可有部分人有效。CFU-GM有效者分别为4/11，8/11。CFU-E有效者分别为4/11，5/11。
表1 CsA体外对AA患者CFU-GM，CFU-E的增殖作用
(不同剂量CsA对CFU-GM，CFU-E增殖数量/2×10(X+S)) 组别
例数
0/ng/ml
100ng/ml
200ng/ml
, 百拇医药
400ng/ml
800ng/ml
10
144.3+53.75
144.3.+48.7
152.70+51.31
151.40+53.34
172.60+63.16
18
11.28+10.92
22.50+30.12
24.33+31.47
, 百拇医药
45.9+39.06
76.83+62.83
对照
10
141.5+48.2
142.4+45.8
146.3+42.69
152.3+48.33
159.3+50.07
AA
18
9.85+12.06
, 百拇医药
27.2+27.70
24.95+30.90
52.16+48.01
77.63+63.83
表2 正常对照与AA患者CFU-GM，CFU-E配对秩和检验结果 组别
例数
CFU-GM
例数
CFU-E
AA
18
M＝18 P＝171
, http://www.100md.com
11
M＝1 T＝190
对照
10
N=10 P=0
10
N=10 P=0
表3 CsA体外对AA患者CFU-GM，CFU-E作用(配对秩和检验) 例数
CsA(ng/ml)
0～100
0～200
0～400
, http://www.100md.com
0～800
CFU-GM
18
T+＝27.5
T+＝27.5
T+＝5
T+＝18.5
T-＝125.5
T-＝125.5
T-＝148
T-＝135.5
, 百拇医药
P<0.002
P<0.002
P<0，0003
P<0.0008
CFU-E
19
T+＝27.5
T+＝27.5
T+＝5
T+＝5
T-＝143.5
T-＝143.5
, http://www.100md.com
T-＝166
T-＝166
P<0.0001
P<0.0001
P<0.0002
P<0.0002
表4 CsA浓度(ng/ml)对患者造血组细胞增殖与疗效的关系(配对秩和检验)
CFU-GM
CFU-E
组别
例数
, 百拇医药
疗效
100
200
400
800
100
200
400
800
SAA
5
有效
1
, 百拇医药 2
4
5
2
2
3
4
微效
1
0
1
0
0
0
, 百拇医药
1
0
合计
2/5
2/5
5/5
5/5
2/5
2/5
4/5
4/5
CAA
13
, 百拇医药 有效
4
5
5
10
3
4
6
6
微效
1
0
1
0
, 百拇医药
2
1
0
1
合计
5/13
5/13
6/13
10/13
5/13
5/13
6/13
7/13
, 百拇医药
3 讨论
AA患者发病过程中有免疫异常。免疫抑制剂ATG，CsA已成为AA治疗的重要手段，临床取得 了明显疗效。但CsA剂量与疗效关系研究较少，而体外CsA对AA患者CFU-GM、CFU-E作用报告亦较少。本实验结果提示CsA体外可促进部分AA患者CFU-GM、CFU-E增殖，与文献报告结果一致。我们还观察到CsA的促增殖作用与剂量有关。剂量增大至400ng/ml或以上对其促增殖作用明显增强，提示临床上应用CsA需达到一定的血液浓度，在可能的范围内，提高剂量可增加疗效。CsA的疗效与其抑制T8及某些对造血祖细胞功能有抑制作用的细胞因子如TNF、IFN的产生有关。此外，CsA的疗效不仅依赖于剂量，还取决于患者造血祖细胞的损伤程度。损伤相对较轻者疗效好，所需CsA剂量亦少，而损害严重者疗效相对较差，产生疗效所需CsA剂量亦明显增大。也提示AA患者应用CsA前其CFU-GM、CFU-E培养结果对临床应用CsA剂量及疗效有重要参考价值。
以上实验结果说明，CsA体外对部分AA患者CFU-GM，、CFU-E有较明显促增殖作用，这种作用随CsA剂量加大而增加，大剂量CsA可能提高AA疗效，值得临床关注。, 百拇医药