河豚毒素诱发小鼠骨髓细胞染色体畸变、小鼠骨髓细胞微核及小鼠精子畸变的研究
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山东医科大学学报 2000年第1期第38卷 论著
作者：于丽华 周 力 谢克勤
单位：1山东医科大学毒理学省级重点实验室 2济南长虹医院
关键词：河豚毒素；骨髓细胞；染色体；微核；精子；小鼠
山东医科大学000116摘 要：探讨河豚毒素(TTX)的药用价值，检测其是否有潜在的致突变作用。方法：采用小鼠精子畸变试验、小鼠骨髓细胞微核试验和染色体畸变试验进行观察。结果：河豚毒素未引起小鼠骨髓嗜多染红细胞微核率、小鼠精子畸变率和小鼠骨髓细胞染色体畸变率增加，与阴性对照组比较无显著性差异(P>O.05)，但3项试验的阳性对照组与阴性对照组比较，则有高度显著性差异(P<0.01)。 结论：提示TTX无致突变性。
分类号：R966.3 文献标识码：A
文章编号：1000-0496(2000)01-0048-02
, 百拇医药
STUDY ON CHROMOSOME ABERRATION AND MICRONUCLEUS IN BONE MARROW CELLS OF MICE AND SPERM ABNORMALITY OF MICE INDUCED BY TETRODOTOXIN
YU Li-hua,ZHOU Li,XIE Ke-qin
(Institute of Toxicology, Shandong Medical University)
Abstract：To explore whether Tetrodotoxin has medical values and find out if it has potential mutagenic actions:Methods: Sperm abnormality test, chromosome aberration test of bone marrow cells and micronucleus test of bone marrow polychromalic erythrocytes(PCE) in mice were adopted. Results:There were no significant findings in sperm abnormality rates, chromosome aberration and micronucleas rates in experimental groups compared with those of the negative control group(P>0.05) while the rates in the positive control group showed significant increase(P<0.01). Conclusion: Tetrodotoxin might be regarded as a nonmutagenic agent under present experimental conditions.
, 百拇医药
Keywords：Tetrodotoxin; Bone marrow cells; Chromosomes, Micronuclei; Spermatozoa; Mice 河豚毒素(Tetrodotoxin，TTX)是一种结构为笼形原酸脂类的非蛋白神经毒素。国内自70年代成功的分离提纯TTX以来，对其进行了大量的生理和药理研究，证明TTX有降压、抗心率失常、局麻等作用[1]。为了探讨TTX的药用价值，检测其是否有潜在的致突变作用，我们采用小鼠精子畸变试验、小鼠骨髓细胞微核试验和染色体畸变试验进行了观察。1材料与方法1.1药品河豚毒素为白色结晶固体，由Sigma公司提供，纯度94%。1.2动物昆明种小鼠由山东医科大学实验动物中心提供。1.3小鼠骨髓细胞微核试验选体重20～25g小鼠50只，随机分成5组，每组10只，雌雄各半，3个染毒组分别给予河豚毒素1/2LD50(4ug/kg)，1/4LD50(2ug/kg)，1/8LD50(1ug/kg)，设阴性对照组(生理盐水)和阳性对照组(环磷酰胺40mg/kR)，腹腔注射2次,间隔24h，于第2次染毒后24、48h分二批处死动物[2]，每次25只,取胸骨骨髓细胞，按常规方法固定染色，每鼠计数1000个嗜多染色细胞(PCE)的微核率。同时计数200个PCE中的成熟RBC数。1.4小鼠骨髓细胞染色体畸变试验选8～10周龄的小鼠50只，分成3个TTX染毒组，阴性对照组(生理盐水)和阳性对照组(环磷酰胺)共5组。每组10只，雌雄各半。每组给药剂量、途径和给药次数同微核试验，于第2次给药后24、48h分二次处死动物，处死动物前2h按10mg/kg体重腹腔注射秋水仙素。取股骨骨髓制片，每鼠观察200个分散良好、着色清晰的中期分裂相计数染色体畸变率[3]。1.5小鼠精子畸变试验选体重20～35g昆明种雄性小鼠30只，随机分成5组,每组6只，3个染毒组分别给予TTX1/2LD50，l/4LD50，l/8LD50，阴性对照组给予生理盐水，阳性对照组给予环磷酰胺40mg/kg，每天腹腔注射1次，连续5d，于给药后第30天处死动物，取双侧附睾作涂片镜检，每只小鼠检查1000个完整精子，计算畸变率。2结果2.1小鼠骨髓细胞微核试验见表1。河豚毒素实验组与阴性对照组微核细胞率无明显差异(P>0.05)，阳性对照组与阴性对照组有非常显著性差异(P0.05)，阳性对照组高于阴性对照组(P0.05)，且无剂量-效应关系，与阳性对照组差异非常显著(P0.05)，小鼠精子畸变率和骨髓细胞染色体畸变率，TTX各实验组均无明显增高，与阴性对照组无显著性差异,表明河豚毒素无致突变作用。文献报道，微核试验给药剂量过高可产生细胞毒性，抑制细胞有丝分裂，均能导致阴性结果[2]。我们在小鼠骨髓微核试验中，给予TTX最高剂量为1/2LD50，给药2次，间隔24h，于第2次给药后24、48h分二批取样，这样包括了已知微核出现最高频率的时间,同时还计数200个PCE中RBC数，TTX各剂量组PCE/RBC比值均大于0.1，证明不是TTX剂量过大引起细胞毒性，不是骨髓细胞分裂受抑制、嗜多染红细胞数量减少导致的微核阴性结果。我们的微核试验结果与陈松强上述报道结果不同[4]，是否与动物种属有关还有待于进一步研究。
, 百拇医药
基金项目：山东省卫生厅资助课题
参考文献：
[1]陈冀胜，等.河豚毒素临床应用简介[J].海洋药物，1986，2:31
[2]黄幸纡，陈星若主编.环境化学物致突变致畸致癌试验方法[M].杭州:渐扛科学技术出版社,1984.224
[3]刘毓谷主编.卫生毒理学基础[M].北京人民卫生出版社，1994.220
[4]陈松强，等.河豚毒素诱发中国地鼠骨髓细胞染色体畸变和小鼠骨髓细胞微核及分裂指数的效应[J].海洋药物，1986，2:13
收稿日期：1999-07-01, 百拇医药
单位：1山东医科大学毒理学省级重点实验室 2济南长虹医院
关键词：河豚毒素；骨髓细胞；染色体；微核；精子；小鼠
山东医科大学000116摘 要：探讨河豚毒素(TTX)的药用价值，检测其是否有潜在的致突变作用。方法：采用小鼠精子畸变试验、小鼠骨髓细胞微核试验和染色体畸变试验进行观察。结果：河豚毒素未引起小鼠骨髓嗜多染红细胞微核率、小鼠精子畸变率和小鼠骨髓细胞染色体畸变率增加，与阴性对照组比较无显著性差异(P>O.05)，但3项试验的阳性对照组与阴性对照组比较，则有高度显著性差异(P<0.01)。 结论：提示TTX无致突变性。
分类号：R966.3 文献标识码：A
文章编号：1000-0496(2000)01-0048-02
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STUDY ON CHROMOSOME ABERRATION AND MICRONUCLEUS IN BONE MARROW CELLS OF MICE AND SPERM ABNORMALITY OF MICE INDUCED BY TETRODOTOXIN
YU Li-hua,ZHOU Li,XIE Ke-qin
(Institute of Toxicology, Shandong Medical University)
Abstract：To explore whether Tetrodotoxin has medical values and find out if it has potential mutagenic actions:Methods: Sperm abnormality test, chromosome aberration test of bone marrow cells and micronucleus test of bone marrow polychromalic erythrocytes(PCE) in mice were adopted. Results:There were no significant findings in sperm abnormality rates, chromosome aberration and micronucleas rates in experimental groups compared with those of the negative control group(P>0.05) while the rates in the positive control group showed significant increase(P<0.01). Conclusion: Tetrodotoxin might be regarded as a nonmutagenic agent under present experimental conditions.
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Keywords：Tetrodotoxin; Bone marrow cells; Chromosomes, Micronuclei; Spermatozoa; Mice 河豚毒素(Tetrodotoxin，TTX)是一种结构为笼形原酸脂类的非蛋白神经毒素。国内自70年代成功的分离提纯TTX以来，对其进行了大量的生理和药理研究，证明TTX有降压、抗心率失常、局麻等作用[1]。为了探讨TTX的药用价值，检测其是否有潜在的致突变作用，我们采用小鼠精子畸变试验、小鼠骨髓细胞微核试验和染色体畸变试验进行了观察。1材料与方法1.1药品河豚毒素为白色结晶固体，由Sigma公司提供，纯度94%。1.2动物昆明种小鼠由山东医科大学实验动物中心提供。1.3小鼠骨髓细胞微核试验选体重20～25g小鼠50只，随机分成5组，每组10只，雌雄各半，3个染毒组分别给予河豚毒素1/2LD50(4ug/kg)，1/4LD50(2ug/kg)，1/8LD50(1ug/kg)，设阴性对照组(生理盐水)和阳性对照组(环磷酰胺40mg/kR)，腹腔注射2次,间隔24h，于第2次染毒后24、48h分二批处死动物[2]，每次25只,取胸骨骨髓细胞，按常规方法固定染色，每鼠计数1000个嗜多染色细胞(PCE)的微核率。同时计数200个PCE中的成熟RBC数。1.4小鼠骨髓细胞染色体畸变试验选8～10周龄的小鼠50只，分成3个TTX染毒组，阴性对照组(生理盐水)和阳性对照组(环磷酰胺)共5组。每组10只，雌雄各半。每组给药剂量、途径和给药次数同微核试验，于第2次给药后24、48h分二次处死动物，处死动物前2h按10mg/kg体重腹腔注射秋水仙素。取股骨骨髓制片，每鼠观察200个分散良好、着色清晰的中期分裂相计数染色体畸变率[3]。1.5小鼠精子畸变试验选体重20～35g昆明种雄性小鼠30只，随机分成5组,每组6只，3个染毒组分别给予TTX1/2LD50，l/4LD50，l/8LD50，阴性对照组给予生理盐水，阳性对照组给予环磷酰胺40mg/kg，每天腹腔注射1次，连续5d，于给药后第30天处死动物，取双侧附睾作涂片镜检，每只小鼠检查1000个完整精子，计算畸变率。2结果2.1小鼠骨髓细胞微核试验见表1。河豚毒素实验组与阴性对照组微核细胞率无明显差异(P>0.05)，阳性对照组与阴性对照组有非常显著性差异(P0.05)，阳性对照组高于阴性对照组(P0.05)，且无剂量-效应关系，与阳性对照组差异非常显著(P0.05)，小鼠精子畸变率和骨髓细胞染色体畸变率，TTX各实验组均无明显增高，与阴性对照组无显著性差异,表明河豚毒素无致突变作用。文献报道，微核试验给药剂量过高可产生细胞毒性，抑制细胞有丝分裂，均能导致阴性结果[2]。我们在小鼠骨髓微核试验中，给予TTX最高剂量为1/2LD50，给药2次，间隔24h，于第2次给药后24、48h分二批取样，这样包括了已知微核出现最高频率的时间,同时还计数200个PCE中RBC数，TTX各剂量组PCE/RBC比值均大于0.1，证明不是TTX剂量过大引起细胞毒性，不是骨髓细胞分裂受抑制、嗜多染红细胞数量减少导致的微核阴性结果。我们的微核试验结果与陈松强上述报道结果不同[4]，是否与动物种属有关还有待于进一步研究。
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基金项目：山东省卫生厅资助课题
参考文献：
[1]陈冀胜，等.河豚毒素临床应用简介[J].海洋药物，1986，2:31
[2]黄幸纡，陈星若主编.环境化学物致突变致畸致癌试验方法[M].杭州:渐扛科学技术出版社,1984.224
[3]刘毓谷主编.卫生毒理学基础[M].北京人民卫生出版社，1994.220
[4]陈松强，等.河豚毒素诱发中国地鼠骨髓细胞染色体畸变和小鼠骨髓细胞微核及分裂指数的效应[J].海洋药物，1986，2:13
收稿日期：1999-07-01, 百拇医药