星形细胞瘤中EGFR，PCNA的表达及临床意义
作者：胡守兴 张李 谢李 杨竹林 阳楚雄
单位：胡守兴(湖南医科大学第二附属医院，中国湖南 长沙，410011)；张李(湖南医科大学第二附属医院，中国湖南 长沙，410011)；谢李(湖南医科大学第二附属医院，中国湖南 长沙，410011)；杨竹林(湖南医科大学第二附属医院，中国湖南 长沙，410011)；阳楚雄(湖南医科大学第二附属医院，中国湖南 长沙，410011)
关键词：星形细胞瘤/病理学；受体，表皮生长 因子-尿抑胃素/分析；增殖细胞核抗原/分析
湖南医学000532 [中图分类号] R730.264 [文献标识码] B [文章编号] 1001-9421(2000)05-0374-02
星形胶质细胞瘤是颅内常见肿瘤。文献报道表皮生长因子受体(epidermal gr owth factor receptor,EGFR)与细胞增殖有关[1]。而增殖细胞核抗原(proliferat ing cell nuclear antigen,PCNA)是近年来用以观察细胞增殖活性的一个重要指标[2 ]。作者等采用免疫组化方法对人星形胶质细胞瘤中这两项指标进行检测，以探讨它们的 表达情况、相互关系及其临床意义。现报道如下。
, 百拇医药
1 材料与方法
1.1 一般资料 星形胶质瘤40例，男性28例，女性12例，平均年龄32.5(1.5 ～65)岁，手术前均未做放疗或化疗。病理组织学类型包括星形细胞瘤 Ⅰ 级13例、Ⅱ级10 例、Ⅲ 级9例和Ⅳ级8例。5例正常脑组织标本取自非神经系统疾病死亡的尸检病例。以上组 织标本均经10%福尔马林液固定，常规石蜡包埋、切片，厚4 μm。
1.2 方法 采用常规ABC免疫组化染色法。主要试剂包括鼠抗人EGFR、PCNA 单克隆抗体，生物素标记羊抗鼠 lgG 和 ABC 试剂，以上试剂均购自 Dako 公司，HCl-DAB 为Sigma 公司产品。阴性对照用0.01 M PBS (pH 7.4)代替一抗，阳性对照用已知阳性染色 的胆管癌组织。
1.3 结果判断标准 细胞浆和(或)细胞核内出现棕黄色或棕褐色颗粒者为 阳性细胞，当切片中EGFR阳性细胞≥20%为阳性表达病例，<20%为阴性表达病例。PCNA评分 ：切片中阳性细胞率0%～25%计1分，26%～50%计2分，51%～75%计3分，>75%计4分。
, 百拇医药
1.4 统计学处理 采用χ2检测。
2 结果
2.1 星形胶质细胞瘤中EGFR的表达 正常脑组织中未见阳性表达。部分星形 胶质瘤组织中有阳性表达(阳性率为47.5%)，且随星形胶质瘤恶性程度的增高EGFR阳性率也 增高，其阳性率与肿瘤分级相关(P<0.05)。见表1。
表1 EGFR在星形细胞胶质瘤的表达及其阳性率 病理类型
例数
EGFR
+
-
阳性率(%)
, 百拇医药
Ⅰ级
13
2
11
15.4
Ⅱ级
10
4
6
40.0
Ⅲ级
9
6
3
, http://www.100md.com
66.7
Ⅳ级
8
7
1
87.5
2.2 星形胶质细胞瘤中PCNA的表达 PCNA阳性物质定位于细胞核中，而胞 浆和胞膜均为阳性。正常脑组织切片中PCNA阳性细胞率低(<1%) ，而星形胶质瘤组织切片中较高，且随星形胶质瘤恶性程度的增加PCNA计分增高，在各级间 PCNA的表达有显著差异(P<0.05)。详见表2。
表2 PCNA在星形胶质瘤中的表达及其评分 病理类型
例数
, 百拇医药
PCNA评分
1分
2分
3分
4分
Ⅰ级
13
11
0
2
0
Ⅱ级
10
1
, 百拇医药
6
3
0
Ⅲ级
9
0
0
4
5
Ⅳ级
8
0
0
1
, 百拇医药
7
2.3 星形胶质细胞中PCNA与EGFR表达的关系 EGFR的表达状况与PCNA的评 分无显著相关性(P>0.05)。
3 讨论
PCNA是细胞周期所必需的物质，又称周期蛋白，是一种分子量为36 KD 的酸性核蛋白，它可与DNA聚合酶结合而催化前导链的合成，此为DNA复制所必须的 [ 3]。研究表明，在某些非增殖组织如成人中枢及外周神经组织中基本测不到PCNA，而在 包括肿瘤在内的增殖组织中，PCNA的免疫活性很高，且PCNA的免疫活性与肿瘤的组织学分级 有关[4]。本研究表明，PCNA在正常脑组织中基本无表达，而在星形胶质瘤中阳 性率较高，且与星形胶质瘤的分级显著相关，与某些学者的研究结果一致[5]。
EGFR是原癌基因C-erbB-2表达产物的类似物，分子量为170 KD。EGFR与表皮生长因子(EGF )结合后，可将EGF送至细胞核而启动特异基因的表达，或通过EGFR构象发生改变，引起质膜 或胞内酪氨酸残基特异蛋白激酶从失活转变为活性形式，从而具有对酪氨酸残基进行特异磷 酸化的功能，继而触发细胞的有丝分裂。研究表明，多种肿瘤均有EGFR的过度表达，其发生 机制可能与某些原癌基因突变及抑癌基因缺失有关[6]。本组40例星形胶质瘤中EGF R阳性率为47.5%，且与星形胶质瘤分级显著相关(P<0.05)，而正常脑组织中无EGFR的表 达。表明EGFR对判断星形胶质瘤恶性程度有一定指导意义。由于EGFR在肿瘤组织中的高表达 ，可为肿瘤的治疗提供一些新线索，近年来发现一种酪氨酶酶抑制剂-Tyrtphosfin 能抑 制EGFR的酪氨酸激酶的活性，可明显抑制胶质瘤细胞的生长[7]。Pirak 等抗EGFR 的单抗与抗癌药物阿霉素相联，治疗接种了人上皮癌细胞系细胞(该细胞表达较多量的EGFR) 的裸鼠。结果发现单抗药物具有特异的肿瘤杀伤效应，其作用明显高于单独作用单抗或阿霉 素[8]。Kalofones 采用131I标记抗EGFR对7例复发胶质瘤进行治疗， 其中 4例病人病情有明显改善[9]。通过对EGFR等进一步研究，为治疗肿瘤提供了新途径 ，有助于人们治愈肿瘤。
, 百拇医药
国外学者曾提出，虽然EGFR与肿瘤的增殖有关，但在多种肿瘤组织中的表达与反映肿瘤增殖 活性指标PCNA的表达并不一致[10]。本结果提示在星形胶质瘤组织中也存在这种不 一致性，说明EGFR的促细胞有丝分裂过程中，还有其他基因及其产物的作用触发和促进肿瘤 组织的增殖。因此，EGFR和PCNA的免疫组化检测有利于判断星形胶质瘤的发生发展、恶性程 度及增殖性，而且为临床上对该肿瘤的诊断、鉴别诊断、恶性程度的判断、治疗及预后评估 提供了有用的参考指标。
[作者简介] 胡守兴(1940-)，男，湖南 长沙人，教授，硕士导师，主要从事颅内肿瘤等神经外科临床及基础研究。
[参 考 文 献]
[1] 刘旭文.人脑胶质瘤表皮生长因子受体的研究(综述)[J].国外医学*神经外科分册，1995，22：296.
, http://www.100md.com [2] Ramael M,Jacobs W,Weylar J.Proliferation immunoreactivity malignant mesothelioma as determined by mitosis counts and immunoreactivity for proliferating cell nuclear antigen(PCNA)[J].J Pathol,1994,172:247-253.
[3] Yu CCW,Wodds AL,Levision DA.The assessment of cellular proliferati on by immunohistochemistry:a review if currently available methods and their app lication[J].Histochemical Journal,1992,24:121.
[4] Hall PA,Levison DA,Woods AL,et al.Proliferating cell unclear a ntigen(PCNA) immunolocalization in paraffin of clergulated expression in some ne oplasms[J].J Pathol,1990,162:285-294.
, http://www.100md.com
[5] 徐燕杰，王政民，张五芝.增殖细胞核抗原在星形细胞瘤中的表达[J].[ HTK 中华神经外科杂志，1994，10：216.
[6] 陈诗书，汤雪明.医学细胞与分子生物学[M].上海：上 海医科大学出版社，1995.
[7] Miyafi K,Tani E,Ehindo H,et al.Effect of tyrophostin on c ell growth and tyrosine kynase activity of epidernal growth factor receptor in h uman gliomas[J].J Neurosurgery,1994,81:411-419.
[8] Pirad EA,Hurwitz E,Bellot F,et al.Inhibition of human tumor gr owth in nude mice by a conjugate doxorubicin with monoclonal antibodies to epide rmal growth factor receptor[J].PNAS,1989,86:3778-3781.
, 百拇医药
[9] Kalofonos H,Pawlikowska TRB,Snook DE,et al.Radiolabelled monoc lonal antibodies for localization and therapy of brain gliomas[J].Br J Cance r,1989,59:318.
[10] Veno s,Miyagawa T,Kafi R,et al.Immunohistochemical investigat ion of epidermal growth factor receptor expression in ameloblastomas[J].J Pa thol,1994,173:33-38.
[收稿日期] 1999-02-03, http://www.100md.com
单位：胡守兴(湖南医科大学第二附属医院，中国湖南 长沙，410011)；张李(湖南医科大学第二附属医院，中国湖南 长沙，410011)；谢李(湖南医科大学第二附属医院，中国湖南 长沙，410011)；杨竹林(湖南医科大学第二附属医院，中国湖南 长沙，410011)；阳楚雄(湖南医科大学第二附属医院，中国湖南 长沙，410011)
关键词：星形细胞瘤/病理学；受体，表皮生长 因子-尿抑胃素/分析；增殖细胞核抗原/分析
湖南医学000532 [中图分类号] R730.264 [文献标识码] B [文章编号] 1001-9421(2000)05-0374-02
星形胶质细胞瘤是颅内常见肿瘤。文献报道表皮生长因子受体(epidermal gr owth factor receptor,EGFR)与细胞增殖有关[1]。而增殖细胞核抗原(proliferat ing cell nuclear antigen,PCNA)是近年来用以观察细胞增殖活性的一个重要指标[2 ]。作者等采用免疫组化方法对人星形胶质细胞瘤中这两项指标进行检测，以探讨它们的 表达情况、相互关系及其临床意义。现报道如下。
, 百拇医药
1 材料与方法
1.1 一般资料 星形胶质瘤40例，男性28例，女性12例，平均年龄32.5(1.5 ～65)岁，手术前均未做放疗或化疗。病理组织学类型包括星形细胞瘤 Ⅰ 级13例、Ⅱ级10 例、Ⅲ 级9例和Ⅳ级8例。5例正常脑组织标本取自非神经系统疾病死亡的尸检病例。以上组 织标本均经10%福尔马林液固定，常规石蜡包埋、切片，厚4 μm。
1.2 方法 采用常规ABC免疫组化染色法。主要试剂包括鼠抗人EGFR、PCNA 单克隆抗体，生物素标记羊抗鼠 lgG 和 ABC 试剂，以上试剂均购自 Dako 公司，HCl-DAB 为Sigma 公司产品。阴性对照用0.01 M PBS (pH 7.4)代替一抗，阳性对照用已知阳性染色 的胆管癌组织。
1.3 结果判断标准 细胞浆和(或)细胞核内出现棕黄色或棕褐色颗粒者为 阳性细胞，当切片中EGFR阳性细胞≥20%为阳性表达病例，<20%为阴性表达病例。PCNA评分 ：切片中阳性细胞率0%～25%计1分，26%～50%计2分，51%～75%计3分，>75%计4分。
, 百拇医药
1.4 统计学处理 采用χ2检测。
2 结果
2.1 星形胶质细胞瘤中EGFR的表达 正常脑组织中未见阳性表达。部分星形 胶质瘤组织中有阳性表达(阳性率为47.5%)，且随星形胶质瘤恶性程度的增高EGFR阳性率也 增高，其阳性率与肿瘤分级相关(P<0.05)。见表1。
表1 EGFR在星形细胞胶质瘤的表达及其阳性率 病理类型
例数
EGFR
+
-
阳性率(%)
, 百拇医药
Ⅰ级
13
2
11
15.4
Ⅱ级
10
4
6
40.0
Ⅲ级
9
6
3
, http://www.100md.com
66.7
Ⅳ级
8
7
1
87.5
2.2 星形胶质细胞瘤中PCNA的表达 PCNA阳性物质定位于细胞核中，而胞 浆和胞膜均为阳性。正常脑组织切片中PCNA阳性细胞率低(<1%) ，而星形胶质瘤组织切片中较高，且随星形胶质瘤恶性程度的增加PCNA计分增高，在各级间 PCNA的表达有显著差异(P<0.05)。详见表2。
表2 PCNA在星形胶质瘤中的表达及其评分 病理类型
例数
, 百拇医药
PCNA评分
1分
2分
3分
4分
Ⅰ级
13
11
0
2
0
Ⅱ级
10
1
, 百拇医药
6
3
0
Ⅲ级
9
0
0
4
5
Ⅳ级
8
0
0
1
, 百拇医药
7
2.3 星形胶质细胞中PCNA与EGFR表达的关系 EGFR的表达状况与PCNA的评 分无显著相关性(P>0.05)。
3 讨论
PCNA是细胞周期所必需的物质，又称周期蛋白，是一种分子量为36 KD 的酸性核蛋白，它可与DNA聚合酶结合而催化前导链的合成，此为DNA复制所必须的 [ 3]。研究表明，在某些非增殖组织如成人中枢及外周神经组织中基本测不到PCNA，而在 包括肿瘤在内的增殖组织中，PCNA的免疫活性很高，且PCNA的免疫活性与肿瘤的组织学分级 有关[4]。本研究表明，PCNA在正常脑组织中基本无表达，而在星形胶质瘤中阳 性率较高，且与星形胶质瘤的分级显著相关，与某些学者的研究结果一致[5]。
EGFR是原癌基因C-erbB-2表达产物的类似物，分子量为170 KD。EGFR与表皮生长因子(EGF )结合后，可将EGF送至细胞核而启动特异基因的表达，或通过EGFR构象发生改变，引起质膜 或胞内酪氨酸残基特异蛋白激酶从失活转变为活性形式，从而具有对酪氨酸残基进行特异磷 酸化的功能，继而触发细胞的有丝分裂。研究表明，多种肿瘤均有EGFR的过度表达，其发生 机制可能与某些原癌基因突变及抑癌基因缺失有关[6]。本组40例星形胶质瘤中EGF R阳性率为47.5%，且与星形胶质瘤分级显著相关(P<0.05)，而正常脑组织中无EGFR的表 达。表明EGFR对判断星形胶质瘤恶性程度有一定指导意义。由于EGFR在肿瘤组织中的高表达 ，可为肿瘤的治疗提供一些新线索，近年来发现一种酪氨酶酶抑制剂-Tyrtphosfin 能抑 制EGFR的酪氨酸激酶的活性，可明显抑制胶质瘤细胞的生长[7]。Pirak 等抗EGFR 的单抗与抗癌药物阿霉素相联，治疗接种了人上皮癌细胞系细胞(该细胞表达较多量的EGFR) 的裸鼠。结果发现单抗药物具有特异的肿瘤杀伤效应，其作用明显高于单独作用单抗或阿霉 素[8]。Kalofones 采用131I标记抗EGFR对7例复发胶质瘤进行治疗， 其中 4例病人病情有明显改善[9]。通过对EGFR等进一步研究，为治疗肿瘤提供了新途径 ，有助于人们治愈肿瘤。
, 百拇医药
国外学者曾提出，虽然EGFR与肿瘤的增殖有关，但在多种肿瘤组织中的表达与反映肿瘤增殖 活性指标PCNA的表达并不一致[10]。本结果提示在星形胶质瘤组织中也存在这种不 一致性，说明EGFR的促细胞有丝分裂过程中，还有其他基因及其产物的作用触发和促进肿瘤 组织的增殖。因此，EGFR和PCNA的免疫组化检测有利于判断星形胶质瘤的发生发展、恶性程 度及增殖性，而且为临床上对该肿瘤的诊断、鉴别诊断、恶性程度的判断、治疗及预后评估 提供了有用的参考指标。
[作者简介] 胡守兴(1940-)，男，湖南 长沙人，教授，硕士导师，主要从事颅内肿瘤等神经外科临床及基础研究。
[参 考 文 献]
[1] 刘旭文.人脑胶质瘤表皮生长因子受体的研究(综述)[J].国外医学*神经外科分册，1995，22：296.
, http://www.100md.com [2] Ramael M,Jacobs W,Weylar J.Proliferation immunoreactivity malignant mesothelioma as determined by mitosis counts and immunoreactivity for proliferating cell nuclear antigen(PCNA)[J].J Pathol,1994,172:247-253.
[3] Yu CCW,Wodds AL,Levision DA.The assessment of cellular proliferati on by immunohistochemistry:a review if currently available methods and their app lication[J].Histochemical Journal,1992,24:121.
[4] Hall PA,Levison DA,Woods AL,et al.Proliferating cell unclear a ntigen(PCNA) immunolocalization in paraffin of clergulated expression in some ne oplasms[J].J Pathol,1990,162:285-294.
, http://www.100md.com
[5] 徐燕杰，王政民，张五芝.增殖细胞核抗原在星形细胞瘤中的表达[J].[ HTK 中华神经外科杂志，1994，10：216.
[6] 陈诗书，汤雪明.医学细胞与分子生物学[M].上海：上 海医科大学出版社，1995.
[7] Miyafi K,Tani E,Ehindo H,et al.Effect of tyrophostin on c ell growth and tyrosine kynase activity of epidernal growth factor receptor in h uman gliomas[J].J Neurosurgery,1994,81:411-419.
[8] Pirad EA,Hurwitz E,Bellot F,et al.Inhibition of human tumor gr owth in nude mice by a conjugate doxorubicin with monoclonal antibodies to epide rmal growth factor receptor[J].PNAS,1989,86:3778-3781.
, 百拇医药
[9] Kalofonos H,Pawlikowska TRB,Snook DE,et al.Radiolabelled monoc lonal antibodies for localization and therapy of brain gliomas[J].Br J Cance r,1989,59:318.
[10] Veno s,Miyagawa T,Kafi R,et al.Immunohistochemical investigat ion of epidermal growth factor receptor expression in ameloblastomas[J].J Pa thol,1994,173:33-38.
[收稿日期] 1999-02-03, http://www.100md.com