新城疫病毒对人胃癌细胞的抑制杀伤作用
作者：李小军 尹致良 田伏洲 赵铁军
单位：李小军 尹致良 田伏洲 赵铁军(成都市成都军区总医院全军普外中心 610083)
关键词：新城疫病毒；胃肿瘤
肿瘤防治杂志000109 【摘要】 目的：研究新城疫病毒(NDV)对人胃癌细胞株的作用。方法：利用MTT方法检测NDV对人胃癌细胞株的杀伤性。结果：NDV作用后的人胃癌细胞株的细胞活性比对照的细胞活性有显著下降(P<0.01)，且NDV血凝效价值显著升高，表明NDV能杀死肿瘤细胞。结论：NDV能够直接杀死肿瘤细胞，可作为治疗肿瘤的一种新生物制剂。
中图分类号：R73.3；R735.2 文献标识码：A
文章编号：1009-4571(2000)01-0026-02
, 百拇医药
The effect of newcastle disease virus on the human lines of gastric cancer
LI Xiao-jun YIN Zhi-liang TIAN Fu-zhou et al
(General Surgical Center of PLA，General Hospital of Chengdu Military Command,Chengdu 610083)
【Abstract】 Objective：To study the effect of newcastle disease virus (NDV) on the human lines of gastric cancer cells.Methods：The killing effect of NDV on gastric cancer cells was examined by MTT method.Results：The cell viability was higher in control group than that in experimental group (P<0.01)and the hemoglutination titer of NDV was higher in control group.Conclusions：NDV can kill tumor cells and can be used to treat tumor.
, 百拇医药
【Key words】 newcatle disease virus；gastric carcinoma
新城疫病毒(简称NDV)属副粘病毒Ⅰ型，具有抗肿瘤作用，并且已应用于肿瘤的研究[1，2]。本研究探讨了NDV对人胃癌细胞的抑制杀伤作用。
1 材料与方法
1.1 细胞株
人胃癌细胞株SGC-9701、BGC-823、MGC-823。采用RPM 1 640含15%小牛血清培养液进行培养，人胃癌细胞PAMC 82采用DMEM含10%小牛血清培养液培养，条件为37℃、5%CO2培养箱；新城疫病毒由四川省农业科学院引进，本中心接种于SPF-9d鸡胚，增殖后超速离心、收集、纯化病毒，经红血球凝集检测效价为1∶840。
, 百拇医药
1.2 方法
将处于对数生长期的胃癌细胞经胰蛋白酶和EDTA联合消化液进行收集，制备成1×104/ml的细胞悬液，吹打均匀后加入96孔板中。每株细胞平行3孔，并设对照孔，每孔加100 μl癌细胞悬液，在37℃、5%CO2培养箱中继续培养4 h后，实验孔加入NDV 20 μl，对照孔加培养基，继续再培养。分别于12 h、24 h、48 h进行形态学光镜观察和NDV血凝效价测定。
1.3 肿瘤细胞存活率测定
利用MTT与活细胞发生颜色反应原理，用酶联免疫仪570 nm测定OD值，癌细胞存活率由下式计算：细胞存活率＝(实验组光吸收值/对照组光吸收值)×100%。
2 结果
2.1 肿瘤细胞生长的抑制
, 百拇医药
胃癌细胞与新城疫病毒作用后，各孔癌细胞数目随NDV作用的时间延长而减少，在观察的时间段中，癌细胞均出现细胞萎缩、变小并有脱落悬浮，对照组癌细胞铺满单层，生长良好。
2.2 肿瘤细胞存活率和NDV血凝效价变化
随NDV与肿瘤细胞共同作用，在观察的时间段中，NDV表现出强烈的杀伤性，实验组与对照组比较，肿瘤细胞存活率显著降低(表1)，而NDV的效价却逐渐上升(表2)。
表1 NDV与胃癌细胞作用后癌细胞的存活率(%) 胃癌细胞组
NDV(μl)
共同培养时间
P
12 h
, http://www.100md.com
24 h
48 h
Ⅰ
Ⅱ
Ⅰ
Ⅱ
Ⅰ
Ⅱ
SGC9701
20
97
80
98
42
, http://www.100md.com
97
19
<0.01
BGC823
20
98
76
96
39
99
21
<0.01
MGC823
, 百拇医药
20
98
82
97
31
97
17
<0.01
PAMC82
20
97
71
98
, 百拇医药 35
98
20
<0.01
注：Ⅰ表示对照组，Ⅱ表示实验组表2 NDV在不同时间段中的血凝效价 胃癌细胞组
NDV(μl)
实验组
对照组
12 h
24 h
48 h
SGC9701
, http://www.100md.com
20
1∶80
1∶120
1∶220
0
BGC823
20
1∶180
1∶140
1∶180
0
MGC823
20
, 百拇医药
1∶60
1∶120
1∶160
0
GAMC82
20
1∶80
1∶110
1∶180
0
3 讨论
许多研究证明，新城疫病毒能直接杀伤肿瘤细胞而对正常细胞无毒性，且有治疗黑色素瘤成功的报道[2]。
, 百拇医药
本研究中，我们观察了NDV对个体胃癌细胞的直接杀伤作用。在实验孔中，胃癌细胞出现萎缩、体积变小、细胞结构改变和细胞飘浮，对照孔中癌细胞生长良好，无上述现象，且实验孔中癌细胞存活率远远低于对照组(P<0.01)，说明NDV病毒对胃癌细胞具有杀伤作用。证实了NDV病毒能在体外杀死瘤细胞这一观点。许多研究表明，NDV能使带瘤小鼠的肿块消退，对体外培养的瘤细胞具杀伤性。NDV病毒对瘤细胞抑制杀伤作用机制，国内外有3种观点[3，4]：①NDV病毒直接作用于瘤细胞产生细胞毒作用；②NDV病毒促进宿主产生细胞因子，如白介素-2、干扰素等；③NDV病毒蛋白质与瘤细胞部分或整个细胞膜结合，抑制瘤细胞代谢等，此机制与瘤细胞溶解效应有关。所以，研究NDV病毒对体外癌细胞所抑制杀伤作用，为NDV病毒临床应用提供了理论依据。
参考文献：
[1] 蒋晓山，程广泽.NDV/β-榄香烯瘤苗的临床应用及免疫效果的近期评价[J].大连医学院学报，1991,13(4)：1-3.
, 百拇医药
[2] Lorence RM，Rcichard KW，Katubig BB，et al. Complete regresson of human neuroblastoma xenografts in athymic mice atfte local Newcasstle disease virus therapy[J].J Natl Cancer Inst,1994，86：1228-1232.
[3] Cassel WA，Garrett RE.Newcastle disease virus as an antineoplastic agent[J].Cancer,1965，18：863-866.
[4] Reichard KW，Lorence RM，Cascine CJ，et al.Newcastle disease virus selectively kills human tumor cell[J].J Surg Res，1992，52：448-450.
收稿日期：1999-10-25
修回日期：1999-11-04, 百拇医药
单位：李小军 尹致良 田伏洲 赵铁军(成都市成都军区总医院全军普外中心 610083)
关键词：新城疫病毒；胃肿瘤
肿瘤防治杂志000109 【摘要】 目的：研究新城疫病毒(NDV)对人胃癌细胞株的作用。方法：利用MTT方法检测NDV对人胃癌细胞株的杀伤性。结果：NDV作用后的人胃癌细胞株的细胞活性比对照的细胞活性有显著下降(P<0.01)，且NDV血凝效价值显著升高，表明NDV能杀死肿瘤细胞。结论：NDV能够直接杀死肿瘤细胞，可作为治疗肿瘤的一种新生物制剂。
中图分类号：R73.3；R735.2 文献标识码：A
文章编号：1009-4571(2000)01-0026-02
, 百拇医药
The effect of newcastle disease virus on the human lines of gastric cancer
LI Xiao-jun YIN Zhi-liang TIAN Fu-zhou et al
(General Surgical Center of PLA，General Hospital of Chengdu Military Command,Chengdu 610083)
【Abstract】 Objective：To study the effect of newcastle disease virus (NDV) on the human lines of gastric cancer cells.Methods：The killing effect of NDV on gastric cancer cells was examined by MTT method.Results：The cell viability was higher in control group than that in experimental group (P<0.01)and the hemoglutination titer of NDV was higher in control group.Conclusions：NDV can kill tumor cells and can be used to treat tumor.
, 百拇医药
【Key words】 newcatle disease virus；gastric carcinoma
新城疫病毒(简称NDV)属副粘病毒Ⅰ型，具有抗肿瘤作用，并且已应用于肿瘤的研究[1，2]。本研究探讨了NDV对人胃癌细胞的抑制杀伤作用。
1 材料与方法
1.1 细胞株
人胃癌细胞株SGC-9701、BGC-823、MGC-823。采用RPM 1 640含15%小牛血清培养液进行培养，人胃癌细胞PAMC 82采用DMEM含10%小牛血清培养液培养，条件为37℃、5%CO2培养箱；新城疫病毒由四川省农业科学院引进，本中心接种于SPF-9d鸡胚，增殖后超速离心、收集、纯化病毒，经红血球凝集检测效价为1∶840。
, 百拇医药
1.2 方法
将处于对数生长期的胃癌细胞经胰蛋白酶和EDTA联合消化液进行收集，制备成1×104/ml的细胞悬液，吹打均匀后加入96孔板中。每株细胞平行3孔，并设对照孔，每孔加100 μl癌细胞悬液，在37℃、5%CO2培养箱中继续培养4 h后，实验孔加入NDV 20 μl，对照孔加培养基，继续再培养。分别于12 h、24 h、48 h进行形态学光镜观察和NDV血凝效价测定。
1.3 肿瘤细胞存活率测定
利用MTT与活细胞发生颜色反应原理，用酶联免疫仪570 nm测定OD值，癌细胞存活率由下式计算：细胞存活率＝(实验组光吸收值/对照组光吸收值)×100%。
2 结果
2.1 肿瘤细胞生长的抑制
, 百拇医药
胃癌细胞与新城疫病毒作用后，各孔癌细胞数目随NDV作用的时间延长而减少，在观察的时间段中，癌细胞均出现细胞萎缩、变小并有脱落悬浮，对照组癌细胞铺满单层，生长良好。
2.2 肿瘤细胞存活率和NDV血凝效价变化
随NDV与肿瘤细胞共同作用，在观察的时间段中，NDV表现出强烈的杀伤性，实验组与对照组比较，肿瘤细胞存活率显著降低(表1)，而NDV的效价却逐渐上升(表2)。
表1 NDV与胃癌细胞作用后癌细胞的存活率(%) 胃癌细胞组
NDV(μl)
共同培养时间
P
12 h
, http://www.100md.com
24 h
48 h
Ⅰ
Ⅱ
Ⅰ
Ⅱ
Ⅰ
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SGC9701
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, http://www.100md.com
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BGC823
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PAMC82
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, 百拇医药 35
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注：Ⅰ表示对照组，Ⅱ表示实验组表2 NDV在不同时间段中的血凝效价 胃癌细胞组
NDV(μl)
实验组
对照组
12 h
24 h
48 h
SGC9701
, http://www.100md.com
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1∶80
1∶120
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1∶180
1∶140
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3 讨论
许多研究证明，新城疫病毒能直接杀伤肿瘤细胞而对正常细胞无毒性，且有治疗黑色素瘤成功的报道[2]。
, 百拇医药
本研究中，我们观察了NDV对个体胃癌细胞的直接杀伤作用。在实验孔中，胃癌细胞出现萎缩、体积变小、细胞结构改变和细胞飘浮，对照孔中癌细胞生长良好，无上述现象，且实验孔中癌细胞存活率远远低于对照组(P<0.01)，说明NDV病毒对胃癌细胞具有杀伤作用。证实了NDV病毒能在体外杀死瘤细胞这一观点。许多研究表明，NDV能使带瘤小鼠的肿块消退，对体外培养的瘤细胞具杀伤性。NDV病毒对瘤细胞抑制杀伤作用机制，国内外有3种观点[3，4]：①NDV病毒直接作用于瘤细胞产生细胞毒作用；②NDV病毒促进宿主产生细胞因子，如白介素-2、干扰素等；③NDV病毒蛋白质与瘤细胞部分或整个细胞膜结合，抑制瘤细胞代谢等，此机制与瘤细胞溶解效应有关。所以，研究NDV病毒对体外癌细胞所抑制杀伤作用，为NDV病毒临床应用提供了理论依据。
参考文献：
[1] 蒋晓山，程广泽.NDV/β-榄香烯瘤苗的临床应用及免疫效果的近期评价[J].大连医学院学报，1991,13(4)：1-3.
, 百拇医药
[2] Lorence RM，Rcichard KW，Katubig BB，et al. Complete regresson of human neuroblastoma xenografts in athymic mice atfte local Newcasstle disease virus therapy[J].J Natl Cancer Inst,1994，86：1228-1232.
[3] Cassel WA，Garrett RE.Newcastle disease virus as an antineoplastic agent[J].Cancer,1965，18：863-866.
[4] Reichard KW，Lorence RM，Cascine CJ，et al.Newcastle disease virus selectively kills human tumor cell[J].J Surg Res，1992，52：448-450.
收稿日期：1999-10-25
修回日期：1999-11-04, 百拇医药