鱼肝油等非水溶性药品微生物检测方法的探讨
作者：杜平华 秦岩 朱世真
单位：杜平华 秦岩 朱世真(青岛市药品检验所，青岛 266071)
关键词：药品微生物检查，鱼肝油，非水溶性药品，增溶剂
中国海洋药物000511 摘 要 目的：对鱼肝油胶丸等非水溶性药品供试液的制备方法的探讨。方法：采用加入增溶剂，使供试液成为均匀的乳化状态。结果：鱼肝油胶丸常规法的细菌数检出率为16.7%，增溶剂法为25%。结论：增加了微生物的检出率，减少了漏检，保证了实验结果的准确性。
THE DISCUSSION OF MICROORGANISM CONTROL METHOD WITH FAT-SOLUBLE DRUGS TO CORD-LIVER OIL ETC.
Du Pinghua Qin Yan Zhu Shizhen
, 百拇医药
(Qingdao institute for drug control,Qingdao 266071)
ABSTRACT Objective: Discussed the preparation method of the test solution of cod-liver oil as well as fat-soluble drugs.Methods:By adding dissolution enhance to make test solution to be homogeneous.Results:The detection rate of bacteria in cod-liver oil prepared with routine method is 25% but 16.7% with dissolution enhance method,Conclusion:The method increase the detection rate of bacteria and reduce the omission rate so as to ensure the test result veracity.
, 百拇医药
KEY WORDS: Microorganism control, Cod-liver oil,Fat-soluble drug,Dissolution enhance
药品微生物限度检验的供试液的制备应根据供试品的理化特性与生物学特性采用适宜的方法制成均匀的溶液后，进行微生物检验。鱼肝油胶丸及VitE胶丸等非水溶性药物按我国药典[1]规定的常规法加入灭菌水不能制成均匀的供试液，检验结果不准确，我们加入了适当的增溶剂[2]，使供试液成为均匀的乳化状态，取得了满意的结果。
1 材料
1.1 浓鱼肝油胶丸 批号：9902260～9902269 990310～990319 990410～990413
维生素E胶丸 批号：990416～990427 990507～990518 991112～991117均由青岛市鱼肝油厂提供
, 百拇医药
1.2 培养基
胆盐乳糖增菌培养基，营养琼脂培养基，虎红琼脂培养基，十六烷三甲基溴化铵琼脂培养基，卵黄高盐琼脂培养基，伊红美兰琼脂培养基，沙保弱琼脂培养基，均由卫生部中国药品生物制品检定所提供
1.3 增溶剂
山梨糖醇酐单油酸酯：分析纯
单硬脂酸甘油酯：分析纯
聚山梨酸-80：分析纯
均由上海化学试剂厂生产
1.4 菌种
金黄色葡萄球菌(CMCC(B)26003)
铜绿假单胞菌(CMCC(B)10104)
, http://www.100md.com
大肠杆菌(CMCC(B)44102)
白色念珠球菌(CMCC(B)98001)
均由卫生部中国药品生物制品检定所提供
2 方法和结果
2.1 增溶剂的制备
取司盘-80 5g，单硬脂酸甘油酯3g，聚山梨酸-80 10g，置于150mL三角烧瓶中加塞，于115℃高压灭菌30min备用。
2.2 菌液制备
分别取上述菌种各一白金饵。分别接种于5mL营养肉汤液体培养基中置36±1℃。培养18～24h后，取出，备用。
2.3 供试品的制备
, 百拇医药
2.3.1 常规法
取样品10g加入45℃灭菌生理盐水100mL不断摇动。使样品完全溶化即成1：10供试液。
2.3.2 增溶剂法
将上述备用的置于三角烧瓶中的增溶剂置沸水中片刻使其融化。待冷至45℃时，立即加入5g供试品，保温摇匀，随即分次加入预热45℃的无菌的0.9%氯化钠溶液，随加随摇。加入氯化钠溶液总量为85mL，即成均匀的1：20的供试液。
2.4 染菌量
取上述供试液进行细菌数，霉菌数及控制菌的检测。结果见表1。
表1 两种方法置备供试液染菌量检验结果
24批AD胶丸检出微生物批数
, http://www.100md.com
VitE胶丸检出微生物批数
细菌数
霉菌数
致病菌
细菌数
霉菌数
致病菌
±
+
2+
3+
±
+
, http://www.100md.com
2+
3+
±
+
2+
3+
±
+
2+
3+
常规法
2
0
2
, http://www.100md.com
0
0
1
0
0
0
0
1
0
0
0
0
0
0
, 百拇医药
0
增溶剂法
0
2
1
3
0
1
0
0
0
1
0
1
, http://www.100md.com
0
0
1
0
0
0
注：±：每g含菌10个以下 +：每g含菌11～20个
2+：每g含菌21～40个 3+：每g含菌>40个
2.5 增菌及分离培养
取上述供试液各10mL先分别加入胆盐乳糖增菌液及肉汤培养基中，再分别加入上述备用的(菌液10～50个菌)。在37℃培养24h后，分别划线于十六烷三甲基溴化铵琼脂平板、卵黄高盐琼脂平板、伊红美兰琼脂平板、沙保弱琼脂平板，结果见表2。
, http://www.100md.com
表2 两种方法对4种细菌比较试验 细菌名称
加菌量(个)
常规法
增溶剂法
金黄色葡萄球菌
约10～50
+
++
铜绿色假单胞菌
约10～50
+
++
大肠杆菌
, 百拇医药
约10～50
+
++
白色念珠菌
约10～50
—
++
注：—：未检出 +：全平板生长10个以下菌
++：11个以上菌3 讨论
3.1 从表1看两种方法对24批鱼肝油AD胶丸进行细菌、霉菌、致病菌检出结果，常规法检出细菌的有4批，全平板生长10个菌以下的有2批，20～40个菌的有2批，检出率为16.67%，霉菌检出率为0.04%，而增溶剂法制备的供试液检出细菌有6批，全平板生长40个菌以上的有3批，检出率为25%，VitE胶丸共检验了30批，常规法检出细菌的有1批全平板生长菌在11～20个，检出率为0.03%，而增溶剂法检出细菌2批。其中1批全平板生长菌在21～40个，检出率为0.07%，霉菌常规法未检出，增溶剂法有1批检出。检出率在0.33%。
, 百拇医药
3.2 表2用两种方法对四种细菌检出比较试验结果是常规法虽对金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠杆菌能检出，但检出细菌数明显少于增溶剂法，使用常规法未能检出白色念珠球菌，比较试验结果证明增溶剂法对四种常见细菌检出率明显高于常规法。
3.3 从以上检验结果看出，增溶剂法检出率明显高于常规法，常规法置备的供试液分层，为不均匀的供试液，细菌分布不均被供试品包埋，取样无代表性，因此检验结果不准确，可造成漏检，此法不易用于鱼肝油等非水溶性药品的微生物检验。而我们加入的3种增溶剂起到了乳化作用，使供试液成为均匀的乳化状态，可增加微生物的检出率，且保证了结果的准确性，应采用此法。
参考文献
1，中国药典(2000年版)二部.国家药典委员会化学工业出版社，2000.1：92
2，马绪荣，苏德模.药品微生物学检验手册,第一版，科学出版社，2000.3：57, http://www.100md.com
单位：杜平华 秦岩 朱世真(青岛市药品检验所，青岛 266071)
关键词：药品微生物检查，鱼肝油，非水溶性药品，增溶剂
中国海洋药物000511 摘 要 目的：对鱼肝油胶丸等非水溶性药品供试液的制备方法的探讨。方法：采用加入增溶剂，使供试液成为均匀的乳化状态。结果：鱼肝油胶丸常规法的细菌数检出率为16.7%，增溶剂法为25%。结论：增加了微生物的检出率，减少了漏检，保证了实验结果的准确性。
THE DISCUSSION OF MICROORGANISM CONTROL METHOD WITH FAT-SOLUBLE DRUGS TO CORD-LIVER OIL ETC.
Du Pinghua Qin Yan Zhu Shizhen
, 百拇医药
(Qingdao institute for drug control,Qingdao 266071)
ABSTRACT Objective: Discussed the preparation method of the test solution of cod-liver oil as well as fat-soluble drugs.Methods:By adding dissolution enhance to make test solution to be homogeneous.Results:The detection rate of bacteria in cod-liver oil prepared with routine method is 25% but 16.7% with dissolution enhance method,Conclusion:The method increase the detection rate of bacteria and reduce the omission rate so as to ensure the test result veracity.
, 百拇医药
KEY WORDS: Microorganism control, Cod-liver oil,Fat-soluble drug,Dissolution enhance
药品微生物限度检验的供试液的制备应根据供试品的理化特性与生物学特性采用适宜的方法制成均匀的溶液后，进行微生物检验。鱼肝油胶丸及VitE胶丸等非水溶性药物按我国药典[1]规定的常规法加入灭菌水不能制成均匀的供试液，检验结果不准确，我们加入了适当的增溶剂[2]，使供试液成为均匀的乳化状态，取得了满意的结果。
1 材料
1.1 浓鱼肝油胶丸 批号：9902260～9902269 990310～990319 990410～990413
维生素E胶丸 批号：990416～990427 990507～990518 991112～991117均由青岛市鱼肝油厂提供
, 百拇医药
1.2 培养基
胆盐乳糖增菌培养基，营养琼脂培养基，虎红琼脂培养基，十六烷三甲基溴化铵琼脂培养基，卵黄高盐琼脂培养基，伊红美兰琼脂培养基，沙保弱琼脂培养基，均由卫生部中国药品生物制品检定所提供
1.3 增溶剂
山梨糖醇酐单油酸酯：分析纯
单硬脂酸甘油酯：分析纯
聚山梨酸-80：分析纯
均由上海化学试剂厂生产
1.4 菌种
金黄色葡萄球菌(CMCC(B)26003)
铜绿假单胞菌(CMCC(B)10104)
, http://www.100md.com
大肠杆菌(CMCC(B)44102)
白色念珠球菌(CMCC(B)98001)
均由卫生部中国药品生物制品检定所提供
2 方法和结果
2.1 增溶剂的制备
取司盘-80 5g，单硬脂酸甘油酯3g，聚山梨酸-80 10g，置于150mL三角烧瓶中加塞，于115℃高压灭菌30min备用。
2.2 菌液制备
分别取上述菌种各一白金饵。分别接种于5mL营养肉汤液体培养基中置36±1℃。培养18～24h后，取出，备用。
2.3 供试品的制备
, 百拇医药
2.3.1 常规法
取样品10g加入45℃灭菌生理盐水100mL不断摇动。使样品完全溶化即成1：10供试液。
2.3.2 增溶剂法
将上述备用的置于三角烧瓶中的增溶剂置沸水中片刻使其融化。待冷至45℃时，立即加入5g供试品，保温摇匀，随即分次加入预热45℃的无菌的0.9%氯化钠溶液，随加随摇。加入氯化钠溶液总量为85mL，即成均匀的1：20的供试液。
2.4 染菌量
取上述供试液进行细菌数，霉菌数及控制菌的检测。结果见表1。
表1 两种方法置备供试液染菌量检验结果
24批AD胶丸检出微生物批数
, http://www.100md.com
VitE胶丸检出微生物批数
细菌数
霉菌数
致病菌
细菌数
霉菌数
致病菌
±
+
2+
3+
±
+
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2+
3+
±
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2+
3+
±
+
2+
3+
常规法
2
0
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1
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增溶剂法
0
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注：±：每g含菌10个以下 +：每g含菌11～20个
2+：每g含菌21～40个 3+：每g含菌>40个
2.5 增菌及分离培养
取上述供试液各10mL先分别加入胆盐乳糖增菌液及肉汤培养基中，再分别加入上述备用的(菌液10～50个菌)。在37℃培养24h后，分别划线于十六烷三甲基溴化铵琼脂平板、卵黄高盐琼脂平板、伊红美兰琼脂平板、沙保弱琼脂平板，结果见表2。
, http://www.100md.com
表2 两种方法对4种细菌比较试验 细菌名称
加菌量(个)
常规法
增溶剂法
金黄色葡萄球菌
约10～50
+
++
铜绿色假单胞菌
约10～50
+
++
大肠杆菌
, 百拇医药
约10～50
+
++
白色念珠菌
约10～50
—
++
注：—：未检出 +：全平板生长10个以下菌
++：11个以上菌3 讨论
3.1 从表1看两种方法对24批鱼肝油AD胶丸进行细菌、霉菌、致病菌检出结果，常规法检出细菌的有4批，全平板生长10个菌以下的有2批，20～40个菌的有2批，检出率为16.67%，霉菌检出率为0.04%，而增溶剂法制备的供试液检出细菌有6批，全平板生长40个菌以上的有3批，检出率为25%，VitE胶丸共检验了30批，常规法检出细菌的有1批全平板生长菌在11～20个，检出率为0.03%，而增溶剂法检出细菌2批。其中1批全平板生长菌在21～40个，检出率为0.07%，霉菌常规法未检出，增溶剂法有1批检出。检出率在0.33%。
, 百拇医药
3.2 表2用两种方法对四种细菌检出比较试验结果是常规法虽对金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠杆菌能检出，但检出细菌数明显少于增溶剂法，使用常规法未能检出白色念珠球菌，比较试验结果证明增溶剂法对四种常见细菌检出率明显高于常规法。
3.3 从以上检验结果看出，增溶剂法检出率明显高于常规法，常规法置备的供试液分层，为不均匀的供试液，细菌分布不均被供试品包埋，取样无代表性，因此检验结果不准确，可造成漏检，此法不易用于鱼肝油等非水溶性药品的微生物检验。而我们加入的3种增溶剂起到了乳化作用，使供试液成为均匀的乳化状态，可增加微生物的检出率，且保证了结果的准确性，应采用此法。
参考文献
1，中国药典(2000年版)二部.国家药典委员会化学工业出版社，2000.1：92
2，马绪荣，苏德模.药品微生物学检验手册,第一版，科学出版社，2000.3：57, http://www.100md.com