垂体催乳素瘤的病因及发病机制的实验研究
作者：吴雪梅
单位：吴雪梅(中国协和医科大学基础医学院，中国医学科学院基础医学研究所生理学研究室，北京 100005)
关键词：17-β-雌二醇；垂体催乳素瘤；垂体移植；生长因子；点突变
生理科学进展000109 摘要 应用在同一只雄性SD大鼠中，保留原位垂体并在肾囊内植入一异体垂体，同时背部埋植装有17-β-雌二醇(17-β-estradiol,E2)的药泵，经E2在体作用60～120天后，其原位垂体和异体移植入肾囊的垂体同时形成垂体催乳素(prolactin,PRL)瘤的动物模型，研究PRL瘤的发病机制。结果表明，E2长期作用可诱发原位垂体和远离下丘脑的移植垂体同时形成PRL瘤，并伴高PRL血症和PRL基因的高表达；体外和体内实验结果均显示，一些相关生长因子或细胞因子可能与PRL瘤的形成有关；分析正常垂体、原位和移植垂体瘤中PRL基因调控序列的结构，表明在原位垂体瘤中PRL基因近端启动子区发生点突变，突变启动子活性增高，而移植垂体瘤PRL基因相应序列无改变。上述结果提示：垂体PRL瘤可能原发于腺垂体水平，但未排除继发于下丘脑异常的另一可能性；雌激素诱发原位和移植垂体形成PRL瘤的发病机制可能不尽相同；体内神经-内分泌-免疫网络在原位垂体PRL瘤的发生过程可能起一定作用，但其确切证据尚待深入探讨。
, 百拇医药
学科分类号 Q453
Experimental Investigation on the Etiology and Pathogenesis of Pituitary Prolactin-Secreting Tumor
WU Xue-Mei
(Department of Physiology,School of Basic Medicine,Peking Union Medical College & Institute of Basic Medical Sciences,Chinese Academy of Medical Sciences,Beijing 100005)
Abstract Male SD rats transplanted with an extra pituitary in the renal capsule and treated chronically with 17-β-estradiol (E2) were used in the studies on the pathogenesis and the underlying mechanisms of pituitary prolactin-secreting tumor (prolactinoma).The results indicated that after long treatment with E2,prolactin-secreting tumor was generated in both eutopic and ectopic pituitary,accompanied by hyperprolactinemia and overexpression of PRL gene.No apparent difference was observed in histology and ultrastructure between them.Further investigations showed that some growth factors might be involved in the tumorigenesis of prolactinoma in vivo and in vitro.A point mutation was found in the proximal promoter of PRL gene only in eutopic prolactinoma by polymerase chain reaction-single-strand conformation polymorphism (PCR-SSCP),suggesting that the base change in the promoter may be related to the overexpression of PRL gene.This hypothesis has been confirmed by the increased activity of luciferase reporter fused to the mutant promoter in vitro.The coincidence of overexpression of PRL,TGFα and TGFβ1 gene,and the point mutation detected in eutopic pituitary prolactinoma suggested that neuro-endocrine-immune interactions in vivo might be associated with pituitary prolactinoma formation.The mechanisms mediating tumorigenesis of eutopic and ectopic prolactinoma,respectively,may be different.
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Key words 17-β-estradiol;Prolactin-secreting tumor;Pituitary transplantation;Growth factor;Point mutation
垂体催乳素(prolactin,PRL)瘤是内分泌系统较常见的疾病，但其病因和发病机制至今尚不完全清楚[1]。17-β-雌二醇(17-β-estradiol,E2)在体长期作用于敏感种系大鼠，可以诱致垂体催乳素(prolactin,PRL)瘤的形成，并伴高PRL血症和PRL基因的高表达[2，3]。这种动物模型已被广泛应用于垂体PRL瘤发生机制的实验研究。本工作根据文献报道的方法并加以改进，在Sprague-Dawley(SD)大鼠的肾囊内植入一异体垂体，同时背部埋植E2药泵，从整体、组织、细胞和分子水平探讨了垂体PRL瘤的病因和发病机制。由于本实验室从事垂体PRL瘤病因及发病机制的研究已历时近十年，并相继报道了E2不但能诱致F344大鼠形成垂体PRL瘤，也可诱致SD大鼠形成PRL瘤，这种动物模型伴高PRL血症及PRL基因的高表达；PRL瘤的形成除PRL基因异常表达外，原癌基因c-myc、c-ras也同时呈高表达，提示PRL瘤可能是一种涉及多基因改变的疾病；进一步研究的结果表明，在E2致PRL瘤形成的分子机制中，PRL基因是“主效基因”；当集中探讨PRL基因高表达调控机制后，曾发现PRL结构基因的低甲基化和DNase I敏感位点增多等表基因机制是PRL基因高表达的部分机制。因此，本工作是在以往系统研究工作的基础上作进一步深入的探讨，虽然难度比较大，但最终获得一些结果。归纳起来有以下四方面进展。
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一、垂体PRL瘤原发于腺垂体的可能性
与垂体前叶(腺垂体)分泌的其它激素不同的是，下丘脑对垂体PRL分泌的调节以抑制性为主。因而下丘脑异常所引起的垂体前叶PRL细胞脱抑制，可能导致PRL细胞的异常增殖与分泌，从而形成PRL瘤；另一方面，又有证据表明下丘脑病变并非PRL瘤形成的唯一原因。因此，长期以来有关PRL瘤的发生是继发于下丘脑病变还是原发于腺垂体本身，一直是人们争论的焦点[4]。
本实验采用雄性幼年SD大鼠(30天龄)，保留其原位正常垂体同时在远离下丘脑的肾囊内植入一同胞(sibs)大鼠的异体垂体，经E2作用60天和120天后，比较了原位和移植垂体在整体、组织、细胞超微结构和PRL基因表达等方面的差异，设假手术组和单纯垂体移植组大鼠为对照组。所得结果：(1)实验60天和120天以后，E2处理组大鼠的原位垂体和移植于肾囊的异位垂体重量均显著增加，分别达对照组的三倍以上(P<0.01～0.001)；血浆PRL水平升高达对照组的100～200倍(P<0.001)；(2)组织学分析表明，原位和移植垂体前叶均表现嫌色细胞增生，嗜酸细胞减少，细胞呈腺瘤样改变；电镜观察可见PRL细胞增生，多形态核，细胞核增大，核仁明显，粗面内质网、高尔基体极度发达，可见异位胞吐现象；(3)取正常垂体前叶细胞、原位和移植垂体瘤细胞进行体外原代培养，以地高辛标记的PRL cDNA探针对培养细胞进行原位杂交，发现原位和移植垂体瘤细胞中PRL mRNA含量均显著高于正常垂体，其中又以原位垂体瘤中PRL基因表达水平最高。
, 百拇医药
根据Clifton等[2]的标准，E2作用60天和120天的原位和移植垂体均符合PRL瘤的诊断标准，表明E2对远离下丘脑的移植垂体同样具有致瘤作用，且二者在组织形态和细胞超微结构等方面无显著差异。说明PRL瘤有原发于腺垂体的可能性。
二、生长因子对离体垂体前叶细胞增殖和PRL基因表达的影响
对雌激素敏感性乳腺癌的研究表明，生长因子可能是雌激素作用的局部介质[5]。在某些垂体瘤中生长因子的表达与功能发生改变，提示生长因子可能参与垂体瘤的形成[6]；虽然已发现垂体前叶表达某些生长因子及其受体，但这些生长因子的作用，特别是对正常垂体前叶细胞的作用尚不清楚。
我们利用激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)扫描和原位杂交等方法，观察了E2、表皮生长因子(EGF)和转化生长因子β1(TGFβ1)单独或共同作用时,对无血清原代培养的正常大鼠垂体前叶细胞增殖和PRL基因表达的影响，以及不同浓度的E2对两种转化生长因子TGFα和TGFβ1基因表达的影响。结果表明：(1)10-8mol/L E2和10-8mol/L EGF单独作用均显著促进垂体前叶细胞的增殖，并升高PRL mRNA含量(P<0.001)；二者共同作用时，上述作用进一步加强；(2)2ng/ml TGFβ1单独作用显著抑制垂体前叶细胞的增殖和降低PRL mRNA水平(P<0.001)；但与E2共同作用时其抑制作用明显减弱(P<0.01)，同时E2的促增殖和促PRL基因表达作用也显著降低(P<0.01)；(3)10-8、10-6mol/L E2显著升高TGFβ mRNA含量(P<0.001)，同时明显降低TGFβ1基因的表达(P<0.001)，E2对两种转化生长因子的作用与药物剂量具有一定的相关性。
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上述结果提示，E2体外作用于垂体前叶细胞可升调节刺激性生长因子的作用与表达，同时降调节抑制性生长因子的表达与作用。生长因子可能介导E2的部分作用。
三、E2诱发的原位和移植垂体瘤中PRL、TGFα和TGFβ1基因表达的差异
体外实验显示E2的促增殖和促PRL基因表达作用似乎与垂体局部表达的几种生长因子有关，因而我们进一步采用Northern印迹杂交方法观察了E2在体长期作用诱发的原位和移植垂体瘤中PRL、TGFα和TGFβ1基因表达的差异。PRL基因表达与前所述原位杂交结果相似，原位垂体瘤和移植垂体瘤细胞中PRL mRNA的含量，经灰度扫描后进行比较，分别为正常垂体细胞中PRL mRNA含量的4.1倍和2.6倍(P<0.01)，但移植垂体瘤中的PRL表达水平仍低于原位垂体瘤(P<0.05)；同时仅在原位垂体瘤中检测到TGFα和TGFβ1的较高水平表达，而正常垂体和移植垂体瘤中均检测不到这两种转化生长因子的表达。
, 百拇医药
原位垂体瘤中PRL、TGFα和TGFβ1的一致性高表达，进一步提示了生长因子参与垂体瘤形成的可能性。但体内、体外E2对TGFβ1表达的作用似乎不甚一致，鉴于TGFα和TGFβ1既是生长因子也是免疫细胞因子，故推测在体内复杂条件下，TGFβ1可能在某些因子的协同下发挥其促血管形成及抑制免疫等作用，从而促进肿瘤发生与发展。此外，虽然移植垂体瘤也表现PRL基因的高表达，但其表达水平仍低于原位垂体瘤，而且移植垂体瘤中TGFα和TGFβ1的表达水平也与正常垂体无显著差异。上述结果表明，E2诱发原位垂体和移植垂体形成PRL瘤的机制可能不尽相同；也提示垂体PRL瘤病因和发病机制的复杂性，推测其病因除可能原发于腺垂体本身，形成功能自主腺瘤外，也可能继发于下丘脑异常，甚至两者兼而有之。本结果还提示，原位垂体PRL瘤的病因可能涉及神经-内分泌-免疫网络的作用，这些推测正在进一步确证。
四、垂体PRL瘤形成过程中PRL基因高表达调控机制的进一步探讨
, 百拇医药
已知PRL基因转录起始位点上游-200bp是PRL基因表达调控的主要顺式元件之一，该区域内包含4个垂体特异性转录因子Pit-1的结合位点和多个转录刺激因子结合元件[7，8]。目前有关PRL基因调控机制的研究多涉及表基因机制[9，10]，未见对PRL基因结构的分析。而基因调控区碱基序列的改变则可以通过影响反式因子与顺式元件的结合，改变基因调控区空间构象等机制调节基因表达。本工作采用聚合酶链反应(PCR)-单链构象多态性分析(SSCP)、DNA测序和体外荧光素酶融合基因转染等方法，检测了PRL基因近端启动子区-243～+7bp的点突变及其对启动子活性的影响。我们发现原位垂体瘤中PRL基因-36bp位点发生点突变，由胞嘧啶(C)突变为腺嘌呤(A)，而移植垂体瘤PRL基因的相应序列无此改变；突变启动子的活性较野生型启动子约增加50%(P<0.01)。这一结果提示PRL基因近端启动子的点突变可能是原位垂体瘤中PRL基因高表达的分子机制之一；同时再一次表明E2诱发原位垂体和移植垂体形成PRL瘤的分子机制也不完全相同。
, 百拇医药
综上所述，我们首先证明了垂体PRL瘤原发于腺垂体的可能性，然后从整体、组织和细胞及分子水平比较了原位和移植垂体瘤的异同，初步探讨了垂体PRL瘤的发病机制及分子机制。但本实验并未排除垂体PRL瘤形成涉及下丘脑机制的可能性；相反，诸多实验结果都表明了垂体PRL瘤的形成是一个复杂过程，是多因素、多基因、多机制作用的综合结果，其中体内神经-内分泌-免疫间的相互作用不容忽视。本工作为最终阐明垂体PRL瘤的病因和发病机制，以及为临床诊断与治疗垂体PRL瘤提供了一些新的实验依据。
吴雪梅，女，生理学专业。
参考文献
1，Salman M.Tumors of the pituitary gland.In:Moossa AR (Ed).Oncology,William and Wilkins,Maryland,1989.630～640.
, http://www.100md.com
2，Clifton KH,Meyer RK.Mechanism of anterior pituitary tumor induction by estrogen.Anac Rec,1956,125∶65～81.
3，Xu RK,Guo CH,Huang MY,et al.Induction of rat prolactinoma by 17-β-estradiol and its relation to expression of c-myc oncogene.Developmental and Reproductive Biology,1995,4∶64～69.
4，夏朴，史轶蘩.垂体催乳素瘤的病因及发病机理.国外医学内分泌分册，1989，1∶1～4.
5，Dickson RB,Lippman ME.Growth factors in breast cancer.Endocrin Rev,1995,16∶559～589.
, http://www.100md.com
6，Renner U,Pagotto U,Arzt E,et al.Autocrine and paracrine roles of polypeptide growth factors,cytokines and vasogenic substances in normal and tumorous pituitary function and growth:a review.Euro J Endocrinol,1996,135∶515～532.
7，Iverson RA,Day KH,d’Emden M,et al.Clustered point mutation analysis of the rat prolactin promoter.Mol Endocrinol,1990,4∶1564～1571.
8，Gourdji D,Laverriere JN.The rat prolactin gene:a target for tissue-specific and hormone-dependent transcription factors.Mol Cell Endocrinol,1994,100∶133～142.
9，Ngo V,Laverriere JN,Gourdji D.CpG methylation represses the activity of the rat prolactin promoter in rat GH3 pituitary cell lines.Mol Cell Endocrinol,1995,108∶95～105.
10，狄安稞，许荣焜，吴雪梅，等.雌二醇诱致大鼠垂体催乳素瘤形成过程催乳素基因DNase I敏感位点增加.基础医学与临床，1998，18∶25～28., 百拇医药
单位：吴雪梅(中国协和医科大学基础医学院，中国医学科学院基础医学研究所生理学研究室，北京 100005)
关键词：17-β-雌二醇；垂体催乳素瘤；垂体移植；生长因子；点突变
生理科学进展000109 摘要 应用在同一只雄性SD大鼠中，保留原位垂体并在肾囊内植入一异体垂体，同时背部埋植装有17-β-雌二醇(17-β-estradiol,E2)的药泵，经E2在体作用60～120天后，其原位垂体和异体移植入肾囊的垂体同时形成垂体催乳素(prolactin,PRL)瘤的动物模型，研究PRL瘤的发病机制。结果表明，E2长期作用可诱发原位垂体和远离下丘脑的移植垂体同时形成PRL瘤，并伴高PRL血症和PRL基因的高表达；体外和体内实验结果均显示，一些相关生长因子或细胞因子可能与PRL瘤的形成有关；分析正常垂体、原位和移植垂体瘤中PRL基因调控序列的结构，表明在原位垂体瘤中PRL基因近端启动子区发生点突变，突变启动子活性增高，而移植垂体瘤PRL基因相应序列无改变。上述结果提示：垂体PRL瘤可能原发于腺垂体水平，但未排除继发于下丘脑异常的另一可能性；雌激素诱发原位和移植垂体形成PRL瘤的发病机制可能不尽相同；体内神经-内分泌-免疫网络在原位垂体PRL瘤的发生过程可能起一定作用，但其确切证据尚待深入探讨。
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学科分类号 Q453
Experimental Investigation on the Etiology and Pathogenesis of Pituitary Prolactin-Secreting Tumor
WU Xue-Mei
(Department of Physiology,School of Basic Medicine,Peking Union Medical College & Institute of Basic Medical Sciences,Chinese Academy of Medical Sciences,Beijing 100005)
Abstract Male SD rats transplanted with an extra pituitary in the renal capsule and treated chronically with 17-β-estradiol (E2) were used in the studies on the pathogenesis and the underlying mechanisms of pituitary prolactin-secreting tumor (prolactinoma).The results indicated that after long treatment with E2,prolactin-secreting tumor was generated in both eutopic and ectopic pituitary,accompanied by hyperprolactinemia and overexpression of PRL gene.No apparent difference was observed in histology and ultrastructure between them.Further investigations showed that some growth factors might be involved in the tumorigenesis of prolactinoma in vivo and in vitro.A point mutation was found in the proximal promoter of PRL gene only in eutopic prolactinoma by polymerase chain reaction-single-strand conformation polymorphism (PCR-SSCP),suggesting that the base change in the promoter may be related to the overexpression of PRL gene.This hypothesis has been confirmed by the increased activity of luciferase reporter fused to the mutant promoter in vitro.The coincidence of overexpression of PRL,TGFα and TGFβ1 gene,and the point mutation detected in eutopic pituitary prolactinoma suggested that neuro-endocrine-immune interactions in vivo might be associated with pituitary prolactinoma formation.The mechanisms mediating tumorigenesis of eutopic and ectopic prolactinoma,respectively,may be different.
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Key words 17-β-estradiol;Prolactin-secreting tumor;Pituitary transplantation;Growth factor;Point mutation
垂体催乳素(prolactin,PRL)瘤是内分泌系统较常见的疾病，但其病因和发病机制至今尚不完全清楚[1]。17-β-雌二醇(17-β-estradiol,E2)在体长期作用于敏感种系大鼠，可以诱致垂体催乳素(prolactin,PRL)瘤的形成，并伴高PRL血症和PRL基因的高表达[2，3]。这种动物模型已被广泛应用于垂体PRL瘤发生机制的实验研究。本工作根据文献报道的方法并加以改进，在Sprague-Dawley(SD)大鼠的肾囊内植入一异体垂体，同时背部埋植E2药泵，从整体、组织、细胞和分子水平探讨了垂体PRL瘤的病因和发病机制。由于本实验室从事垂体PRL瘤病因及发病机制的研究已历时近十年，并相继报道了E2不但能诱致F344大鼠形成垂体PRL瘤，也可诱致SD大鼠形成PRL瘤，这种动物模型伴高PRL血症及PRL基因的高表达；PRL瘤的形成除PRL基因异常表达外，原癌基因c-myc、c-ras也同时呈高表达，提示PRL瘤可能是一种涉及多基因改变的疾病；进一步研究的结果表明，在E2致PRL瘤形成的分子机制中，PRL基因是“主效基因”；当集中探讨PRL基因高表达调控机制后，曾发现PRL结构基因的低甲基化和DNase I敏感位点增多等表基因机制是PRL基因高表达的部分机制。因此，本工作是在以往系统研究工作的基础上作进一步深入的探讨，虽然难度比较大，但最终获得一些结果。归纳起来有以下四方面进展。
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一、垂体PRL瘤原发于腺垂体的可能性
与垂体前叶(腺垂体)分泌的其它激素不同的是，下丘脑对垂体PRL分泌的调节以抑制性为主。因而下丘脑异常所引起的垂体前叶PRL细胞脱抑制，可能导致PRL细胞的异常增殖与分泌，从而形成PRL瘤；另一方面，又有证据表明下丘脑病变并非PRL瘤形成的唯一原因。因此，长期以来有关PRL瘤的发生是继发于下丘脑病变还是原发于腺垂体本身，一直是人们争论的焦点[4]。
本实验采用雄性幼年SD大鼠(30天龄)，保留其原位正常垂体同时在远离下丘脑的肾囊内植入一同胞(sibs)大鼠的异体垂体，经E2作用60天和120天后，比较了原位和移植垂体在整体、组织、细胞超微结构和PRL基因表达等方面的差异，设假手术组和单纯垂体移植组大鼠为对照组。所得结果：(1)实验60天和120天以后，E2处理组大鼠的原位垂体和移植于肾囊的异位垂体重量均显著增加，分别达对照组的三倍以上(P<0.01～0.001)；血浆PRL水平升高达对照组的100～200倍(P<0.001)；(2)组织学分析表明，原位和移植垂体前叶均表现嫌色细胞增生，嗜酸细胞减少，细胞呈腺瘤样改变；电镜观察可见PRL细胞增生，多形态核，细胞核增大，核仁明显，粗面内质网、高尔基体极度发达，可见异位胞吐现象；(3)取正常垂体前叶细胞、原位和移植垂体瘤细胞进行体外原代培养，以地高辛标记的PRL cDNA探针对培养细胞进行原位杂交，发现原位和移植垂体瘤细胞中PRL mRNA含量均显著高于正常垂体，其中又以原位垂体瘤中PRL基因表达水平最高。
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根据Clifton等[2]的标准，E2作用60天和120天的原位和移植垂体均符合PRL瘤的诊断标准，表明E2对远离下丘脑的移植垂体同样具有致瘤作用，且二者在组织形态和细胞超微结构等方面无显著差异。说明PRL瘤有原发于腺垂体的可能性。
二、生长因子对离体垂体前叶细胞增殖和PRL基因表达的影响
对雌激素敏感性乳腺癌的研究表明，生长因子可能是雌激素作用的局部介质[5]。在某些垂体瘤中生长因子的表达与功能发生改变，提示生长因子可能参与垂体瘤的形成[6]；虽然已发现垂体前叶表达某些生长因子及其受体，但这些生长因子的作用，特别是对正常垂体前叶细胞的作用尚不清楚。
我们利用激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)扫描和原位杂交等方法，观察了E2、表皮生长因子(EGF)和转化生长因子β1(TGFβ1)单独或共同作用时,对无血清原代培养的正常大鼠垂体前叶细胞增殖和PRL基因表达的影响，以及不同浓度的E2对两种转化生长因子TGFα和TGFβ1基因表达的影响。结果表明：(1)10-8mol/L E2和10-8mol/L EGF单独作用均显著促进垂体前叶细胞的增殖，并升高PRL mRNA含量(P<0.001)；二者共同作用时，上述作用进一步加强；(2)2ng/ml TGFβ1单独作用显著抑制垂体前叶细胞的增殖和降低PRL mRNA水平(P<0.001)；但与E2共同作用时其抑制作用明显减弱(P<0.01)，同时E2的促增殖和促PRL基因表达作用也显著降低(P<0.01)；(3)10-8、10-6mol/L E2显著升高TGFβ mRNA含量(P<0.001)，同时明显降低TGFβ1基因的表达(P<0.001)，E2对两种转化生长因子的作用与药物剂量具有一定的相关性。
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上述结果提示，E2体外作用于垂体前叶细胞可升调节刺激性生长因子的作用与表达，同时降调节抑制性生长因子的表达与作用。生长因子可能介导E2的部分作用。
三、E2诱发的原位和移植垂体瘤中PRL、TGFα和TGFβ1基因表达的差异
体外实验显示E2的促增殖和促PRL基因表达作用似乎与垂体局部表达的几种生长因子有关，因而我们进一步采用Northern印迹杂交方法观察了E2在体长期作用诱发的原位和移植垂体瘤中PRL、TGFα和TGFβ1基因表达的差异。PRL基因表达与前所述原位杂交结果相似，原位垂体瘤和移植垂体瘤细胞中PRL mRNA的含量，经灰度扫描后进行比较，分别为正常垂体细胞中PRL mRNA含量的4.1倍和2.6倍(P<0.01)，但移植垂体瘤中的PRL表达水平仍低于原位垂体瘤(P<0.05)；同时仅在原位垂体瘤中检测到TGFα和TGFβ1的较高水平表达，而正常垂体和移植垂体瘤中均检测不到这两种转化生长因子的表达。
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原位垂体瘤中PRL、TGFα和TGFβ1的一致性高表达，进一步提示了生长因子参与垂体瘤形成的可能性。但体内、体外E2对TGFβ1表达的作用似乎不甚一致，鉴于TGFα和TGFβ1既是生长因子也是免疫细胞因子，故推测在体内复杂条件下，TGFβ1可能在某些因子的协同下发挥其促血管形成及抑制免疫等作用，从而促进肿瘤发生与发展。此外，虽然移植垂体瘤也表现PRL基因的高表达，但其表达水平仍低于原位垂体瘤，而且移植垂体瘤中TGFα和TGFβ1的表达水平也与正常垂体无显著差异。上述结果表明，E2诱发原位垂体和移植垂体形成PRL瘤的机制可能不尽相同；也提示垂体PRL瘤病因和发病机制的复杂性，推测其病因除可能原发于腺垂体本身，形成功能自主腺瘤外，也可能继发于下丘脑异常，甚至两者兼而有之。本结果还提示，原位垂体PRL瘤的病因可能涉及神经-内分泌-免疫网络的作用，这些推测正在进一步确证。
四、垂体PRL瘤形成过程中PRL基因高表达调控机制的进一步探讨
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已知PRL基因转录起始位点上游-200bp是PRL基因表达调控的主要顺式元件之一，该区域内包含4个垂体特异性转录因子Pit-1的结合位点和多个转录刺激因子结合元件[7，8]。目前有关PRL基因调控机制的研究多涉及表基因机制[9，10]，未见对PRL基因结构的分析。而基因调控区碱基序列的改变则可以通过影响反式因子与顺式元件的结合，改变基因调控区空间构象等机制调节基因表达。本工作采用聚合酶链反应(PCR)-单链构象多态性分析(SSCP)、DNA测序和体外荧光素酶融合基因转染等方法，检测了PRL基因近端启动子区-243～+7bp的点突变及其对启动子活性的影响。我们发现原位垂体瘤中PRL基因-36bp位点发生点突变，由胞嘧啶(C)突变为腺嘌呤(A)，而移植垂体瘤PRL基因的相应序列无此改变；突变启动子的活性较野生型启动子约增加50%(P<0.01)。这一结果提示PRL基因近端启动子的点突变可能是原位垂体瘤中PRL基因高表达的分子机制之一；同时再一次表明E2诱发原位垂体和移植垂体形成PRL瘤的分子机制也不完全相同。
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综上所述，我们首先证明了垂体PRL瘤原发于腺垂体的可能性，然后从整体、组织和细胞及分子水平比较了原位和移植垂体瘤的异同，初步探讨了垂体PRL瘤的发病机制及分子机制。但本实验并未排除垂体PRL瘤形成涉及下丘脑机制的可能性；相反，诸多实验结果都表明了垂体PRL瘤的形成是一个复杂过程，是多因素、多基因、多机制作用的综合结果，其中体内神经-内分泌-免疫间的相互作用不容忽视。本工作为最终阐明垂体PRL瘤的病因和发病机制，以及为临床诊断与治疗垂体PRL瘤提供了一些新的实验依据。
吴雪梅，女，生理学专业。
参考文献
1，Salman M.Tumors of the pituitary gland.In:Moossa AR (Ed).Oncology,William and Wilkins,Maryland,1989.630～640.
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2，Clifton KH,Meyer RK.Mechanism of anterior pituitary tumor induction by estrogen.Anac Rec,1956,125∶65～81.
3，Xu RK,Guo CH,Huang MY,et al.Induction of rat prolactinoma by 17-β-estradiol and its relation to expression of c-myc oncogene.Developmental and Reproductive Biology,1995,4∶64～69.
4，夏朴，史轶蘩.垂体催乳素瘤的病因及发病机理.国外医学内分泌分册，1989，1∶1～4.
5，Dickson RB,Lippman ME.Growth factors in breast cancer.Endocrin Rev,1995,16∶559～589.
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6，Renner U,Pagotto U,Arzt E,et al.Autocrine and paracrine roles of polypeptide growth factors,cytokines and vasogenic substances in normal and tumorous pituitary function and growth:a review.Euro J Endocrinol,1996,135∶515～532.
7，Iverson RA,Day KH,d’Emden M,et al.Clustered point mutation analysis of the rat prolactin promoter.Mol Endocrinol,1990,4∶1564～1571.
8，Gourdji D,Laverriere JN.The rat prolactin gene:a target for tissue-specific and hormone-dependent transcription factors.Mol Cell Endocrinol,1994,100∶133～142.
9，Ngo V,Laverriere JN,Gourdji D.CpG methylation represses the activity of the rat prolactin promoter in rat GH3 pituitary cell lines.Mol Cell Endocrinol,1995,108∶95～105.
10，狄安稞，许荣焜，吴雪梅，等.雌二醇诱致大鼠垂体催乳素瘤形成过程催乳素基因DNase I敏感位点增加.基础医学与临床，1998，18∶25～28., 百拇医药